最新TORCH实验室规范化检测与临床应用专家共识.docx

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1、最新TORCH实验室规范化检测与临床应用专家共识TORCH指一组病原体,包含弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒等，孕妇感染此类病原体后可通过胎盘或产道感染胎儿或者新生儿，可能导致流产、早产、畸胎、死胎、宫内发育迟缓、新生儿多器官损害等不良预后。对于多数孕期ToRCH感染，目前尚缺乏有效的治疗手段，加强孕前、产前TORCH感染监测至关重要。TORCH实验室检测在其中发挥着重要作用，但TORCH检测流程的规范化、检验结果的正确解读尚需形成共识性意见。本文基于TORCH检测方法特点，针对不同病原体的感染特点、感染类型，从实验室角度对TORCH规范化检测与临床应用给出了共识性意见。TORCH一

2、词最早于1971年由埃默里大学免疫学家AndreNahmia提出，包含一组可导致先天性宫内感染的病原体，其中To代表弓形虫(Toxoplasmagondii,Toxo),R代表风疹病毒(Rubellavirus,RV),C代表巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV),H代表单纯疱疹病毒(Herpessimplexvirus,HSV)1o随后发现EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)、人类免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiencyviruszHIV)x人细小病毒B19等其他病原体也可导致宫内感染和新生儿不良预后TORCH”中的“0(OtherS)”也因此

3、被用于代表其他相关病原体2。在TORCH中，最受临床关注的是巨细胞病毒、弓形虫、风疹病毒、单纯疱疹病毒、人细小病毒B19,因为这几种病原体感染率相对较高，无特异性临床表现或临床症状轻微,容易忽视，但孕妇感染后病原体可通过胎盘或产道感染胎儿或者新生儿，可能导致流产、早产、畸胎、死胎、宫内发育迟缓、新生儿多器官损害等不良预后2。对于多数孕期TORCH感染，目前尚缺乏有效的治疗手段，因此加强孕前、产前TORCH感染监测至关重要，有助于避免相关不良妊娠结局的发生。TORCH临床实验室检测的主要手段包括血清学和病原学检测。血清学检测方法简便、操作标准化、成本较低，是目前临床首选的检测方法，检测指标包括特

4、异性免疫球蛋白M(immunoglobulinMJgM)抗体、特异性免疫球蛋白G(immunoglobulinG,IgG)抗体和IgG抗体亲和力等。研究和临床实践显示，TORCH感染后IgMxIgG抗体呈现动态改变仅凭IgM抗体阳性结果并不能确定被检者是否感染或区分特定病原体感染的类型(原发感染或复发感染)，难以评估预后。因此，建立规范化的TORCH检测流程,正确解读检验结果，避免过度医疗干预，显得尤为重要。目前国内尚缺乏实验室方面的TORCH共识或指南。近年来，TORCH检测在方法学上已有了很大的改变，在检验手段和检验方法学大幅度提升的背景下，中国妇幼保健协会临床诊断与实验医学分会、中华医学

5、会儿科学分会临床检验学组联合组织专家研究讨论，基于TORCH检测方法特点，针对最受临床关注的5种病原体的感染特点、感染类型从实验室角度对TORCH规范化检测与临床应用给出了以下意见。一.TORcH感染检测方法（一）病原体检测包括病原体培养、病原体抗原检测、核酸（DNA或RNA）检测等。1 .病原体检测常用方法与评价：急性感染期，取血液、羊水、尿液、唾液、疱疹液、脑脊液等样本，进行ToRCH病原体培养、抗原检测、核酸检测，阳性检测结果是判断特定病原体急性感染最直接的证据。这些基于病原体样本的检测方法（包括样本取材）与病原体复制特点、潜伏或定植位置等特性有关。其中，病原体培养和病原体抗原检测成本高

6、、费时、费力、周期长，且对实验室及操作人员专业程度要求较高，临床应用较少；核酸检测（比如PCR方法）灵敏度高、特异性好，可快速、高通量检测，是目前临床病原体检测的首选方法。由于原发感染和复发感染均可检测到病原体存在，所以样本中检测出病原体不能区分原发感染和复发感染。2 .胎儿宫内感染确诊方法：羊水PCR检测常用于胎儿宫内感染的诊断，比常规病原体培养方法更敏感、快速和准确。考虑到胎儿发育规律、病原体感染进程以及病原体垂直传播的特点，为提高病原体的检出率，针对不同病原体进行羊水穿刺的时间有差异：巨细胞病毒感染通常在孕21周以后，孕妇感染至少67周后进行3,4,5,6弓形虫感染可在孕1820周以后，

7、孕妇感染至少4周后取羊水样本检测7,8,9;风疹病毒感染可在孕1620周，孕妇感染至少36周后进行羊水检测10,11,12。羊水中巨细胞病毒、弓形虫等病原体核酸检测，多采用定量PCR方法，有研究显示，病毒载量越高，胎儿预后相对越差3,9。（二）血清学检测血清学检测是分析病原体感染后机体内出现的特异性抗体，与个体的免疫功能有关，适合于感染筛查和机体免疫状态的评估。1 .特异性IgM抗体：包括IgM抗体特点和IgM抗体检测的临床意义。IgM抗体特点：IgM抗体是病原体感染后机体内出现最早的抗体。IgM抗体分子是一个五聚体，有10个抗原结合表位（Fab）,比其他种类的抗体分子具有更高的效价。五聚体结

8、构特点使得IgM易于与有重复决定簇的抗原结合，容易出现交叉反应，可能出现假阳性结果13z14oIgM抗体检测的临床意义：IgM抗体阳性，提示患者可能处于急性感染期。初次感染期间，IgM抗体滴度一般在12个月内急剧上升，达到峰值后逐渐降低15,大约36个月转阴。但部分人群体内的IgM抗体可以保持较低的滴度水平，并可持续数年16。原发感染和复发感染均能产生IgM抗体，因此仅IgM抗体阳性检测结果不能诊断急性感染，也不能区分原发感染和复发感染。2 .特异性IgG抗体：包括IgG抗体特点和IgG抗体定量检测和动态监测的临床意义。IgG抗体特点：IgG抗体是血清中含量最多的抗体类型，占人体血清球蛋白含量

9、80%左右JgG抗体能够通过胎盘,出生时新生儿体内IgG抗体均来自母体，出生后迅速下降，至7月龄时几乎完全消失。新生儿在出生后13个月内逐渐合成IgG抗体，大约在7岁时达到成人水平。特异性IgG抗体在IgM抗体出现后产生，随着感染进展,IgG抗体滴度逐步增加达到峰值后进入平台期，在免疫正常的个体内可以长期存在。IgG抗体定量检测和动态监测的临床意义：IgG抗体的临床价值主要在于其定量结果。在疑似感染期两次取样（间隔23周），在同一平台检测特异性IgG抗体滴度加果第2次检测较第1次检测的滴度有显著增加4,17,提示感染。既往基于ELlSA方法的研究提示，巨细胞病毒和风疹病毒急性感染期的IgG抗体

10、滴度有4倍以上增加4/2;近年基于定量精准度更高的发光法（化学发光、电化学发光等）发现，两次IgG抗体滴度变化如果显著超出实验室的日间检测差异，也提示可能为近期急性感染，但需要临床结合多指标进行综合判断。实验室需要关注的是，由于每个检测平台线性范围有限，超过检测线性范围限制时，建议按试剂说明书稀释后再测，以明确IgG定量结果，只报告大于最大检测线性值会降低其临床辅助诊断价值。3 .IgG抗体亲和力：包括IgG抗体亲和力特点、检测方法和临床意义。IgG抗体亲和力特点及检测方法：机体感染病原体后，初次免疫应答产生的IgG抗体与抗原结合能力较弱（低亲和力抗体），经过数周或数月后，机体产生的IgG与抗

11、原结合能力更强，互补性更好（高亲和力抗体），此后高亲和力IgG在体内终身存在18,19。IgG抗体亲和力有多种检测原理，结果以百分比表示。以变性剂法为例：利用尿素或二乙胺等变性剂处理结合在抗原上的抗体，低亲和力的抗体很容易受变性剂的影响而被洗脱掉，高亲和力的抗体与相应的抗原结合力强，经过变性剂作用后仍结合在相应的抗原上而未被洗脱，经信号检测分析，待测样本的亲和力二处理缓冲液孔信号值/对照缓冲液孔信号值X100%o不同试剂对高亲和力和低亲和力判定范围不同，应依据试剂盒说明书判断。IgG抗体亲和力检测的临床意义：IgG和IgM抗体同时阳性时，IgG抗体亲和力检测结果可辅助临床判断是否为近期原发感染

12、。巨细胞病毒特异性IgG抗体研究显示,如IgG抗体检测表现为高亲和力，则可排除近1820周内的原发感染5,20,IgM阳性和IgG低亲和力表示原发感染发生在近3个月,敏感度和特异度均大于90%18z21风疹病毒IgG抗体在不同个体的成熟时间有差异，研究显示一些个体IgG抗体经过6周即可成熟、表现为高亲和力，有些个体风疹IgG抗体成熟需要38周22,23。弓形虫IgG抗体亲和力检测多以20周或4个月作为亲和力判断的一个临界时间点24。一般而言，IgG抗体高亲和力可排除近34个月内的原发感染25;IgM抗体阳性，同时IgG抗体低亲和力提示可能为近期原发感染口8,25。在临床缺乏IgG抗体基础数据、

13、不能检测到血清学转化情况下，结合IgM抗体检测和IgG抗体亲和力检测，可显著提高原发感染的检测敏感度及特异度至90%以上18。需要注意的是，在原发感染之后，特别是药物治疗后，一些个体的IgG抗体低亲和力状态可能持续数月甚至超过1年，所以不能仅凭IgG抗体低亲和力结果判断患者近期的急性感染26,27,应结合IgG抗体定量结果等多项指标进行综合判断评估。二.不同TORCH感染类型的血清学指标特点与实验室质量保障（一）不同TORCH感染类型的血清学指标特点不同感染类型的风险不同，明确感染类型对胚胎或胎儿预后评估至关重要。对于有免疫功能的个体，通过血清学多指标的联合、动态监测，有助于临床判断TORCH

14、感染类型，见表1。表1不同TORCHaS染类型的血清学指标特点gw0点om点厚力星*初次跑RC湖5波生宝啊性*为归性（IM学将投：J35；：切CM次0阳性,丽宣或任被知力MF匏在雪=.伏X%。W体再次毒法MHG优体动W定融修（国以刈）N云虞昱.升霍：卬叫次可呈财/eg.IWhftM5aRW无IM事吩会不疑X分彳昭3BI发笔设.落畀例云宗庄NM区分.性班嬲绻使用.包意。跑、视赛离比IOG优仪艇定险制（W艰）三WtSW区在模联哙3.处于三弟也明G优Ra惶.定水=无词要或切：15M抗0一性先天性受孕妇咫S超声同弋6*生,心,大多6g端毋将Ji16肮必性,，息5片在母Jf住16溯号,*UOG贰律Tft

15、不存力*秋5依看Jwfc注：TOftCHft表弓形虫Two）.又/蜕（RV）,巨曲嫁卷（CMV）.吒度修蜕（HSV）WAejMBB19JgG示负8网IEG.IgMM免侵球3M（二）TORCH血清学指标检测的实验室质量保障1 .采用定量分析：抗体的定量分析是TORCH血清学检测技术的进步和最佳选择。建议按照相关的要求对检测系统的精密性、稳定性、线性等性能指标进行验证28,29,30,以保障检测结果的准确、稳定、可靠。2 .不同检测平台检测结果的溯源性及可比性：目前临床在用的TORCH项目中，RVIgG抗体和ToxoIgG抗体有世界卫生组织（WorldHealthOrgnizationzWHO）校

16、准品，可溯源到WHO国际参考品，所使用的单位为IUml的国际单位，不同厂家试剂有一定的可比性（注：Toxo-IgG的WHO校准品已经有四代产品，不同厂家试剂溯源的校准品代次不同，量值结果只有溯源至同一代次的校准品才具有可比性)。除RV-IgG和Toxo-IgG的其他TORCH定量结果均溯源至企业自建参考品，所使用单位有U/mkAU/mkCOI或SCOoU/mkAU/ml是企业自定的定量单位，与IUml相比，AU/mkml不能通用，不同厂家、不同仪器以及不同试剂检测结果之间不具有可比性；界值指数(CUtOffindex,COI)或样本与界值比值(sample/cutoff,S/CO)是一个半定量结果单