Meta分析桥接网络药理学的黄连阿胶汤治疗2型糖尿病临床疗效评价及潜在作用机制初探.docx

目的基于Meta分析和网络药理学研究方法，评价黄连阿胶汤治疗2型糖尿病（T2DM）的临床疗效，初探其作用机制。方法首先全面检索CNKI、VIPWanfangPubMedTheCochrane1.ibraryWebofscience数据库，查找截至2020年5月的黄连阿胶汤治疗T2DM的随机对照试验，根据Cochrane风险偏倚评估工具对纳入的文献进行评价，采用ReVieWManager软件进行定量合成；而后基于网络药理学，筛选黄连阿胶汤中的化学成分及其作用靶点，与T2DM靶点映射对比后利用生物信息学技术进行关键通路的相关注释，探讨黄连阿胶汤治疗T2DM的潜在机制。结果Meta分析纳入15篇随机对照试验（RCTs）,共计1254例受试者，结果显示，西药常规治疗的基础上联合使用黄连阿胶汤可显著提高有效率，且降血糖和调血脂效果更优；网络药理学通过在线数据库共得到258种化学成分和985个作用靶点，其中60种成分、121个靶点和181条途径与T2DM的治疗密切相关，主要涉及晚期糖基化终末产物及其受体（AGE-RAGE）信号通路、缺氧诱导因子-1（HlF-I）信号通路、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路、胰岛素抵抗（IR）等。结论根据已有研究数据，黄连阿胶汤联合西药常规治疗可增加T2DM的临床疗效，降低血糖和调节血脂，主要通过改善IR、减轻炎症反应、降低氧化应激等治疗T2DM。2型糖尿病（Type2diabetesmellitus,T2DM）是一种由于胰岛素抵抗（Insulinresistance,IR）而导致的代谢异常、主要特征为慢性高血糖的内分泌代谢性疾病。据统计，全球约有4.25亿患者被确诊为T2DM,我国占27%,居世界首位1。患者长期处于高血糖状态可导致多种并发症，如心血管疾病、肾病、眼病等，严重危害患者的身体健康，给社会带来经济负担2。目前，临床上多采用双胭类、磺服类等药物控制血糖，然而这些西药只针对T2DM某个特定的病因进行治疗，因此长期使用具有一定的不良反应3。中药因其疗效稳定、作用温和持久、毒性和不良反应小等特点在治疗T2DM这一方面具有不可替代的优势。黄连阿胶汤出自伤寒论，又称黄连鸡子汤（伤寒指掌图卷四），由黄连、阿胶、黄苓、芍药、鸡子黄组成，具有扶阴散热之功用4。现代药理学表明，黄连阿胶汤能够有效改善血脂代谢，且对T2DM导致的心血管疾病具有一定的预防作用5。然而，黄连阿胶汤成分复杂，目前的研究缺乏足够的循证医学依据，且其治疗T2DM的作用机制尚不明确。1999年循证医学被引入中医药领域，为中医药研究提供了新的思路6,Meta分析作为循证医学中的重要方法，其基本理念是将同一问题的多个研究结果或数据定量合成，得到样本量更大、覆盖范围更广的结果，使研究结论更具可靠性和代表性。网络药理学最早由HOPkinS网于2007年提出，是一门基于系统生物学和多向药理学进行新药设计的学科，网络药理学认为药物是通过多靶点间的相互作用而产生的综合效应，与中药的核心思想十分契合9。基于以上研究现状，本研究在Meta分析的基础上使用网络药理学，综合评价黄连阿胶汤治疗T2DM疗效的同时，初步探索其潜在的作用机制，为临床提供循证医学依据，也为后续的研究奠定基础。1材料与方法1.1 Meta分析1.1.1 文献纳入标准（1）国内外公开发表的随机对照试验(randomizedcontrolledtrials,RCTs)；(2)语言限定为中文和英文；(3)研究对象为T2DM患者，即空腹血糖(fastingbloodglucose,FBG)27.0mmol1.或餐后2h血糖(2hourbloodglucose,2hBG)ll.lmmol1.10o1.1.2 文献排除标准(1)未满足纳入标准；(2)动物实验；(3)文献综述;(4)设计不严谨、数据不完整的文献；(5)重复发表的文献；(6)患者具有其他合并症(如糖尿病合并失眠症)。1.1.3 评价指标FBG2hBG、糖化血红蛋白(HbAIc)、甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(totalcholestero1.TC)>低密度脂蛋白(Iowdensitylipoprotein,1.DDo1.1.4 文献检索策略检索的数据库包括：中国知网(ChinaNationalKnowledgeInfrastructure,CNKI)>维普资讯中文期刊服务平台(VIP)、万方期刊数据库(WANGFANG)、Pubmed()、TheCochrane1.ibrary()和Webofscience(),检索时间为各数据建库至2020年5月，采用主题词与自由词结合的方式，中文检索词主要包括“黄连阿胶汤”、“黄连鸡子汤”、“2型糖尿病”、“二型糖尿病”；英文检索词主要包括"DiabetesMellitus,TyPe2”、"HuanglianejiaoDecoction”等。1.1.5 数据提取及其质量评价根据纳入排除标准对所有文献进行筛选，对于满足条件的文献，提取其相关信息，包括：题目、作者、单位、年份、干预措施和观察指标等。根据Cochrane风险偏倚评估工具对纳入文献进行质量评价，内容包括：(1)随机序列的产生；(2)分配隐藏；(3)对受试者或研究者施盲；(4)数据完整性；(5)是否存在选择性报告结果；(6)其他偏倚。根据文献内容，每项评价结果分为“1.owrisk"、“Highrisk"、“Unclearrisk”。以上操作均由两名研究员独立汇总完成。1.1.6 数据统计与分析采用ReviewManager5.3软件进行数据分析，根据异质性检验的P值以及12指数对纳入的文献进行异质性评估，如各研究间具有同质性(即P20.1且I2W50%),采用固定效应模型分析，反之则采用随机效应模型。选择比值比(Oddsratio,OR)、标准化均数差(STDmeandifference,SMD)及其95%置信区间(confidenceintervals,CD描述结果。根据对照组干预措施不同分为“常规治疗+一种药物”和“常规治疗+两种药物”进行亚组分析。1.2 网络药理学方法1.2.1 黄连阿胶汤化学成分的收集通过TCMSP数据库(TraditionaichineseMedicinesystemspharmacologyDatabaseandAnalysisPlatform)检索黄连阿胶汤的化学成分，以其ADME参数中的口服生物利用度(oralbioavailability,OB)230%、类药性(drug-likeness9D1.)20.18作为标准进行筛选11，同时通过查阅相关文献，对黄连阿胶汤中虽不满足ADME参数但具有明确药理作用的成分进行补充，得到黄连阿胶汤的活性成分。1.2.2 成分对应靶点库和糖尿病相关靶点库的构建使用TCMSP数据库、Batman-TCm数据库(ABioinformaticsAnalysisToolforMolecularMechanismofTraditionalChineseMedicine,)检索黄连阿胶汤中各化学成分的靶点，筛选具有相关信息的化学成分。以"DiabetesMellitus,TyPe2”为检索词在CTD数据库(ComparativeToxicogenomicsDatabase)GeneCards数据库()查找与T2DM相关的靶点。筛选成分靶点与疾病靶点的交集靶点，即为黄连阿胶汤治疗T2DM的潜在作用靶点。123蛋白互作网络的构建与分析将交集靶点导入STRING数据库(https:/string-db.org/),获取蛋白互作网络，保存成TSV格式的文件。将文件中的Nodel>Node2和COmbinedSCOre信息导入到CytoscapeV4.6.1软件，获得黄连阿胶汤治疗T2DM靶蛋白的相互作用网络，随后利用Cytoscape软件中的NetworkAnalyerw功能对PPI网络进行拓扑学分析，以Degree值%参考，计算各节点的“连接度"、“接近中心性(closenesscentrality,CC)”和"中介中心度(betweennesscentrality,BC),确定网络中的关键靶点。1.2.4 GO生物分析与KEGG通路分析GO生物分析通过生物途径(Biologyprocess)>分子功能(Molecularfunction)>细胞定位(Cellularlocation)3个方面进行说明与注释。KEGG通路分析采用的是京都基因与基因组百科全书(KyotoEncyclopediaofGenesandGenomespathway,KEGG),可以直观检测靶点涉及的通路。2结果2.1 Meta结果2.1.1 文献检索及纳入结果基于以上检索策略，共检索到中文文献94篇，英文文献0篇，去除重复项后得到53篇。通过进一步的筛选，最终纳入15篇中文文献，共1254例患者。文献筛选过程及结果如图1所示。图1文献筛选的具体流程Fig.1SpecificprocessofIiterarwescreening2.1.2纳入文献基本特征共纳入15项研究，合计1254例患者，其中试验组636例，对照组618例，纳入基本特征如表1所示。»1纳入文献的基线表征Table1Baselinechar4crenzrionofincludedIiceramres序号纲人研究研尢样本(T/C)疗程三s-结局指标TC1刘静2017(UJ86(43/43)Ud常规治疗+格列齐特+二甲双麻+黄连同放汤常规治疗+格列齐特+二甲双麻G>三XD<三>S2赵军丽2019(叫IOe(5454)30d书规治疗+格列弃检+二甲双H+黄连阿狡汤存烷治疗+格列齐特+二甲双版3翕舸20MMl50/25)3个月常规治疗+阿K波第+二甲双麻+黄连阿鼓汤常规治疗+阿卡波糖+二甲双质4李慎江20伸周80(40.40)1个月常规治疗+格列齐依+二甲双H+黄连阿皎汤常规治行+格列齐特+二甲双IR5馀艺2019Wi96(4848)1个月常规治疗+二甲双4+黄连同般通常规治疗+二甲双孤OW6港球星20伸W80(40/40)1个月常城治疗+格列齐依+二甲双K+黄连阿胶砺常规治疗+格列齐特+二甲双质720170*1100(50'50)1个月常规治疗+二甲+黄连月般汤常规治疗+二甲双IK8李洪杰20停师82(41/41)ISd常规治疗+格列齐特+二甲双H+黄连同鼓汤常煌治疗+格列齐特+二甲双质m三9«K2020f»i66(3363)1个月常规治疗卜格列齐特+二甲双夙+黄连阿胶许常规治疗+格列齐特+二甲双质©®®10李博江201用】80(40/40)1个月常规治疗+格列齐特+二甲双K+黄连阿胶海常规治疗+格列齐特+二甲双IK11王圣坤2020磔】92(峪常规治疗卜格列齐特+二甲双麻+黄法同放汤常规治疗+格列齐特+一甲双履12刘福华200&叫76(47/29)1个月常规治疗+二甲双K4黄也同皎访常规治疗+二甲双贝am©®®®B张K2。18固82HlMl)1个月常烷治疗卜格列楸+二甲双尿+黄茂阿皎汤常e治疗+格列齐特+二甲双质14刘海燕2O2OP*96(48/48)4周常规治疗+格列而十黄连阿般访常规治疗+格列齐特15刘<ft2017<MlSO(40'40)1