实体肿瘤外周血细胞免疫功能实验室检测专家共识.docx

实体肿瘤外周血细胞免疫功能实验室检测专家共识摘要外周血细胞免疫功能检测在实体肿瘤免疫治疗受益者筛选、免疫相关不良反应监测、肿瘤疗效及预后评估等方面受到临床关注。为促进临床有效选择和解读实体肿瘤诊疗相关的外周血细胞免疫功能指标，中国医师协会检验医师分会、北京医师协会医学检验专科医师（技师）分会、国家癌症中心、国家肿瘤区域医疗中心、国家医学检验临床医学研究中心（中国医科大学附属第一医院）组织相关领域的学术专家，对外周血细胞免疫功能指标包括T淋巴细胞亚群精细分型、髓源性抑制细胞和细胞因子的临床应用价值进行了充分总结，并撰写了专家共识，同时对外周细胞免疫功能实验室检测指标和方案或方法给出了推荐和参考方向，以期为实体肿瘤患者的精准诊疗提供帮助。T细胞介导的细胞免疫应答是宿主抗肿瘤免疫最主要的途径，也是肿瘤发生免疫逃逸形成免疫抑制的关键靶点。肿瘤微环境的局部细胞免疫，以及基于脾脏、淋巴结和血循环的外周细胞免疫的功能状态与肿瘤发生发展和治疗转归密切相关1。基于外周血的细胞免疫功能检测在筛选免疫治疗受益者、监测免疫相关不良反应（immune-relatedadverseevents,irAE）及评估肿瘤疗效和预后方面的作用越来越受到临床关注。如何正确选择和解读实体肿瘤诊疗相关的外周血细胞免疫功能指标，目前国内外尚无统一规范。为此,中国医师协会检验医师分会、北京医师协会医学检验专科医师（技师）分会、国家癌症中心、国家肿瘤区域医疗中心、国家医学检验临床医学研究中心组织在肿瘤免疫监测和流式细胞术分析淋巴细胞亚群领域经验丰富的专家，结合国内外进展，撰写实体肿瘤外周血细胞免疫功能实验室检测的专家共识，旨在帮助临床合理选择免疫指标评估外周血细胞免疫功能，以辅助实体肿瘤的精准诊疗。鉴于细胞免疫功能在实体肿瘤免疫治疗中的重要价值，共识编写工作组关注细胞免疫应答从启动到发挥效应功能的全过程，针对参与细胞免疫应答的效应细胞、辅助细胞、负向免疫调节细胞等多种细胞亚群和免疫分子进行了临床研究证据的整合，筛选出在肿瘤免疫治疗监测、预后评估中具有指导价值的外周血细胞免疫功能实验室指标,并结合临床检验实践归纳为T淋巴细胞亚群精细分型，髓源性抑制细胞（myeloid-derivedsuppressorcell,MDSO亚群分析和细胞因子水平检测三大类，并对这些指标的检测方案和临床应用选择作出了推荐。一、共识形成方法共识发起机构：本共识由中国医师协会检验医师分会、北京医师协会医学检验专科医师（技师）分会、国家癌症中心、国家肿瘤区域医疗中心、国家医学检验临床医学研究中心共同发起。共识工作组：成立多学科工作组，包括以检验科为主，血液科、肿瘤内科、放疗科等的多学科专家共61位，来自全国31个省、自治区、直辖市的54家医疗机构，包括执笔人、证据收集人和专家组成员。共识目标人群：实体肿瘤患者。共识使用者：检验医师/检验技师；肿瘤相关专业医师。共识制订目的：指导临床合理选择免疫指标评估外周血细胞免疫功能，以辅助实体肿瘤的精准诊疗包括筛选免疫治疗受益者、监测免疫不良反应、评估疗效和预后等。问题的收集和遴选：共识工作组组长及执笔人围绕“实体肿瘤外周血细胞免疫功能实验室检测”进行文献调研，并在专家组成员中广泛咨询征集共识的主要内容和核心问题，经研究梳理后确定了5个方面（共识制订的目的、共识使用者、检测标志物、检测方案或方法、临床应用）共10个核心问题。文献的检索和筛选：共识工作组组长、执笔人及证据收集人聚焦参与细胞免疫应答的效应细胞、辅助细胞、负向免疫调节细胞等多种细胞亚群和免疫分子在实体肿瘤免疫治疗受益者筛选、免疫不良反应监测、疗效和预后评估等方面的临床意义，通过检索PUbmed梳理国内外临床研究证据。文献检索策略和筛选流程见图1。图1文献检索策略和筛选流程图共识的提出和形成：在充分评价所得国内外证据的基础上，共识工作组组长及执笔人通过共识会议完成了“专家共识讨论稿”。通过函审形式由全体专家组成员对讨论稿的内容提出修改意见和建议，再由执笔人修改形成了“专家共识修改稿”，并提出了10条专家共识。共识编写工作组组长编制了“实体肿瘤外周血细胞免疫功能实验室检测专家共识修改稿的专家评审意见表”，通过函审形式由全体专家组成员进行评审。本共识对证据等级与推荐等级的定义和具体表述见表1、2o参考德尔菲法就推荐意见达成共识。根据评审结果，由执笔人修改形成“专家共识审核稿”，通过函审形式提交给全体专家组成员做最后审核。共识工作组组长及执笔人根据反馈意见和建议完成修改、补充后形成“实体肿瘤外周血细胞免疫功能实验室检测专家共识”，通过共识会议定稿，包含10条专家共识共17项实验室检测指标的临床应用选择建议。共识已在“国际实践指南注册与透明化”平台完成注册和计划书提交，注册号为PREPARE-2023CN306oSl石。家共识的证IR分1(一)功能亚群1.细胞毒性T细胞(cytotoxicTcell,TC细胞)：TC细胞又名CD8÷T细胞，是杀伤肿瘤细胞最主要的效应细胞，以CD3+CD8+为分子标记。2 .辅助性T细胞(helperTcell,Th细胞)：Th细胞又名CD4+T细胞，辅助CD8+T细胞的活化、增殖和效应功能，以CD3+CD4+为分子标记；CD4+T细胞活化后分化为不同的效应亚群，Th各亚群之间的平衡有助于抗肿瘤免疫应答强度和免疫稳态的维持，其中Thl亚群产生的细胞因子IL-2对CD8+T细胞的活化、增殖和效应功能至关重要。3 .I型NKT细胞(invariantnaturalkillerTcell,iNKT细胞)：iNKT细胞通过激活CD8+T细胞、促进CD8+T和CD4+T细胞的免疫记忆、调节免疫抑制细胞如MDSC的功能等促进细胞免疫应答，以CD3+CD16+CD56+V24÷V11+或CD3+CD16+CD56+VQ24+Ja18+为分子标记。4 .调节性T细胞(regulatoryTcell,Treg细胞)：Treg细胞是CD4+T细胞的免疫负向调节亚群，通过接触性抑制和分泌免疫抑制因子等途径抑制CD4+T和CD8+T细胞的活化、增殖和效应功能，从而抑制细胞免疫应答，以CD3+CD4+CD25+CD127low或CD3+CD4+CD25÷FoxP3+为分子标记。(二)分化亚群1.初始T细胞(naveTcell,TN细胞)：TN细胞是未受到抗原刺激的静息细胞，介导初始免疫应答的启动，TN细胞的比例是反映细胞免疫动员储备能力的指标，以CD45RA+CCR7÷CD95-或CD45R0-CD62L+CD95-为分子标记。2 .记忆T细胞（memoryTcell,TM细胞）：TM细胞介导记忆免疫应答，随着分化进程进一步分为：（I）T记忆干细胞（Tmemorystemcell,TSCM细胞），以CD45RA+CCR7+CD95+或CD45R0YD62L+CD95+为分子标记；（2）中央记忆T细胞（centralmemoryTcell,TCM细胞），以CD45RA-CCR7+或CD45R0+CD62L+为分子标记；（3）效应记忆T细胞（effectormemoryTcell,TEM细胞），以CD45RA-CCR7-或CD45R0+CD62L-为分子标记；（4）终末分化效应记忆T细胞（terminallydifferentiatedeffectormemoryTcell,TEMRA细胞），又称终末分化效应T细胞（terminallydifferentiatedeffectorTcell,TTE细胞）,以CD45RA+CCR7-或CD45RO-CD62L-为分子标记。TSCM细胞、TCM细胞和早期TEM细胞主要介导记忆免疫应答；晚期TEM细胞和终末分化的TEMRA细胞主要发挥效应功能，但其增殖能力差，存活时间短。TM细胞亚群的比例是反映细胞免疫记忆储备能力的指标。（三）功能表型1.活化表型：推荐检测HL表DRCD38,HLAT）R在T细胞活化晚期稳定性表达；CD38在TN细胞中是组成性表达的，在静息记忆细胞中表达下调，在活化T细胞中表达升高。3 .增殖表型：推荐检测Ki-67,Ki-67为一种核蛋白，在细胞分裂中发挥重要调控作用，在Gl-M期表达水平升高，但在GO期不表达或低表达。4 .衰老表型：推荐检测CD28CD27CD57,CD28是T细胞活化必须的协同刺激分子，CD27是T细胞的一种共刺激分子，CD57是T细胞分化至终末期的标记。在T细胞分化中，分化早期阶段TN.TSCM和TCM细胞一般表达CD28和CD27,存活时间长；终末分化阶段TEMRA细胞丢失CD28、CD27并伴随CD57的表达，提示免疫衰老，存活时间短；中晚期分化阶段的TEM细胞具有异质性，其中CD28+CD27+/-TEM细胞生存时间长，主要发挥记忆作用；而CD28-CD27+/-TEM细胞衰老程度高，生存时间短，偏效应作用。TN细胞若缺乏CD28,将不能启动初始免疫应答，提示T细胞无能；TM细胞分化过程中，CD28表达下调，提示T细胞衰老。CD28+T细胞的比例是反映细胞免疫储备能力的指标；CD28-T细胞的比例是反映T细胞无能和衰老的指标，结合CD27和CD57用以鉴别衰老T细胞，CD28和CD27表达下调、CD57表达上调提示T细胞衰老。5 .耗竭表型：以高表达抑制性受体且增殖能力、生存能力和效应功能下降为特征，推荐检测的抑制性受体以程序性死亡分子1(programmeddeath-1,PDT)为主，辅以细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4/淋巴细胞激活基因-3/T细胞免疫球蛋白黏蛋白3,同时结合活化表型和增殖表型综合评估。二、检测方案推荐T淋巴细胞亚群精细分型涉及的分子标志物数量较多，推荐同时标记多种抗体进行淋巴细胞亚群精细分型分析。结合临床常规开展的TBNK淋巴细胞亚群检测，本共识推荐T淋巴细胞亚群精细分型检测方案（表3和图2）。mi2ZZ-wi-lt¾AVlCXMCDl3a)»CDmWeaQCDeCD)CMCMOMMA<aamqiCM1cm#an3CMOMMAa1CMCMy>-ViCMCDJanCDKCDU793CDaCMttACCVrmaCfinautWJmOMOMWCOVR>CMHACKano°uaxa¼ACayaCMamOuCD4T'''QCD8TBH二ama /I 3 一cmrmrCQQQf80MMunnnnMHSWAB(八%川*xwnw0>2流式细胞术检测T淋巴细胞亚群精细分型10色组合管3的设门流程1 .根据标本处理方法不同，每管各司其职：鉴于绝对计数管需要免洗法，而精细亚群检测需要溶血洗涤，建议绝对计数管与多参数精细亚群管分开进行2o2 .绝对计数法：绝对计数方法可使用单平台或者双平台技术，建议首选单平台技术。单平台方法可以使用体积法或者微球法进行绝对计数。共识推荐使用临床常规开展的TBNK淋巴细胞亚群检测管作为绝对计数管，按照2011年卫生部指南推荐3进行操作，可以使用1管6色方案(CD45CD3CD4CD8CD19CD16÷CD56)或者2管4色方案(CD45CD3CD4CD8,CD45/CD3/CD19/CD16+CD56)；精细亚群管所需计数通过比例换算获得2。3 .精细亚群检测：管13和管4分别使用10色