铁皮石斛原球茎液体培养技术规程.docx
ICS65.020.20DB3205苏州市农业地方标准DB3205/T257-2017铁皮石斛原球茎液体培养技术规程2018-01-01实施2017-12-31发布苏州市质量技术监督局发布本标准按GB/T1.1-2009标准化工作导则第1部分：标准结构和编写进行编写。本标准由苏州市农业委员会提出。本标准起草单位：苏州天成新农生物科技有限公司。本标准主要起草人：张杰、吴红升、关剑、王昕怡。铁皮石斛原球茎液体培养规程1范围本标准规定了铁皮石斛原球茎形态结构、培育技术要求、转接扩增、规模化培育、日常管理和采收等。本标准适用于铁皮石斛液体培养规模化生产。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB14881食品安全国家标准食品生产通用卫生规范GB29921食品安全国家标准食品中致病菌限量3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3. 1原球茎某些种属的植物种子萌发后形成的圆球状幼嫩的簇状芽，或者植物组织或器官离体培养时，由此离体组织或器官发育而形成的圆球状嫩芽。4形态结构形态为圆球形，每个原球茎上带有几十至上百个小叶芽；株高1.5Cnr3cm,叶芽呈球状排列，颜色为淡绿，偶或可见淡绿幼小嫩叶。5技术要求3.1 环境条件环境条件符合GB14881要求，于十万级洁净生产车间培育。温度控制在25°C28°C,相对湿度为40%60%,光线为柔和均匀的自然光和增补可调控的红蓝光，红蓝光比例为4:1,光照强度为2000LUX,光照时间为每天8h。3.2 水质条件水质符合GB6682实验二级用水要求。3.3 营养要求采用MS液体培养基为基础培养基，具体条件如下：转接扩增采用MS培养基+0.5(mgL)NAA+0.5(mgL):KT+20g/L葡萄糖。规模化培育采用MS培养基+5%麦芽糖。6转接扩增6.1 操作要求环境条件符合GB14881要求，于百级洁净区域内，所需使用的器材和培养基均需经湿热121。C高压灭菌处理15min20mino6.2 转接操作转接时选用生长状态良好的种芽作为种源。按照鲜重40gL50gL转接至2L20L玻璃瓶中。向培养瓶中通入无菌空气，空气流速为0.75Lmin1Lmino培养周期为30d45do7规模化培育7.1 操作要求环境条件符GB29921要求，操作应于十万级洁净区域进行。培育温度、湿度和光照条件如5.1。7.2 培育操作按照40gL50gL转接至2L20L玻璃瓶中。向培养瓶中通入无菌空气，空气流速为0.75Lmin1Lmin,培养周期为30d45do待铁皮石斛原球茎生长至液体培养系的2/3时，进行采收。8日常管理定期观察生长状态，一旦发现细菌或真菌污染或大面积褐化，立刻移出洁净间进行湿热高温灭菌。9采收铁皮石斛原球茎进行单批次间采收，并用实验二级水缓慢冲洗3min511in,用脱水机30OrPnI/min离心脱水。晾干后，可直接制备成铁皮石斛原球茎鲜芽，或65烘干储存。
