香烟烟雾染毒对BEAS-2B细胞FHIT基因甲基化及其mRNA表达的影响.docx

香烟烟雾染毒对BES-2B细胞FHIT基因甲基化及其mRN表达的影响苏志刚，刘玉萍，韦晔，纪雅慧，刘明星，黄欢欢，李建祥苏州大学医学部公共卫生学院江苏苏州215123邮箱地址：【摘要】目的观察永生化人支气管上皮细胞（BEAS-2B）经香烟烟雾长期染毒后FHIT基因甲基化状况及其mRNA表达改变，探索吸烟致肺癌的机制。材料和方法选取永生化人支气管上皮细胞（BEAS-2B）作为受试细胞，用含10%胎牛血清的DMEM培养基于37、5%CO2培养箱中培养，每4天传代1次。细胞设立对照组（C组）和烟雾染毒组（Sm组）。取对数生长期细胞制备单细胞悬液，以每孔IxlO5接种于TranSWen培养皿中，每个TranSWeH皿中加入1.5ml培养基，置于培养箱中培养，24h后将TranSWen培养皿置于细胞气体染毒装置中，TranSWen膜上方持续泵入香烟烟雾直接对细胞进行染毒，膜下方通入培养基保持细胞湿润。染烟组烟雾浓度为20%,每次染烟IOmin,对照组烟雾浓度为0%,其余条件同染烟组。第2天重复染烟一次，细胞连续染烟2次作为染烟1代（记作Sm1）。收集细胞常规培养，待细胞生长至对数期取部分细胞进行下一代染烟，其余细胞继续常规培养及传代，共染烟30代，传代40代（即Sm30-40）°经长期香烟烟雾染毒后，应用流式细胞仪分析细胞周期及凋亡法及软琼脂克隆法检测克隆形成率判断其恶性转化程度，用甲基化特异性PCR（MS-PCR）检测FHrr基因甲基化状况，并通过Q-PCR检测FHrr的mRNA表达量。结果与对照组细胞相比，各染烟组细胞出现了一定的S期阻滞，染烟后传代至40代细胞凋亡率较对照组下降明显（P<0.05）°染烟20代传代至40代细胞（Sm20-40）与染烟30代传代至40代细胞（Sm30-40）FHIT基因启动子区呈高甲基化状态，且Q-PCR结果显示Sm20-40和Sm30-40组细胞FHIT基因mRNA均低于对照组（P<005）.结论香烟烟雾可导致BEAS-2B细胞FHrr基因启动子区呈高甲基化状态，引起FHrr基因mRNA表达降低，可能是吸烟致肺癌的机制之一。