影响原生质体融合的因素.ppt

影响原生质体融合的因素影响原生质体融合的因素 细胞工程细胞工程 植物体细胞杂交过程中，有许多因子可以植物体细胞杂交过程中，有许多因子可以影响最后的结果，其中包括前面提到的原影响最后的结果，其中包括前面提到的原生质体分离和培养的所有影响因子，融合生质体分离和培养的所有影响因子，融合双亲缘关系远近及品种组合，融合方法和双亲缘关系远近及品种组合，融合方法和参数等参数等。融合方法融合方法电融合PEG融合 1.PEG诱导融合法诱导融合法 PEG诱导融合的特点：优点是融合成本低，勿需特殊诱导融合的特点：优点是融合成本低，勿需特殊设备；融合子产生的异核率较高；融合过程不受物种设备；融合子产生的异核率较高；融合过程不受物种限制。缺点是融合过程繁琐，限制。缺点是融合过程繁琐，PEG可能对细胞有毒可能对细胞有毒害。害。PEG作用机理：作用机理：Kao等认为，由于等认为，由于PEG分子具有轻微分子具有轻微的负极性，故可以与具有正极性基团的水、蛋白质和的负极性，故可以与具有正极性基团的水、蛋白质和碳水化合物等形成碳水化合物等形成H键，从而在原生质体之间形成分子键，从而在原生质体之间形成分子桥，其结果使原生质体发生粘连进而促进原生质体融桥，其结果使原生质体发生粘连进而促进原生质体融合；另外，合；另外，PEG能增加类脂膜的流动性，也使原生质能增加类脂膜的流动性，也使原生质体的核、细胞器发生融合成为可能。体的核、细胞器发生融合成为可能。2电融合法电融合法 Electrofusion,Electrically induced fusion 与与PEG融合相比，电融合有三大优点：融合相比，电融合有三大优点：不存在对细胞的毒害问题；不存在对细胞的毒害问题；融合效率高；融合效率高；融合技术操作简便。融合技术操作简便。电融合仪的结构特电融合仪的结构特点：点：交变电场部分交变电场部分 高频直流电击部分高频直流电击部分 电融合的基本过程：电融合的基本过程：细胞膜的接触：当原生质体置于电导率很低的细胞膜的接触：当原生质体置于电导率很低的溶液中时，电场通电后，电流即通过原生质体溶液中时，电场通电后，电流即通过原生质体而不是通过溶液，其结果是原生质体在电场作而不是通过溶液，其结果是原生质体在电场作用下极化而产生偶极子，从而使原生质体紧密用下极化而产生偶极子，从而使原生质体紧密接触排列成串；接触排列成串；膜的击穿：原生质体成串排列后，立即给予高膜的击穿：原生质体成串排列后，立即给予高频直流脉冲就可以使原生质膜击穿，从而导致频直流脉冲就可以使原生质膜击穿，从而导致两个紧密接触的细胞融合在一起并圆球化。两个紧密接触的细胞融合在一起并圆球化。关于融合参数：交流电压关于融合参数：交流电压 交变电场的振幅频率交变电场的振幅频率 交变电场的处理时间交变电场的处理时间 直流高频电压直流高频电压 脉冲宽度脉冲宽度 脉冲次数脉冲次数 Thank you