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最新：2023多囊卵巢综合征雄激素质谱检测专家共识摘要多囊卵巢综合征(PCOS)是常见的育龄期女性内分泌疾病，也是导致女性不孕的主要因素。PCOS病理生理的主要问题是高雄激素血症。高雄激素血症可以通过生化检验或临床表现进行评估。目前，大多临床实验室常规开展的基于免疫学的雄激素检测方法存在诸多缺陷，如交叉反应、检测低浓度样本时准确性差、不同品牌试剂检测结果缺乏可比性，导致高雄激素血症评估时出现假阳性结果。液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)具有灵敏度高、特异性强、线性范围宽、可多目标物同时检测等优势，是更高效的雄激素检测方法。基于临床和实验室循证医学证据，首都医科大学附属北京妇产医院和中国人体健康科技促进会生育力保护与保存专业委员会联合临床检验、妇科内分泌、质谱应用领域学者共同制定该专家共识，旨在为医疗机构开展PCOS雄激素检测提供建议指导。该专家共识的声明包括PCOS雄激素实验室检测项目和检测方法的建议，以及采用LC-MS/MS检测雄激素的挑战与应对。1多囊卵巢综合征概述多囊卵巢综合征(polycysticovarysyndrome,PCOS)即Stein-Leventhal综合征，于1935年被Stein和Leventhal首次报道，是由遗传和环境因素共同导致的一种常见的内分泌代谢性疾病，其主要的临床表现为月经不调、不孕、高雄激素血症、卵巢多囊，可伴有肥胖、胰岛素抵抗、血脂紊乱等代谢异常，并可导致2型糖尿病、心脑血管疾病和子宫内膜癌发病风险增高。PCOS的患病率根据诊断标准、种族、地区、人群的不同而有差异，高发年龄为2035岁，育龄女性PCOS患病率为5%10%1o目前，PCoS病理生理的核心问题是高雄激素血症已成为学科领域内专家的共识。高雄激素血症指女性体内雄激素水平升高或功能过强，一般通过临床表现或生化检测来评估雄激素的升高程度2。高雄激素的临床表现主要为多毛、座疮、脱发和男性化体征；生化检测指标主要为总睾酮(totaltestosteroneJT)、游离睾酮(freetestosteronezFT)、脱氢表雄酮(dehydroepiandrosteronezDHEA)、硫酸脱氢表雄酮(dehydroepiandrosteronesulfate,DHEA-S)、4-雄烯二酮(4-androstenedione,A4)3-4o2018年发布的多囊卵巢综合征中国诊疗指南5(简称PCOS中国诊疗指南)建议：对于育龄期、围绝经期、青春期女性，应先进行高雄激素血症评估，并逐一排除其他可能引起高雄激素和排卵障碍的疾病，才能明确PCOS诊断。2雄激素检测和高雄激素血症评估雄激素是含19个碳的笛体激素，主要包括TT、A4、DHEA-SsDHEAx双氢睾酮(dihydrotestosterone,DHT)。育龄女性雄激素由卵巢和肾上腺共同产生，绝经女性雄激素主要来源于肾上腺。生理情况下，卵巢和肾上腺各产生25%的睾酮,其余50%由外周组织中的A4转化而来；A4来源于卵巢和肾上腺，这2个器官各产生50%的A4o女性血液循环中的TT有80%会与性激素结合球蛋白(sexKormonebindingglobulin,SHBG)结合,19%与白蛋白结合,只有约1%以FT的形式存在，并发挥雄激素的生理作用,A4、DHEA.DHEA-S在女性体内以非结合状态存在6。3PCOS患者不同雄激素检测的临床意义3.1 TT目前，测定血清TT水平是临床评估女性雄激素升高的首要方法。一般采用抗米勒管激素和TT联合检测,对于PCOS具有较高的诊断价值。如患者短期内出现男性化体征，TT水平高于参考区5.216.94nmol/L(150200ng/dL)上限的2.02.5倍,则需通过超声、磁共振成像等影像学检查来协助鉴别诊断卵巢或肾上腺分泌雄激素的肿瘤。3.2 FT女性血清中约99%的TT会与SHBG和白蛋白结合,只有约1%的TT以游离形式存在；生物活性睾酮包括与白蛋白非特异性结合的TT和FT0有研究结果显示，血清FT水平升高是诊断高雄激素血症的最佳指标8。目前报道的FT直接测定方法均基于质谱方法，其中平衡透析-液相色谱串联质谱(IiqUidchromatography-tandemmassspectrometrylLC-MS/MS)法是测定FT的首选方法8,但此方法临床应用限制较多，如耗时过长、非特异性结合、体积迁移效应，因此不适合实验室常规开展4,9o常见的可替代方法是根据SHBG和TT来计算游离睾酮指数(freeandrogenindexzFAI),与平衡透析法测定的FT有较好的相关性和一致性10。血液循环中的TT与SHBG结合紧密,而SHBG水平在超重的PCOS患者中通常较低，这是引起生物活性睾酮水平升高的主要原因；同时，低SHBG还会使循环睾酮降低至正常水平，从而掩盖雄激素过剩的状态口1。在这种情况下，可考虑检测SHBG,并计算FAI,以明确是否存在高雄激素血症。KEEVIL等12的研究结果显示，SHBG也会与其他性激素结合，部分雄激素还会与白蛋白结合，而白蛋白又会与多种物质耦合，且水平波动较大，因此当SHBG水平过低时，准确估算FAI难以实现，无法反映患者体内雄激素的真实活性，需要基于相关临床表现来判断高雄激素血症。3.3 A4作为TT的前体,A4对于判断PCOS患者雄激素水平具有重要意义口3。有研究发现，同时测定血清TT和A4是预测PCOS患者代谢风险的有效方法，采用LC-MS/MS测定A4和TT,再通过计算得到FAI,可提高对高雄激素血症的筛查效率14。PCoS高雄激素血症患者更易出现性激素异常、高胰岛素血症、胰岛素抵抗和脂代谢紊乱，其中伴有A4升高的PCOS患者激素水平异常和代谢紊乱更为严重。然而，目前大部分医疗机构临床实验室尚未开展此项目，本共识建议临床应对血清A4的检测加以重视13,153.4 DHEA-S/DHEADHEA-S是DHEA的硫酸化形式,也是DHEA和其他雄激素的储存器，半衰期较DHEA长，是肾上腺来源雄激素的主要标记物。2015年,美国临床内分泌学家协会(AmericanAssociationofClinicalEndocrinologists,AACE)、美国内分泌学院(AmericanCollegeofEndocrinology,ACE)、雄激素过多和多囊卵巢综合征协会(AndrogenExcessandPCOSSociety,AES)联合发布的PCOS诊疗指南16指出，30%35%的PCOS患者伴DHEA-S升高，约5%的PCOS患者仅DHEA-S这1种雄激素升高。G00DARZI等17的研究结果显示，有20%30%的PCOS患者同时伴DHEA和DHEA-S水平升高。值得注意的是，当DHEA-S水平超过8mgL(800gdL)时，提示存在肾上腺肿瘤可能1。基于LC-MS/MS方法测定的TTxDHEA-S水平联合体重指数(bodymassindex,BMI)对PCOS具有更高的诊断效率，临床应用价值更大18。因此，实验室多种雄激素联合检测能提高PCOS诊断的准确率，从而避免漏诊。3.5 DHTDHT是TT通过5a-还原酶转化而来的，其雄激素活性远高于TToDHT也是引发高雄激素血症临床症状(座疮、多毛、脱发)的主要雄激素。在DHT的刺激下，皮脂腺分泌过盛，会导致游离脂肪酸增高、亚油酸过低，促进座疮丙酸菌的生长和繁殖，进而形成座疮。DHT主要存在于细胞内和毛囊根部，很少进入血液循环，其在血清中的含量较少，故常规免疫学方法无法对其进行准确定量。有研究发现，采用LC-MS/MS同时检测PCOS患者的TT、A4、DHEA-S和DHT,可使高雄激素血症的检出率由单独检测TT的67.6%提升至91.0%19o根据上述临床和实验室证据，对疑似PCOS患者进行高雄激素血症评估时，就雄激素的检测种类，我们提出以下建议：建议1:由于PCOS患者高雄激素血症所占比例较大，涉及的主要雄激素为TT.A4、DHEA/DHEA-S.DHT,且多数PCOS患者伴2种及以上雄激素水平升高，建议对TTxA4、DHEA/DHEA-S.DHT这4种雄激素均进行准确测定。建议2:建议有条件的实验室采用平衡透析-质谱法对FT进行直接测定。如条件受限，建议首选质谱法测定TT,再结合SHBG计算FAI,其与平衡透析-质谱法FT测定结果有较好的一致性和相关性。建议3:建议同时检测多种雄激素（TT、A4、DHEADHEA-SxDHT）水平，以准确判断雄激素来源，为后续诊疗提供更全面的高雄激素血症评估信息。建议4:如受实验室条件限制无法同时检测TTxA4、DHEA/DHEA-S、DHT这4种雄激素水平建议优先测定TT和DHEA-S,评估雄激素异常来源（肾上腺或卵巢），并结合SHBG计算FAIo4雄激素的检测方法准确、可靠的分析方法是精准评估高雄激素血症的关键。目前，临床实验室常规采用的是化学发光免疫分析法(chemiluminescenceimmunoassay,CLIA)。该方法具备发光分析的高灵敏度和免疫反应的高特异性，且操作简便、自动化程度高。然而，现有的基于免疫学的检测方法仍存在诸多缺陷，如交叉反应、检测低浓度样本时准确性差、不同品牌试剂检测结果缺乏可比性，导致高雄激素血症诊断准确性降低(如出现假阳性结果)20o相较于免疫学方法，LC-MS/MS具有更高的检测灵敏度和特异性、线性范围更宽、可多目标物同时检测等优势，是更高效的雄激素定量方法21。近年来，质谱设备和样品前处理方法不断改进和更新，尤其是稳定同位素内标的加入，LC-MS/MS检测越来越适合临床实验室常规开展22值得注意的是，国外主流内分泌学术期刊已逐步要求必须采用质谱法测定女性雄激素水平，以确保获得更可信的测定结果，为研究结论提供更扎实的佐证23-24。2018年，PCOS国际循证医学指南再次强调了采用LC-MS/MS测定TT和FT的必要性25。基于方法学优势zLC-MS/MS用于女性雄激素检测时，可有效克服免疫学方法灵敏度和特异性相对较低、线性范围窄、无法多指标同时检测等弊端，帮助临床更高效地鉴别诊断高雄激素血症。目前，基于免疫学的雄激素检测方法包括酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)、CLIA和放射免疫分析法(radioimmunoassay,RIA)。TTxDHEADHEA-SsDHT、A4测定方法学比较见表1。袤15种雄激素测定方法学比较分析物名称测定方法检测效能TTCLIA.1.C-MSZNfSLC-MSMS,jCLIA测定TT的相关性较片(Lo.362.Py).01);采用LC-MSMS和CLIA测定TT.诊断PCOS的曲线卜面积分别为0.850和0805.IlCLIA的TT测定值整体偏用闾DHEA-SCLIA.1.C-MSZNfS住PCOS的诊断中.采用LGMSMS测定DHEA-S的效能(曲线卜面积为0.789>M>优广采用CLIA测定DHEA-S(曲线卜面积为0.661)(P-0.01)；LC-MSMS时低浓度样本(PgmL或ngnL水平)和因分干结构相似导致的交叉反应严JL底质1：扰大的分析物具有显岩优州”DHEAELISA,RlA.1.C-MS/MSI)LuMS/MS较RIA定T限更低.测盘他闱更宽.准确性更隔2>ELISALjLOMSMS漏定DHEA的相关件股(LO.631.P0.001):必性分析发现ELISA“在低估DHEA水平的趋势DHTELlSA.RIA.1.C-MS/MS1 )RlA测定的曲清DHT水平明显岛LC-MSMS的测定结果2 )ELISAijLe