蛋白质组学相关考题.ppt

1.生物质谱所用的内肽酶是生物质谱所用的内肽酶是 。（北京大学。（北京大学2010试题；北试题；北京大学京大学2009试题）试题）A CPA B CPB C CPY D Trypsin知识要点知识要点（1）CPA，CPB，CPY是羧肽酶是羧肽酶A、羧肽酶、羧肽酶B、羧肽酶、羧肽酶Y。羧肽酶（羧肽酶（carboxypeptidase）是一类肽链外切酶，它能）是一类肽链外切酶，它能专一地从肽链的专一地从肽链的C-末端开始逐个降解，释放出游离氨基酸，末端开始逐个降解，释放出游离氨基酸，用于用于C-末端氨基酸残基分析。末端氨基酸残基分析。（2）Trypsin是胰蛋白酶，是最常用的蛋白水解酶，专一性是胰蛋白酶，是最常用的蛋白水解酶，专一性强，只断裂赖氨酸或精氨酸的羧基参与形成的肽键。用固强，只断裂赖氨酸或精氨酸的羧基参与形成的肽键。用固相法测序时，用胰蛋白酶裂解得到的肽段可以通过双功能相法测序时，用胰蛋白酶裂解得到的肽段可以通过双功能交联剂交联剂对苯二异硫氰酸直接偶联到固相载体上。对苯二异硫氰酸直接偶联到固相载体上。解题思路解题思路 多注意常用酶的英文及缩写根据知识要点多注意常用酶的英文及缩写根据知识要点1、2，排除，排除A、B、C。参考答案参考答案 D 2.简述2-3种检测蛋白质间相互作用的方法。（北京大学2010试题；中国科学院2009试题）知识要点知识要点（1）蛋白质）蛋白质-蛋白质相互作用的研究已被纳入蛋白质组学的蛋白质相互作用的研究已被纳入蛋白质组学的研究范畴。研究范畴。（2）蛋白质相互作用的方法包括：酵母双杂交、）蛋白质相互作用的方法包括：酵母双杂交、Far Western印迹技术、印迹技术、GST融合蛋白质沉降技术、蛋白质芯融合蛋白质沉降技术、蛋白质芯片技术、等离子表面共振技术、免疫共沉淀技术和荧光共片技术、等离子表面共振技术、免疫共沉淀技术和荧光共振能量转移法等。振能量转移法等。解题思路解题思路 首先要了解蛋白质首先要了解蛋白质-蛋白质相互作用和蛋白质蛋白质相互作用和蛋白质-DNA相互作相互作用方法的区别，然后根据知识要点选取用方法的区别，然后根据知识要点选取2-3种方法进行阐种方法进行阐述。述。参考答案参考答案（1）酵母双杂交系统（）酵母双杂交系统（yeast two-hybird system）：是利）：是利用杂交基因通过激活报道基因的表达探测蛋白用杂交基因通过激活报道基因的表达探测蛋白-蛋白的相互蛋白的相互作用。真核生物转录因子具有作用。真核生物转录因子具有DNA结合结构域（结合结构域（BD）和转）和转录激活结构域（录激活结构域（AD）,这两个结构域分开时仍分别具有功能，这两个结构域分开时仍分别具有功能，但不能激活转录，只有它们以适当途径在空间上较为接近时，但不能激活转录，只有它们以适当途径在空间上较为接近时，才能重新具有转录因子活性，并激活报道基因表达。才能重新具有转录因子活性，并激活报道基因表达。（2）免疫共沉淀（）免疫共沉淀（IP）：基本原理是抗原和抗体之间专一性）：基本原理是抗原和抗体之间专一性地相互作用而沉淀，从而保留下来，其是一种经典的检测蛋地相互作用而沉淀，从而保留下来，其是一种经典的检测蛋白质相互作用的方法。其实验过程比较简单，裂解细胞后，白质相互作用的方法。其实验过程比较简单，裂解细胞后，加入抗体，抗原被沉淀下来后洗涤，去除非特异性结合，再加入抗体，抗原被沉淀下来后洗涤，去除非特异性结合，再分析复合体。抗体可以是单克隆，也可以使多克隆。分析复合体。抗体可以是单克隆，也可以使多克隆。（3）蛋白质芯片（）蛋白质芯片（protein chip）：蛋白质芯片可以用来大）：蛋白质芯片可以用来大规模筛选蛋白质之间的相互作用，将一个蛋白质芯片与荧光规模筛选蛋白质之间的相互作用，将一个蛋白质芯片与荧光标记的探针蛋白孵育，洗脱非特异性结合的蛋白后，可以通标记的探针蛋白孵育，洗脱非特异性结合的蛋白后，可以通过扫描芯片上的荧光点来检测稳定的相互作用蛋白点。过扫描芯片上的荧光点来检测稳定的相互作用蛋白点。8.研究蛋白质相互作用可以采用研究蛋白质相互作用可以采用 、等方法。等方法。（北京大学（北京大学2008试题）试题）14.蛋白质双向电泳（蛋白质双向电泳（2-DE）是根据蛋白质分子量大小和）是根据蛋白质分子量大小和 的不同来分离蛋白质的技术。（中山大学的不同来分离蛋白质的技术。（中山大学2007试题）试题）5.蛋白质芯片技术基本上是基于（蛋白质芯片技术基本上是基于（）方法中的原理。（深）方法中的原理。（深圳大学圳大学2009试题；中科院上海生命科学研究所试题；中科院上海生命科学研究所2006试题）试题）A Northern blot B Western blot C Southern blot D Eastern blot10.用来研究蛋白质用来研究蛋白质-蛋白质间相互作用的实验技术是（蛋白质间相互作用的实验技术是（）。）。（中国科学院（中国科学院2007试题）试题）A 酵母双杂交技术酵母双杂交技术 B 原位杂交技术原位杂交技术 C RACE技术技术 D SAGE 技术技术25.免疫沉淀法（免疫沉淀法（immunoprecipitation）一般用于分离）一般用于分离（）。（中山大学）。（中山大学2008试题）试题）A DNA B RNA C 蛋白质蛋白质 D 脂类脂类名词解释：1.Edman降解(Edman degradation)（苏州大学2008试题；浙江大学2004试题）2.等电聚焦（isoelectrofocusing，IEF/EF）（苏州大学2008试题；华南理工大学2005试题）3.蛋白质组学（proteomics）（深圳大学2010试题；武汉大学2003试题）4.蛋白质组（proteome）（深圳大学2010试题；协和医科大学2006试题；武汉大学2005试题）5.双向电泳（two-dimentionlal gel electrophoresis，2-DE）（四川大学2006试题；军事医学科学院2000试题）6.酵母双杂交系统（yeast two-hybird system）（浙江大学2007试题；协和医科大学2006试题）7.SDS电泳（SDS-PAGE）（中国农业大学2006试题；南开大学2006试题）8.蛋白质印迹法（Western blotting）（南开大学2006试题）9.蛋白质测序（protein sequencing）（军事医学科学院2000试题）10.免疫沉淀（immunoprecipitation，IP）（浙江大学2008试题）2.简述双向电泳研究蛋白质组的优缺点。（北京大学2010试题）6.请例举三种蛋白质分子量的测定方法，并简述其原理。（中国海洋大学2003试题）答：（答：（1）凝胶阻滞分析法（）凝胶阻滞分析法（EMSA）：）：DNA在电场中发生在电场中发生迁移，至一定位置形成条带，其迁移距离与其分子大小、迁移，至一定位置形成条带，其迁移距离与其分子大小、形状和所带电荷有关。形状和所带电荷有关。DNA和蛋白质结合后其大小和形状和蛋白质结合后其大小和形状发生变化，因而其在电泳时迁移的距离也会发生变化，形发生变化，因而其在电泳时迁移的距离也会发生变化，形成不同的条带；（成不同的条带；（2）DNase印迹法：印迹法：DNA与蛋白质结与蛋白质结合后，结合部位的合后，结合部位的DNA因受到蛋白质的保护而不被因受到蛋白质的保护而不被DNase降解，而未与蛋白质结合的部位则对降解，而未与蛋白质结合的部位则对DNase敏敏感；（感；（3）酵母单杂交：首先将已知的特定顺式作用元件）酵母单杂交：首先将已知的特定顺式作用元件构建到最基本启动子的上游，把报告基因连接到最基本启构建到最基本启动子的上游，把报告基因连接到最基本启动子下游，然后将编码待测转录因子动子下游，然后将编码待测转录因子cDNA与已知酵母转与已知酵母转录激活结构域融合表达载体导入酵母细胞，该基因产物如录激活结构域融合表达载体导入酵母细胞，该基因产物如果能够与顺式元件相结合，就能激活最基本启动子，使报果能够与顺式元件相结合，就能激活最基本启动子，使报告基因表达；（告基因表达；（4）染色质免疫共沉淀（）染色质免疫共沉淀（ChIP）它的基本）它的基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质原理是在活细胞状态下固定蛋白质DNA复合物，并将其复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，通过对目的片段的纯化与检测，从而获得蛋白片段，通过对目的片段的纯化与检测，从而获得蛋白质与质与DNA相互作用的信息。相互作用的信息。10.列出三种研究列出三种研究DNA和蛋白质相互作用的方法并和蛋白质相互作用的方法并简要说明其原理。（中国科学院简要说明其原理。（中国科学院2010试题；兰州大试题；兰州大学学2008试题）试题）13.酵母双杂交技术是利用其什么特点建立起来的？酵母双杂交技术是利用其什么特点建立起来的？在科学研究中有什么作用？（武汉大学在科学研究中有什么作用？（武汉大学2008试题）试题）答：酵母双杂交技术是利用真核生物转录调控因子的组件答：酵母双杂交技术是利用真核生物转录调控因子的组件式结构特征，因为这些蛋白质往往是由两个以上相互独立式结构特征，因为这些蛋白质往往是由两个以上相互独立的结构域构成，其中的结构域构成，其中DNA结合结构域（结合结构域（BD）和转录激活）和转录激活结构域（结构域（AD）是转录因子发挥功能所必需的。单独的）是转录因子发挥功能所必需的。单独的BD能与特定基因的启动区结合，但不能激活基因的转录，而能与特定基因的启动区结合，但不能激活基因的转录，而由不同转录调控因子的由不同转录调控因子的BD和和AD所形成的杂核蛋白却能行所形成的杂核蛋白却能行使激活转录的功能。将拟研究的编码使激活转录的功能。将拟研究的编码“猎物猎物”蛋白的基因蛋白的基因与与AD序列结合，编码序列结合，编码“诱饵诱饵”蛋白的基因与蛋白的基因与BD序列结合，序列结合，形成两段融合基因，并在同一菌株内表达，若形成两段融合基因，并在同一菌株内表达，若“诱饵诱饵”蛋蛋白与白与“猎物猎物”蛋白在核内存在相互作用，就可以重新形成蛋白在核内存在相互作用，就可以重新形成完整的有活性的转录因子，从而激活报告基因的转录。因完整的有活性的转录因子，从而激活报告基因的转录。因此根据报告基因的表达与否，即可判断此根据报告基因的表达与否，即可判断“诱饵诱饵”蛋白与蛋白与“猎物猎物”蛋白之间是否有相互作用。酵母双杂交常用于研蛋白之间是否有相互作用。酵母双杂交常用于研究新蛋白质的相互作用和发现蛋白质的功能。究新蛋白质的相互作用和发现蛋白质的功能。11.现有四种蛋白质，其相对分子质量和等电现有四种蛋白质，其相对分子质量和等电点分别为：点分别为：A,Mr=62kDa，pI=10；B,Mr=12kDa，pI=7；C,Mr=28kDa，pI=4；D,Mr=9kDa，pI=5，分别用，分别用CM-纤维柱层纤维柱层析，析，Sephadex G-75，双向电泳，双向电泳，SDS-PAGE电泳分离这四种蛋白质，试写出前两电泳分离这四种蛋白质，试写出前两种方法的分离结果和后两种方法的分离图种方法的分离结果和后两种方法的分离图谱。（北京大学谱。（北京大学2010试题）试题）在纤维素与葡聚糖分子上结合有一定的离子基团，当结合在纤维素与葡聚糖分子上结合有一定的离子基团，当结合阳离子基团时，可换出阴离子，则称为阴离子交换剂。如阳离子基团时，可换出阴离子，则称为阴离子交换剂。如二乙氨乙基（二乙氨乙基（Dicthylaminoethyl，DEAE）纤维素。在）纤维素。在纤维素上结合了纤维素上结合了DEAE，含有带正电荷的阳离子纤维素，含有带正电荷的阳离子纤维素OC6H14 N+H，它的反离子为阴离子（如，它的反离子为阴离子（如Cl-等），等），可与