酶活性的影响因素.ppt

酶活性的影响因素 知识背景知识背景 pH、温度、紫外线、重金属盐、抑制剂、激活剂等通过影响酶的活性来影响酶促反应的速率；酶的浓度、底物的浓度等不会影响酶活性，但可以影响酶促反应的速率。纳氏试剂（Nessler）是指一种利用红外可见分光光度法原理用于测定空气中、水体中氨氮含量的试剂。碘离子和汞离子在强碱性条件下，会与氨反应生成红棕色胶态化合物，此颜色在波长420nm左右会有强烈的吸收。而生成的这类红棕色胶态化合物的量会与其溶液的吸收值成正比，可用测试反应液的吸收值而测定氨氮的含量。实验原理：尿素在酸、碱、酶作用下（酸、碱需加热）能水解成氨和二氧化碳 新鲜大豆中含有较高活性的尿素酶，可以水解尿素生成NH3 CO(NH2)2+H2O-2NH3+CO2 尿素养在尿素酶作用下，在中性或酸性环境下生成碳酸胺，在NaOH环境下生成Na2CO3和NH3、NH3与纳氏试剂作用，生成棕黄色碘化双汞胺 尿素酶 NaOH CO(NH2)2+H2O -(NH4)2CO3-NH3 NH3+纳氏试剂(HgI2.2KI)-NH2.Hg2I3(棕黄色)实验材料：器材：控温水浴锅（每个实验室3个），制冰机，电磁灶，不锈钢锅，白瓷板，试管、滴管、移液管（1-2ml）试剂：蒸馏水，1%淀粉液，1%蔗糖液，0.1%尿素液，大豆尿素酶溶液，0.1%CuSO4，0.1%HgCl2，0.1%NaCl，1M NaOH，0.5M H2SO4，纳氏试剂，班氏试剂，各种pH缓冲液：5.0；6.8；8.0酶活性的影响因素假设酶活性的影响因素假设 1、酶的活性受、酶的活性受pH的影响的影响 2、酶的活性受底物特异性的影响、酶的活性受底物特异性的影响 3、酶的活性受温度的影响、酶的活性受温度的影响 4、酶的活性受重金属离子的影响、酶的活性受重金属离子的影响1、酶的活性受、酶的活性受pH的影响的影响 步骤 1、向四支10ml试管，分别标号1，2，3，4 2、将1%尿素液3ml分别倒入四支试管中 3、向前三支支试管中分别倒入1ml的pH为5.0，6.8，8.0的缓冲液，四号试管加入1ml的蒸馏水 4、向四支试管中加入等量的大豆尿素酶溶液五滴，轻摇后静置3分钟 5、向四支试管中加入等量的纳氏试剂 2ml，摇匀。6、观察并记录实验现象实验记录项目底物（/ml）加入的pH和蒸馏水（/ml）纳氏试剂（/ml）实验现象试管1试管2试管3试管42、酶的活性受底物的特异性的影响、酶的活性受底物的特异性的影响 步骤 1、向四支10ml试管，分别标号1，2，3，4 2、向四支试管中分别加入3ml的蒸馏水，1%淀粉液，1%蔗糖液，0.1%尿素液 3、向四支试管中加入等量的大豆尿素酶溶液五滴，轻摇后静置3分钟 4、向四支试管中加入等量的纳氏试剂2ml，摇匀。5、观察并记录实验现象实验记录项目底物（/ml）大豆尿素酶溶液（/ml）纳氏试剂（/ml）实验现象试管1试管2试管3试管43、酶的活性受温度的影响、酶的活性受温度的影响 步骤 1、向四支10ml试管，分别标号1，2，3，4 2、向四支试管中分别加入3ml0.1%尿素液 3、将四支试管分别置于0C，30C，100C，室温的水浴中预温10分钟 3、向四支试管中加入等量的大豆尿素酶溶液五滴，轻摇后静置3分钟 4、向四支试管中加入等量的纳氏试剂2ml，摇匀。5、观察并记录实验现象实验记录项目底物（/ml）温度（/C）大豆尿素酶溶液（/ml）纳氏试剂（/ml）实验现象试管1试管2试管3试管44、酶的活性受重金属离子的影响、酶的活性受重金属离子的影响 步骤 1、向六支10ml试管，分别标号1，2，3，4，5，6 2、向六支试管中分别加入3ml0.1%尿素液 3、将六支试管分别加入0.1%CuSO4 0.1%HgCl2 0.1%NaCl 1M NaOH 0.5M H2SO4，蒸馏水各2ml 3、向六支试管中加入等量的大豆尿素酶溶液五滴，轻摇后静置3分钟 4、向六支试管中加入等量的纳氏试剂2ml，摇匀。5、观察并记录实验现象实验记录项目底物（/ml）加入的重金属离子和蒸馏水（/ml）大豆尿素酶溶液（/ml）纳氏试剂（/ml）实验现象试管1试管2试管3试管4试管5试管6