油红O染色操作流程.docx

油红O染色操作流程【试剂及材料】1、实验器材名称厂家型号烤箱上海三发科学仪器有限公司DHG-9960A冰冻切片机武汉俊杰电子有限公司JJQ-1.3016粘附载玻片江苏世泰实验器材有限公司188105盖玻片(24*32mm)江苏世泰实验器材有限公司C刀片日本羽毛牌R35正置光学显微镜日本尼康NikonEclipseCi-1.成像系统日本尼康NikonDS-Fi2全景扫描仪宁波江丰生物KF-PRO-1202、主要实验试剂试剂名称厂家货号OCT包埋剂SAKURA（日本樱花）4583油红0sigma00625异丙醇GreagentG75885B苏木素染色液runnerbioBry-OOOl-Ol（公司自配）甘油明胶封片剂碧云天C0187【染色液的配制】1 .油红O母液配置：油红O试剂0.5g,用异丙醇定容到IOom1。2 .油红O工作液的配方：实验前，将母液与蒸储水按3:2稀释，过滤，酒红色且无沉淀。现配现用原则，避免工作液出现沉淀。3 .60%异丙醇的配方：100%异丙醇60m1.+蒸储水40m1.,4度保存。【操作流程】1 .冰冻切片室温放置15min;2 .蒸储水洗涤2次，每次2min；3 .60%的异丙醇溶液洗涤2次，每次2min4 .擦去多余的液体，油红O工作液染色5min,5 .60%异丙醇分化调色（建议严格控制时间，时间太长颜色就褪掉了）。这一步可以在显微镜的辅助下进行，背景无红色。6 .调色结束后，立即水洗。7 .50%苏木精复染30s,水洗5min。8 .甘油明胶封片.【结果参考】脂滴呈红色，细胞核呈淡蓝色【注意事项】1. 油红染色时应避免试剂挥发过多，否则易形成背景沉淀。2. 60%异丙醇分化，应于镜下控制至脂肪组织呈鲜红色，间质无色时为度。