9.肉与肉制品中 L-( )-谷氨酸含量的测定（报批稿）.docx

ICS67.120.10CCS×22G日中华人民共和国国家标准GB/T××××X202x/ISO4134：2021肉与肉制品中1.-(+)-谷氨酸含量的测定Determinationof1.+)-g1.utamicacidcontentinmeatandmeatproducts(ISO4134：2021.MeatandmeatproductsDeterminationof1.-(+)-g1.utamicacidcontentReferencemethodJDT)××××-×X-XX发布××X×-×X-XX实施国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会本文件按照GB/T1.12020标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草.本文件等同采用6。4134：2021«肉与肉制品1.-（+A谷氨酸含量的测定参考方法.本文件做了下列最小限度的塘步性改动：一为与现有标准协调，将标准名称修改为肉与肉制品中1.Y+）谷赛酸含量的测定.请注意本文件的某些内容可能涉及专利,本文件的发布机构不承担识别专利的责任.本文件由中国商业联合会提出.本文件由全国肉禽蛋制W标准化技术委员会（SAC/TC399）归口.本文件起单单位：华测检测认证集团股份有限公司、安徽国泰众信桧测技术有限公司、谙尼测试集团四川有限公司、福建中桂华日食品安全枪测有限公司.广州检物检测认证集团有限公司.合肥工业大学、山东鼎科检测技术有限公司、中山洪力健质食品产业研究院有限公司、利诚检源认证集团股份有限公司.广州质监督洛洲研究院、中国肉类食品综合研究中心.上海微谙检遗认证有限公司,味斯美食品科技（安吉）有限公司,深圳市虹彩桧测技术有限公司.青岛元信检测技术有限公司,实朴检测技术（上海）股份有限公司、厦门泓益检测有限公司、南京市食品药品监&检验院、台州市食品药品检验研究院、田庆市华测检测技术有限公司、中国商业联合会.本文件主要起草人刘文秋、际洪周、场柳、冉光芝、陈桂友、温文娟、王志英、癖、陈新文、卷除、王守伟、赵冰、赵燕、W,花逢超、黄胜明,雒飞飞、金宙.赵叶旗、胡文彦、JSM丽、赵铮、魏杰、脱刘扬、赵彦远、刘振宇.鲁振.肉与肉制品中1.-(+)-谷氨酸含量的测定1范围本文件描述了21定肉与肉制痣中游原！-(+)-谷氨酸含量的分光光度法和光吸牧的标法.本文件适用于肉与肉制品.2规货性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，具最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.ISO648实验空玻国器In1.单容量吸量险(1.aboratOryg1.aSSWareSing1.e-vo1.umepipettes)S：GB/T12808-2015实劲空/璃仪耨fett三tt(!SO648：2008.NEQ)ISO1042实验室装璃器皿单标线容量瓶(1.aboratoryg1.asswareOne-markvo1.umetricf1.asks)2：GB/T12806-2011实验空破璃仪IHi单砥线容II1.SaSoIo421998.NEQ)ISO1442肉和肉制品水分含量的测定尊窿法(MeatandmeatproductsDeterminationofmoisturecontentReferencemethod)S:GBS009.32016食肺安全B1.iR标准食品中水分的8!定(IS。1442:1997.NEQISO3696分析实版室用水规范和试SS方法(WaterfOrana1.ytiCa1.IaboratoryUSeSpecificationandtestmethods)注：GB/T66822008分析交给京用水规格和试蜿方法(】S。3696:1987.MOD)ISO8655-2活塞式容量测量仪第2部分：活塞式移液器(Piston-operatedvo1.umetricapparatusPart2:Pipettes)3术语和定义下列术语和定义适用于本文件.3.1游福1-(+)-谷氨酸free1.-(÷)-9utamicacid以游88态存在于肉与肉制痣中的1.-(+)-谷21酸和谷强酸斑.4原理用高懿酸溶液提取测试样品中的游离1.-()-谷原酸(GH,N。,).提取液陶心.过谑，加水稀释至合适浓度，调节PH至10.烟酰胺腺阴吟二核音酸(NAD)在谷氨酸税氢酶的存在下被1.-(卜谷氨酸还假，见公式(1).所得到的还原态烟酷胶原噤吟二核甘酸(NADH)在心肌黄酹的存在下与硬硝基氧化四氨建蓝(INT)反应，见公式(2),在490nm波长下测量所得甲澳的含量，升计曾测试样品的游离1.-(+)-谷氨酸含量.>4M膛氧AbC5HoNO4÷NADH6OiNADH÷NH1NADH+1NT+H.”“黄入AD+申面.5抽样抽取200g以上的有代表性样品.如果不立即分析，应在0sC-4工或-18'C及以下储存.6试样制备用适当的设笛（见7.2.1）均质化试样.制备时试样的温度不超过25如果使用坟肉机，至少处理2次.将制备好的试样装入合适的密封容器中,应在均质后24h内分析.如果不立即分析,应在0C4-C或-18（及以下储存.7分光光度法7.1 试剂除非另有说朗，本方法所用试剂均为分析纯，水为ISO3696规定的二级水或一级水.除无机化合物溶液（7.1.1和7.1,2）外,所有溶液应存放在洁净的具塞捺色玻璃瓶中.7.1.1 高敏酸溶液:C=1.OmOI/1.警告:离氯酸与质化物、易燃物、脱水剂、还原剂接触会导致火灾或煨炸，使用者应知悉以危险性，只体请参阅附录A中列出的安全措德.量取高氨酸（70%0。=1.67gm1.）8.6m1.,用水稀释至100m1.7.1.2氮氧化押溶液：c=4mo1.1.2mo1.1.,0.5mo1./1.和0.02mo1.1.的224K复化”州适R水部学冷却后山水修修至K）Om1.，=4疝1儿.M112化*JIiR水溶冷却后I用水*杵至1<”>m1.<=211jO,ImB25E1.2me1.i（K化第溶清IIoE1.容R段中J1.I水桥密至刻育V=ISmo1.量取0.1m1.2mo1.氢氧化押溶液于10m1.容量瓶中，用水稀释至刻度，c=0.02mo1./1.7. 1.3溶液R1：硝酸三乙醇胺媛冲溶液,pH=8.6溶液A:检取1.86g三乙醇胺盐酸盐溶于约25mUK中，用2mo1.氧玩化珅溶液（7.1.2）调节PH至8.6,加入0.68g辛其本酚十乙二85艇（例如TritOnX-100）,用水稀蟀至100m1.混匀.溶液B：称取0.86g磷酸氮二钾（K,HPOJ和7mg磷酸二氢押（KH,POJ溶解在水中并稀释至100m1.混匀.溶液R1：量取20m1.溶液A与5m1.jg液B混匀，该溶液在0"C6'C下储存，有效期2个月.7.4.4 溶通R2：NAD和心肌黄梅（破辛Itt胺脱氢病EC"1.8.1.4）的混合溶液,pw=11mg/m1.心肌黄»,不低于41Um1.称取110mgNAD和约8mg（不低于401U）心肌黄的,放入耳塞玻璃瓶中.加入10.0m5;溶解1>EC编号是指国场生物化学联合会,EnzyEenodatureWIsevienAmsterdaE,196S中恰出的86分类境号.井混匀.该溶液在0P6下避光储存,有效期1周.7.4.5 溶液R3：氨化硝硝基四哇(INT)溶液，2-(4-碘笨幕)-3«-硝基笨的-5-笨基氧化四理，p=0.6mg/m1.称取6mgINT于具塞的棕色小瓶中，加入IOOm1.水溶料井泯匀.该溶液在0<6下避光储存,有效期4周.7. 1.6溶液R123：溶液R1.溶液R2和溶液R3的混合溶液量取6m1.溶液R1.2m1.溶液R2和2m1.溶液R3于具圣的愎色顼调瓶中，并在测试前溜匀.该溶液在室温下避光储存可稳定1h.8. 1,7谷氨酸脱氮的(G1.DH)溶液(Eu1.4.1.3),不低于9001Um1.标取Iomg(约900IU)的冻干谷氨酸脱氢酶(G1.DH)于具室的小瓶中，加入ImuK溶解井泯匀.该酹悬浮在疣酸筱、乙二胺四乙酸(EDTA).谷瓢酰胺陵溶液中时，在OP6P下储存，有效期12个月.9. 1.81.-(+)-谷氨酸标准储备溶液：P=100OmgZ1.林取约50.0mg-(+)-谷氨酸储确至0.0001g),溶研于约25m1.zK中，用2mo1.氢运化钾溶液(7.1.2)两节PH至5-6.用0.02mo1./1.氢氧化押溶液(7.1.2)缓慢调节PH至7.0,并用水稀释至50m1.混匀该溶液在0。(：6OC下储存,有效期6个月.10. .91.-(+)谷敏酸标准溶液：P=100mg/1.量取5.Om1.1-(+)-谷叁酸标准储备溶液(7.1.8)于50m1.容量瓶(7.2.8)中，用水稀释至刻度并混匀.该溶液现配现用.11. ,101-(+)-谷氨酸系列标准溶液：p=5mg1.10mg1.15mg1.20mg1.30mg1.和40mg1.分别量取0.50m1.、1.00m1.1.50m1.2.00m1.3.0Om1.和4.0Om1.1.-(+)-谷氨1酸标准溶液(7.1.9)于6个Iom1.8于瓶个.2.8)中,用水稀释至刻度并混匀.该溶液现配现用.7.2仪器和设备1.1.1 1择品均质化设笛，包括高速旋转切割机,或袋有孔径不超过4.0mm板的绞肉机.1.1.2 混匀器：搅拌器或雅荡器.1.1.3 商心机：配备50m1.三Jc100m1._离心管.1.1.4 分析天平:感量0.001g、0.0001g.1.1.5 恒温干煤箱.1.1.6 PH计.1.1.7 注绥:直径约15cm,快速或中速.7.2. 8单标容量瓶：容量为10m1.、50m1.和100m1.,应符合ISO1042的B圾标准.7.2.9 单标移液管，容量为50m1.25m1.和1m1.应符合ISO648的B级标准.7.2.10 单通道或多通道移液器和吸头：5m1.1000U1.2001.和1001.,符合ISO8655-2的要求.7.2.11塑料抹刀或盖子：用抹刀搅拌比色皿或挂前盖上盖子的比色Dn来混匀内容物.7.2.12版外分光光度计:配符在波长为490nm处具有最大透射率的泄光片或光谙仪.7.2.13比色皿：1Omm光程长度.7,3潴定步舞7.3.1通则如果需要检食是否达到可壬且性要求，则应进行2次单独的测定.7.3.2试样称取制备好的试样约25g或其他适合的质量(mJ，精确至0.001g.7.3.3提取7.3.3.1 向试样中加入50m1.商旅酸溶液(7.1.1),用混匀器(7.2.2)混匀.7.3.3.2 将匀浆后的样品转移至离心营(7.2.3)中,在IoCC的温度下，以约200Og的径向加速度或等效速度(例如3S00rmin至4000rmin)离心IOmin.嘏去脂肪层，将上清液通过遮纸(7.2.7)4入100m1.锥形瓶中，弃去前10m1.的送液.7.3.3.3 用移液管(7.2.9)吸取25m1.溶液至离心管(7.2.3)中，用4mo1./1.氢家化钾溶液(7.1.2)调节pH至78,然后用2mo/1.和0.5mo