多杀性巴氏杆菌病诊断技.docx
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1、羊多杀性巴氏杆菌病诊断技术Diagnosistechnologyofpasteurellosismultocidainsheep点击此处添加与国际标准一致性程度的标识(征求意见稿)XXXX -XX-XX 实施XXXX-XX-XX发布内蒙古自治区市场监督管理局A/,一、刖百本文件按照GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由内蒙古自治区农牧业科学院提出。本文件由内蒙古畜牧业标准化技术委员会(SAM/TC19)归口。本文件主要起草单位:内蒙古自治区农牧业科学院、内蒙古杜美牧业生物科技有限公司。本文件主要起草人:王娜、赵世华、戴伶俐、白帆、张月梅、
2、达来宝力格、刘学文、谢慧慧、张帆、杨斌、宋越、刘威羊多杀性巴氏杆菌病诊断技术1范围本文件规定了羊多杀性巴氏杆菌病的诊断技术。本文件所规定的临床诊断、病理解剖、病原分离鉴定,适用于羊多杀性巴氏杆菌病的诊断。定种PCR适用于多杀性巴氏杆菌的鉴定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法GB/T19915.2-2005猪链球菌2
3、型分离鉴定操作规程NY/T563-2002禽霍乱(禽巴氏杆菌病)诊断技术NY/T563-2016猪多杀性巴氏杆菌诊断技术3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1多杀性巴氏杆菌PaSteUrellamuItocida羊多杀性巴氏杆菌病又称羊出血性败血症,是由多杀性巴氏杆菌引起的一种以败血和肺炎为主要特征的细菌性传染病,是危害羊产业健康发展的主要疫病。多杀性巴氏杆菌为兼性厌氧革兰氏阴性短小杆菌,主要附着在家畜的呼吸道和消化道上,当家畜因环境等因素产生应激时,会被该菌入侵感染全身各组织器官。患病家畜伴有精神沉郁、咳嗽、流涎、泡沫样鼻涕、拉稀等临床表现。多杀性巴氏杆菌根据英膜抗原可分为A、Bs
4、D、E、F5种血清型,不同血清型与宿主和疾病之间有一定的相关性,国内主要流行A和D型,根据脂多糖抗原可分为16种血清型;根据是否产生多杀性巴氏杆菌毒素分为非产毒多杀性巴氏杆菌和产毒多杀性巴氏杆菌。4诊断技术根据典型症状和病变及触片镜检为革兰氏阴性小杆菌,初步诊断为本病,确诊该病仍需进行病原菌的分离鉴定。3.1.1 症状4. 1.1.1急性型症状急性型病羊精神沉郁,停止采食,体温升高,口鼻有带血黏液流出,呼吸急速,咳嗽增多,先发生便秘,后变为腹泻或者二者交替发生,最终机体脱水、衰竭,死亡,病程可持续25天左右。5. 1.1.2慢性型症状慢性型通常是成年羊发生,病程可持续超过3周,病羊表现出被毛粗
5、乱,厌食,消瘦,颈部和胸腹部出现水肿。个别病羊的角膜发炎和出现程度不同的腹泻,如果出现严重的继发感染也会造成死亡。4.1.2病理变化急性型下颌淋巴结发生水肿、出血,心包积液,心包膜上存在纤维素絮片,胸腔内含有大量浆液性纤维素性渗出液,气管内存在很多混杂泡沫的淡红色液体,肺脏发生淤血、出血,间质变宽,切面有大量的浆液,组织中存在不同大小的坏死灶,肺门淋巴结发生肿胀、出血。5病原分离鉴定5.1方法概要检验程序的流程示意图见附录A(资料性附录)。5.2 试剂和材料除另有规定,所用试剂均为分析纯,水为符合GB/T6682-1992的蒸储水。各种培养基的制备方法见附录B(规范性附录)。5.3 仪器和设备
6、5.3.1匀质器和匀质杯。5.3.2天平:称量范围Og-1OOOg,读数精度0.0001g5.3.3培养箱:37C05.3.4恒温水浴锅。5.4.1样品采集对病死羊主要采集其气管和肺脏等组织;对活羊可采取鼻腔拭子。5.4.2分离培养5.4.2.1送检菌株的分离划线接种于含5%马血清的胰蛋白月东大豆琼脂平板(TSA),37C培养16h20h,使之形成单个菌落,以供鉴定用。5.4.2.2病料的分离和触片检查用经火焰灭菌并冷却的接种环蘸取病料内部组织后划线接种于5%马血清的胰蛋白陈大豆琼脂平板(TSA)或普通琼脂绵羊血平板(见第B.2章),于37培养16h20h后观察。同时取病料做组织触片,革兰氏染
7、色(按GB/T4789.28的方法进行染色)后镜检,如见粉红色小杆菌则表明病料中可能含有多杀性巴氏杆菌。5.4.2.3鼻腔拭子的分离鼻腔拭子样品加入到含有5ml,灭菌的含5%马血清胰蛋白陈大豆肉汤(TSB)(见第B.3章)的试管中,于37C培养16h20h后,划线接种于普通琼脂绵羊血平板或5%马血清的胰蛋白陈大豆琼脂平板(TSA)(见第B.1章)。5.4.2.4动物产品的均质、增菌和分离以无菌操作取检样25g,加入装有225ml灭菌的含5%马血清胰蛋白陈大豆肉汤(TSB)(见第B.3章)的广口瓶内,均质,于37C培养12h16h后划线接种于5%马血清的胰蛋白陈大豆琼脂平板(TSA)或普通琼脂绵
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