牛蒡炭疽病病原鉴定及其致病性.docx
牛劳炭疽病病原鉴定及其致病性牛努(.ArctiumIap1.H1.D属桔梗目，菊科二年生草本植物，广布欧亚大陆，模式标本采自西欧。主要分布于中国、西欧、克什米尔地区、欧洲等地。中国各地普遍分布，以瘦果和根入药，具有宜肺透疹、散结解毒，清热解毒、疏风利咽等功效，具有较高的药用价值和经济价值川。随着牛劳种植面枳不断增大，病需问题日渐突出，目前,牛第主要病害为果避病、白酚病、细菌性叶斑病、花叶病等.2014年7月5日，在辽宁省冰峪沟发现牛劳炭疽病，引起叶片变色坏死，最终导致全株枯死.本文对牛劳炭疽病的症状特征和病原形态进行了描述，结合症状及形态学分析，对病原菌进行了种类鉴定，同时对病原菌的生物学特性进行了系统研究，自在为牛劳炭疽病的症状识别和田间防治奠定理论基础“1材料与方法1.1 病样采集与病原菌分离和纯化病样采自辽宁省冰峪沟.采用常规组织分离法进行病原菌的分离，单电纯化后保存备用1.2致病性测定将供试菌株移置PDA平板上培养7d后用无衡水洗F分生池子，配制成1.OXIam1.分生胞r悬浮液。采取田间生长一致、健康牛药叶片，经流水和无菌水依次冲洗，分别将菌悬液均匀喷施叶片正面、背面，巴于保鲜盒中于室温保湿培养。每处理3次重复，以喷施亮菌水为对照，逐日观察发病情况。1.3 病原菌鉴定1.3.1 病原菌形态观察将菌种移至PDA平板匕25U恒温培养,观察描述菌落、分生胞子盘、分生抱子形态。1.3.2 病原菌的rDNA-S扩增及序列分析菌株接种于马铃著菊菌糖液体培养基中，25C,16OrPm条件下震荡培养7d,收集菌丝体用于DNA提取，DN/'提取采用试剂盒提取法。PCR扩增选用真菌通用引物1TS5(5'-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3')，ITS4<5,-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3,),G3PDHfor+(5'-ArrGACATCGTCGCTGTCAACGA-3')和G3PDHrev+(5-ACCCCACTCGTTGTCGTACCA-3,),反映体系和程序参考赵晖等方法。PCR产物由上海生工生物工程技术服务有限公司测序,结果在GenBank(http:/www.ncbi.n1.m.nih.gov/)进行B1.AST比对分析。2结果与分析2.1牛努炭疽病症状牛劳炭疽病主要为害叶片。受宙叶片首先开始出现1.550mm.不规则形的褐色病斑，病他交界明显(图1)病斑出现无规则排列的小黑点，逐渐扩大、合并，最终导致全侏性枯死。湿度大时病斑部可见橘藏色的抱子角，叶斑背面形成白色紫状值丝(图2)。图I牛分炭疽病症状A：田间症状：B：成熟叶片病斑特征：C：植株顶端叶片症状：D：病斑小黑点形态特征Fig.1SymptomsofKn1.hmcnnyonZractykfdcchinrnnis.Na(u111symp<nm%:IkSympdimsofMature1.eaveswithnumcm1.cionsundacervu1.us;C:SymptomsofupperICQvCs：D:1.esionwithmanydu1.1.brSetUCandmuci1.uginoCo(Iidia1.masses2.2病原菌形态特征该菌在PDA培养基菌落圆形,边缘不整齐平坦,初为白色,后渐变为橘黄色;气生菌丝不发达(图2)。分生抱子盘呈暗褐色至黑色的垫状突起.ISI形至椭圆形，可见刚毛,大小为98.95-137.07(115.91)m(3)a刚毛褐色，多隔膜(1-5),不分枝,长度为8158126.46m0分生抱子粳长筒形，无色,无隔，顶端略尖,大小为10x3m.26×240m).分生抱子为纺锤形或极形,单胞,无色,中间略凹,两端不对称,一端稍小,内含1-2个油球;分生胞子大小为8.43-15.36×1.67-3.32m(11.26×2.40m)。图2牛为炭疥病苗4天形态特征(A正面：B并面)Hg.2Cu1.tureC1.arue1.eiiUicDfAn(IirxrtX)Se图3牛劳炭疳病例子形态特征（A:分生剂F形态特征：B:刚尼形态:C:胞子襁？）Fig.3PuthogcnCharacicriMkofAnthrncnosc2.3致病性流定（7.23）齿体接种3片牛劳叶片3d均开始发病，叶片开始出现黑色斑点，病斑逐渐扩大，与田间典型牛努炭疽病斑相同，对照健康植株未发病（图4）。对接种发病后的病部再分离，均能获得与原分离菌株致的病原菌。根据柯赫氏法则证明，该病菌为牛芽炭疽病的致病菌。图4牛芳炭抗病致病性测定Fig.4Pathngcnkrhy1.estofAmhxnosc3结论牛菊炭疸病为辽宁苍术生产中新发生病害，引起叶片变色坏死，最终导致全株枯死，对牛努产量影晌较大。经病原菌培养性状、形态学特征、致病性测定，鉴定牛劳炭疽病菌为炭?1.'i¾（CoUetotrichumXinimondsii。U1.牛劳Arctium1.appa1.1987.中国植物志.78(1)：058
