蓖麻凝集素FAAelisa试剂盒说明书.docx
薨麻凝集素（FAA）elisa试剂盒说明书elisa试剂盒常见组成部分：1）酶和底物：在ELISA中zui常用的酶为HRP和ALP02 ）抗体：在ELISA中应用的抗体可分为多克隆抗体（多抗）和单克隆抗体（单抗）。3 ）抗原：在ELISA中应用的抗原要求有较高的特异性、亲和力和纯度。主要有三类，即自然抗原、人工合成抗原和基因重组抗原。4包被：将免疫活性物质（抗原或抗体）结合于固相载体上的过程称为包被。常用的材料有聚苯乙烯、硝酸纤维薄膜等；常用的方法有吸附法、化学交联法及亲和素-生物素间接包被法5）固相载体：固相载体是ELISA中用以分离结合标记物和游离标记物的主要手段，应与各种免疫活性物质有良好的结合性能并且不改变其免疫活性。常用的固相载体有聚苯乙烯塑料和硝酸纤维素膜。样本实验前准备：ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。（1）血清室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右（2000-3000转/分）o仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。（2）血浆：应根据标本的要求选择EDTA.柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂混合10-20分钟后,离心20分钟左右（2000-3000转/分）仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。(3)尿液：用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。(4)细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。(5)培养细胞检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。(6)组织标本切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS,PH7.40用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8°C的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂，用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。操作步骤1 .标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在di一、第二孔中分别加标准品100,然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50l,混匀;然后从di一孔、第二孔中各取100l分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50L混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50l弃掉，再各取50l分别取50l分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50l,混匀后从第七、第八孔中加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50uL混匀；混匀后从第五、第六孔中各分别取50l加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50,混匀后从第九第十孔中各取50l弃掉。（稀释后各孔加样量都为50l,浓度分别为180ng/L,120ng/L,60ng/L,30ng,15ng/L）o2 .加样:分别设空白孑U空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40lr然后再加待测样品10l（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3 .温育：用封板膜封板后置37。C温育30分钟。4 .配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸储水30（48T的20倍）倍稀释后备用。5 .洗涤：小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6 .加酶：每孔加入酶标试剂50l,空白孔除外。7 .温育：操作同3。8 .洗涤：操作同5o9 .显色：每孔先加入显色剂A50l,再加入显色剂B50l,轻轻震荡混匀,37避光显色15分钟.10 .终止：每孔加终止液50l,终止反应（此时蓝色立转黄色）。11 .测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟。注意事项1 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2 .浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3 .各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4 .封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。5 .底物请避光保存。6 .严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.7 .所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。8 .本试剂不同批号组分不得混用。9 .如需代测或者样本暂时不测定，可立即低温冻存，温度越低越好，中间避免反复冻融，-20°C以下可保存三个月70以下可保存六个月。10试剂使用须知：11. (1)请参照相关法规、文献MSDS等信息，理解并掌握好试剂的特性,再进行安全操作。12. (2)通常购买试剂时一定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的话，更加注意其他保管和管理。13. (3)万一试剂操作者并非专业技术人员。必须在专业人士的指导监督下进行操作。对于使用后的废弃物不要或者旧的试剂应按照相关法律法规正当处理。14. (4)购买后,请务必确认标签上的注意事项；做好预防颠倒,摔坏的措施和管理体制；在使用前再次确认标签上的注意事项，做好必要的安全对策；对没有标明其危害特性、有害特性的，也要慎重地进行操作；必须带好防护用具，小心翼翼进行操作。
