丙型肝炎病毒实验室检测技术规范（2023年修订版）.docx

附件丽程肝炎焉毒安空室桧部）技术胞冕（2023年打版）中国疾病预防控制中心二。二三年十月录前言1第一章丙型肝炎病毒感染41.HCV病毒学特点42.HCV传播途径和致病机制73.HCV感染分期和临床表现84.HCV感染检测标志物95.HCV感染的治疗11参考文献12第二章样品的采集、保存和运输161.样品采集162.样品的接收、保存和运输17参考文献19第三章UCV抗体检测201.HCV抗体检测方法202.IICV抗体检测方法的选择和应用24参考文献25第四章HCV核酸检测271.IICV核酸检测方法272.HCV核酸检测方法的选择和应用28参考文献31第五章IICV抗原检测321.HCV抗原检测方法322.HCV抗原检测方法的选择和应用34参考文献35第六章HCY感染检测流程371.个体诊断相关检测流程及结果报告372.血液筛查相关检测流程及结果报告413.流行病学调查相关检测流程及结果报告44参考文献45第七章HCV基因序列分析471.HCV基因分型检测方法和应用472.HCV耐药检测方法和应用503.HCV分子溯源检测方法和应用52参考文献54第八章HCV细胞培养和中和抗体检测581.IICV细胞培养方法582.HCV细胞培养方法在HCV中和抗体检测中的应用.61参考文献61第九章HCV检测实验室的室内质量控制641.质控品642.质控品的检测频次和位置653.质控规则和质控图664.失控原因分析和处理68参考文献70第十章HCV检测实验室生物安全和职业暴露711.HCV检测实验室生物安全注意事项712.HCV职业暴露及处理措施73参考文献76前丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)引起的一种主要经血液传播的疾病，HCV慢性感染可导致肝脏慢性炎症和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌，对患者的健康和生命产生危害。据世界卫生组织统计，截至2019年全球约有5800万人患有慢性丙型肝炎，2019年丙型肝炎新发感染约150万人，约有29万人死于HCV感染，其中大部分由肝硬化或肝细胞癌引起。2019年仅有21%的慢性丙型肝炎患者得到诊断。世界卫生组织在2016年发布的2016-2021年全球卫生部门病毒性肝炎战略中提出"到2030年消除作为主要公共卫生危害的病毒性肝炎"的目标,其中一个指标是到2030年90%以上的HCV感染者得到诊断。我国在2021年发布的消除丙型肝炎公共卫生危害行动工作方案(2021-2030年)中要求加大丙型肝炎检测力度，提高检测发现率，实施医疗机构和重点人群“应检尽检”、大众人群"愿检尽检”策略、抗体阳性者"核酸检测全覆盖”策略。HCV感染的实验室检测为丙型肝炎患者的检测发现和诊断提供关键依据，并在评估抗病毒治疗效果以及鉴定病毒亚型和耐药性等工作中具有不可或缺的重要作用。自2011年发布丙型肝炎病毒实验室检测技术规范(试行)以来，HCV感染检测技术不断发展，检测试剂性能显著提高，新的检测服务策略不断出现并逐步推广应用。同时，丙型肝炎防治工作的推进对HCV检测提出了新的要求。为实现2030年消除病毒性肝炎的目标,进一步加强我国HCV感染检测的规范性，提高实验室检测质量，中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心组织专家对丙型肝炎病毒实验室检测技术规范进行了修订。近年来由于直接抗病毒药物（DAAs）可使95%以上的丙型肝炎患者得到治愈，世界卫生组织大力倡导简化HCV感染检测和诊断流程，缩短检测和诊断时间，以使丙型肝炎患者尽快得到治疗。本次修订工作参考了世界卫生组织以及国内外对HCV感染检测的最新指南和技术指导文件，充分考虑了HCV感染检测技术和检测策略的进步，广泛征集了丙型肝炎检测和防治等领域专家的修订建议，并切实结合了我国丙型肝炎防治工作的需求。修订后的丙型肝炎病毒实验室检测技术规范（2023版）（以下简称规范）共分十章，包括：丙型肝炎病毒感染，样品的采集、保存和运输，HCV抗体检测，HCV核酸检测，HCV抗原检测，HCV感染检测流程，HCV基因序列分析，HCV细胞培养和中和抗体检测，HCV检测实验室的室内质量控制及HCV检测实验室生物安全和职业暴露。新版规范将对进一步规范和提升我国HCV检测工作质量起到重要推动作用。本规范参加编写和审核的单位：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心、中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所、中国食品药品检定研究院、军事科学院军事医学研究院、北京大学医学部、北京大学人民医院、北京地坛医院、北京友谊医院、上海市疾病预防控制中心、中国科学院上海巴斯德研究所、北京清华长庚医院、北京佑安医院、北京市红十字血液中心、中国医学科学院病原生物学研究所、中国医科大学第一临床学院。本规范编写学术顾问：庄辉、蒋岩本规范编写主持人：金聪本规范编写人员：金聪、邢文革、沈立萍、饶慧瑛、贾继东、鲁凤民、王雅杰、周诚、钟劲、钟平、邱茂锋、李敬云本规范审核人员：魏来、韩孟杰、刘中夫、葛利荣、吴昊、葛红卫、何玉先、姜拥军、李健、马丽英本规范自发布之日起施行，同时终止丙型肝炎病毒实验室检测技术规范（2011年版）本规范适用于全国所有的丙型肝炎病毒检测实验室。本规范解释权属于中国疾病预防控制中心。第一章而租股空痣毒劣丙型肝炎病毒(HepatitisCvirus,HCV)于1989年被正式命名，之前曾称为肠道外传播的非甲非乙型肝炎病毒，1991年被归为黄病毒科(FIaViViridae)。丙型肝炎是由HCV感染引起的一种肝脏炎症，其严重程度从轻微病症到终身严重疾病，包括肝硬化和肝癌。目前尚无针对丙型肝炎的有效疫苗，HCV感染的预防主要依赖于在医疗卫生机构以及在高危人群中减少暴露风险。本章主要介绍了HCV的病毒学特点、传播途径和致病机制、感染分期和临床表现、感染检测标志物以及治疗方案。1.HCV病毒学特点1.1HCV的病毒形态、基因组结构及复制周期HCV属于黄病毒科(FIaViViridae)的丙型肝炎病毒属(Hepacivirus)。HCV是有包膜的单股正链RNA病毒，病毒体为球状颗粒，直径约为4060nm,去除包膜后暴露其中的核衣壳，直径约为33nHCV基因组长度约为9.6kb,编码单一的开放读码框(OPenreadingframe,ORF)。HCV的ORF两侧分别为5'非编码区和3'非编码区，HCV前体蛋白翻译起始于5'非编码区的内部核糖体位点(internalribosomeentrysite,IRES)o翻译启动后首先产生一个约3000个氨基酸的HCV前体蛋白。前体蛋白可被宿主蛋白酶加工成为组成病毒颗粒的三个结构蛋白Core、El和E2,，IRES5NTR同时被HCV自身编码的蛋白酶和宿主蛋白酶共同加工，成为七个非结构蛋白P7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B（图1）。前体蛋白（9.6kb）n»3NTR结构蛋白非结构蛋白Elp7 NS2 NS3 4A 4B NS5ANS5B图1HCV基因组结构C：核衣壳；E1/E2：包膜糖蛋白；P7：离子通道；NS2：自身蛋白酶；NS3：丝氨酸蛋白酶（N端1/3）、解旋酶（C端2/3）；NS4A：丝氨酸蛋白酶辅助因子；NS4B：膜整合蛋白；NS5A：调节病毒复制和组装的因子；NS5B：RNA依赖的RNA聚合酶HCV感染宿主肝细胞后经过病毒颗粒入胞、基因组翻译、RNA复制以及成熟病毒颗粒的组装和释放完成整个复制周期，具体为:HCV附着于肝细胞表面并与相关受体结合，通过内吞作用进入细胞并被转运到胞内体；胞内体的低PH环境促使HCV包膜与胞内体膜融合，触发了HCVRNA的脱壳和释放；HCVRNA释放后由基因组中的IRES开始翻译生成前体蛋白，前体蛋白经蛋白酶切割为成熟的结构蛋白和非结构蛋白并与内质网膜紧密结合，其中NS3/4A、NS4B、NS5A和NS5B与病毒RNA及宿主细胞中参与复制的蛋白组装成复制复合体，在NS5B聚合酶的催化下，以HCV正链RNA为模板启动负链RNA的合成，再以负链RNA为模板合成大量的正链RNA；正链RNA和核心蛋白相接触并被包裹为核心颗粒，从内质网以出芽方式形成病毒颗粒，病毒颗粒经高尔基体由分泌途径出胞（图2）。HCV复制效率很高，每日复制的病毒颗粒可高达102个拷贝。1.2HCV的分型依据HCV基因组序列的同源性和进化距离大小，HCV分为基因型和亚型，按照国际惯例以阿拉伯数字表示HCV基因型，以小写英文字母表示基因亚型，如la、2b、3c等。HCV主要分为6个基因型，HCV基因型和亚型存在明显的地域分布差异。基因1-3型最普遍，呈全球性分布，其中Ia和Ib占所有HCV感染的60%以上。1型和2型主要流行于欧洲、美洲和亚洲；3型主要流行于南亚地区；4型主要流行于中非和中东地区；5型主要流行于南非；6型主要流行于东南亚地区。我国流行的HCV以Ib和2a基因型较为常见，其中以Ib型为主，约占60%以上；其次为2型、3型和6型，4型和5型非常少见。2.HCV传播途径和致病机制HCV的传播途径主要有三种，即血液传播，性接触传播和母婴垂直传播，血液传播是最主要的传播途径。我国自1993年对献血员筛查HCV抗体，2015年开始对HCV抗体阴性的献血员实行HCVRNA筛查，目前通过输血或血液制品传播的现象较为少见。近年来我国HCV最主要的传播方式包括：使用被HCV污染的医疗器械进行侵袭性操作，以共享注射器具方式注射毒品等。HCV不会通过母乳、食品或水源传播，也不会通过与感染者拥抱、握手、共用餐具等方式传播。研究认为HCV感染的致病机制主要分为两个方面，一是细胞免疫介导的肝脏免疫损伤，即HCV感染肝细胞后诱发人体免疫反应，淋巴细胞、自然杀伤细胞等免疫细胞攻击肝细胞造成肝脏病理损害；二是HCV感染的直接致病作用，HCV在肝细胞内复制干扰了肝细胞蛋白合成，引起肝细胞结构和功能改变，造成肝细胞变性和坏死，直接损害肝脏。3.HCV感染分期和临床表现HCV可引起急性或慢性感染。急性HCV感染者通常没有症状或症状轻微，约有30%(15-45%)的感染者不经任何治疗即可在感染6个月之内(其中多数在出现症状后的3个月内)自行清除病毒，这一比例因地区和人群而异。其余70%(55%-85%)的急性HCV感染者会进展到慢性HCV感染，即感染持续6个月以上。如果不经有效治疗，部分慢性丙型肝炎患者可进展为肝硬化和肝细胞肝癌。3.1急性丙型肝炎约80%的急性HCV感染者在临床上通常表现为症状轻微或没有症状的亚临床感染。约20%-25%的患者表现为急性肝炎，通常为无黄疸型(约占75%),仅有不到1%的患者可发生急性肝衰竭。部分急性HCV感染者可能出现乏力、食欲减退、恶心、腹胀和右季肋部不适或疼痛、尿色深、粪便苍白、关节疼痛，少数可伴有低热和黄疸等症状。3.2慢性丙型肝炎慢性丙型肝炎患者大多数无症状或仅有轻微症状，最常见的表现是乏力。部分患者有肝病面容、黄疸、肝掌、蜘蛛痣、以及轻度肝脾肿大。大多数慢性丙型肝炎患者的血清转氨酶(ALT)水平轻度升高，大约1/3的患者ALT水平正常。3.3丙型肝炎肝硬化慢性丙型肝炎患者中约5-15%可在20年内进展为肝硬化。代偿期肝硬化的定义是有肝硬化的病理或影像、内镜、生化及临床证据，但没有发