线粒体DNA在砷致人支气管上皮细胞毒性中的作用.docx

线粒体DNA在碑致人支气管上皮细胞毒性中的作用王小娟I,朱震，邓哈依，李春春，安艳,苏州大学医学部公共卫生学院卫生毒理教研室，江苏苏州215123(1.;*责任作者：)摘要：【目的】线粒体(mitochondrion)是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包被的细胞器，是细胞中制造能量的结构，线粒体DNA(mtDNA)是唯一存在于人类细胞质中的DNA分子，独立于细胞核染色体外的基因组，具有自我复制、转录和编码功能，线粒体基因组因其突变率而，来源确定等特点，成为分子进化研究中有力的工具。碎及其化合物是确定的人类致癌物，会造成多器官的细胞毒性。本研究旨在探讨线粒体DNA拷贝数是否影响碑对细胞的毒性作用。【材料和方法】采用演化乙锭(ethidiumbromide,ElBr)诱导法构建mtDNA拷贝数降低的HBE细胞株(P-HBE),通过营养缺陷、real-timePCR鉴定mtDNA敲低HBE细胞模型的建立，随后换用不同浓度的亚硅酸钠处理mtDNA敲低HBE细胞(P-HBE)和未用EtBr处理的对照细胞(p+HBE),利用MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒测定其细胞毒性。【结果】50ngmlEtBr诱导8天后的HBE细胞在不含丙酮酸及尿喀嚏的p0筛选培养基中培养，同时以母本细胞做对照，24h后筛选培养基培养液变黄，细胞皱缩,边缘模糊，2-3d后，细胞大量漂浮死亡；real-timePCR结果显示，其mtDNA拷贝数降低了96.13%；MTT细胞毒性结果显示在相同浓度亚硅酸钠作用下，P-HBE细胞相对增殖率多数高于p+HBE细胞,利用SPSS19.0计算得出亚硅酸钠染毒P-HBE细胞IC50为88.351M,p*HBE细胞为74.093M,同时细胞增殖率在70%以上的亚碑酸钠浓度分别为26.834M(P-HBE)、19.937M(p+HBE)。【结论】本实验采用EtBr诱导法成功构建了线粒体DNA拷贝数减少的pHBE细胞株，且mtDNA拷贝数减少的细胞株对碑的毒性具有一定的抵抗性，这可能与细胞凋亡减少相关。关键词：碑，人支气管上皮细胞，线粒体DNA,细胞毒性