二苯胺试剂鉴定DNA.docx
:笨胺试剂:鉴定DNA.二苯胺试剂的配制A液:1.5g二苯胺溶于100m1.冰醋酸中,再加15m1.浓硫酸,用棕色瓶保存。如冰醋酸呈结晶状态，则需加温后待其熔化,再运用。B液：乙醛的体积分数为0.2%的溶液。配制:将O1.m1.B液加入到10m1.,A液中,现配现用。DNA的粗提取与鉴定试验原理1. DN在NaC1.溶液中的溶解度，是随着NaC1.的浓度的变更而变更的。当NaC1.的物质的量浓度为0.14mo1./1.时,DN的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在NaC1.溶液中的DNA析出。2. DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。3. DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DN的试剂。留意事项1,步骤3析出含DNA的黏制物中，蒸储水要沿烧杯内壁缓缓加入,不能一次快速倒入。2.试验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。试验用具鸡血细胞液（510m1.）；体积分数为95%的冷酒精，蒸馀水，质量浓度为01.g/m1.的柠椽酸钠溶液，物质的量浓度分别为2mo1./1.和0.015mo1./1.的NaC1.溶液，二茉胺试剂：烧杯（100m1.,1个，50m1.,500m1.,各2个），漏斗，试管（20m1.,2个）,玻璃棒，滴管，量筒（100m1.,1个），纱布，镜子，滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。试验原理：1 .析出溶解在NaC1.溶液中的DNA02 .用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。3 .DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。方法步骤:1 .提取细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。5min2 .溶解DNA：3 .析出含DNA的黏稠物：蒸储水300m1.,逆时针方向搅拌，缓慢4 .过滤：取黏稠物5 .再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。3min6 .过滤：取滤液。7 .提取出含杂质较少的DNA,逆时针方向搅拌，稍慢。5min8 .DNA的鉴定：沸水浴5min【试验十二】DNA的粗提取与鉴定试验原理DNA在氮化钠溶液中的溶解度，是随着氧化钠的浓度的变更而变更的。当氯化钠的物质的量浓度为2mo1./1.时，DNA的溶解度最大,浓度为0.14mo1./1.时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。DNA不溶于95%的酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DA.f）N中含有脱氧核糖，能与二苯胺（沸水浴）反应生成蓝色物质，因此，二苯胺可以作为鉴定DA的试剂。目的要求1 .学会DNA的粗提取和鉴定的方法。2 .视察提取出来的DNA物质的颜色和形态。材料用具材料：活鸡或鲜血鸡血。仪器：离心机、恒温水裕锅、载玻片，玻璃棒，滤纸，滴管，量简（100m1.,1个），烧杯（100m1.,1个，50m1.、500m1.各2个）,试管（20m1.,2个），漏斗，试管夹，纱布。试剂：酒精的体积分数为95%的溶液（试验前置于冰箱内冷却24h）,蒸饱水，柠檬酸钠的质量浓度为0.1.gm1.的溶液，氯化钠的物质的量浓度分别为2mo1./1.和0.015mo1./1.的溶液，二苯胺试剂。方法步骤试验前须要制备鸡血细胞液（由老师完成），制备的方法是：取柠檬酸钠的质量浓度为0.Ig/m1.的溶液（抗凝剂）100m1.,置于500m1.,烧杯中。将宰杀活鸡流出的鸡血（约180m1.）注入烧杯中，同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠核酸钠溶液充分混合，以免凝血。然后，将血液倒入离心管内，用1000r/min的离心机离。2min,此时血细胞沉淀于离心管底部。试验时，用吸管除去离。心管上部的澄清液,就可以得到鸡血细胞液。1 .提取鸡血细胞的细胞核物质将制备好的鸡血细胞液5In1.-IOm1.,注入到50m1.烧杯中。向烧杯中加入蒸储水20m1.,同时用玻璃棒充分搅拌5min,使血细胞加速裂开。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500m1.。取其滤液。2 .溶解细胞核内的DNA将氯化钠的物质的量浓度为2mo1.的溶液40矶加入到滤液中，并摇动烧杯，使其混合匀称，这时DNA在溶液中呈溶解状态。3 .析出含DNA的粘稠物沿烧杯内壁缓缓加入蒸饰水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，留意视察丝状物呈什么颜色。接着加入热储水，溶液中出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时停止加入蒸饰水（这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14mo1.ZDo4 .滤取含DNA的粘稠物用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3中的溶液至50Om1.的烧杯中，含DNA的粘稠物被留在纱布上。5 .将DNA的粘稠物再溶解取1个50m1.烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为2mo"1.的溶液20m1.。用钝头铢子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中。6 .过滤含有DNA的氯化钠溶液取】个100m1.烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液。取其滤液，DNA溶于滤液中。7 .提取含杂质较少的DNA在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积分数为95%的溶液50m1.（运用冷却的酒精，对DA的凝集效果较佳），并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要成分就是DNA。留意视察丝状物是什么颜色的。8 .DNA的鉴定取两支20In1.的或管，各加入氯化钠的物质的量浓度为0.015mo1./1.的溶液5m1.,将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4m1.1.的二苯胺试剂。混合匀称后，将试管置于沸水中加热5min,待试管冷却后，视察并且比较两支试管中溶液颜色的变更。将视察的结果填写在试验报告册上。结论步骤8的2支试管中溶液颜色的变更说明白什么？将得出的结论填写在试验报告册上。探讨1 .提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液中的上清液？2 .步骤回和步骤3中都须要加入蒸储水，两次加入的作用相同吗？为什么？3.DNA的直径约为20X10-IOnb试验中出现的丝状物的粗细是否表示1个DNA分子宜径的大小？
