水牛乳中类固醇激素类药物多残留检测方法 液相色谱-串联质谱法编制说明.docx

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1、团体标准水牛乳中类固醇激素类药物多残留检测方法液相色谱串联质谱法（征求意见稿）编制说明一、项目来源根据广西标准化协会关于下达2023年第二十批团体标准制修订项目计划的通知（桂标协（2023）74号）文件精神，由由南宁市疾控中心提出，广西壮族自治区产品质量检验研究院、广西化工研究院有限公司、广西皇氏乳业有限公司共同起草的团体标准水牛乳中类固醇激素类药物多残留检测方法液相色谱-串联质谱法（项目编号2023-2001）。二、项目背景及目的意义乳制品是指以生鲜牛（羊）乳及其制品为主要原料，经加工而制成的各种产品，是除母乳以外营养最为均衡的全价食品，它含有人体所需的全部营养成分，于人们的膳食结构中有其他

2、食品无法替代的地位和作用，尤其是孕妇、婴幼儿、儿童以及老人等群体作为营养补充剂的首选食品。水牛乳是广西的特色产品，据有关研究测定，水牛乳富含锌、铁、钙等微量元素，氨基酸、维生素含量也非常丰富，脂肪、蛋白质、乳糖的含量都远远高于黑白花牛奶，甚至相当于普通牛奶的1.85倍，矿物质和维生素含量也是黑白花牛奶和人乳的数十倍，因此也有人称之为奶中极品。广西长期承担着全国奶水牛杂交选育及水牛乳业发展重任，在产业规模、科技发展、企业实力等方面均处于全国领先地位，并在水牛科技领域创下多项世界第一。2021年，广西奶水牛全产业链产值已经达到50亿，十四五期间预计将实现产值倍增，达到100亿，其中生水牛乳的产量将

3、实现7万吨。根据专业机构预测，广西2025年水牛奶综合产值有望突破100亿元大关，成为推动地方经济发展的一股新力量。因此制定相关的检测标准来保障水牛乳的质量对于维护当地乳制品质量安全具有重要意义，将有助于增加消费者对广西乳制品的信任度和认可度，更有助于广西的乳制品走出广西市场，走向东盟甚至走向世界，将极大推动当地的经济增长。乳制品安全问题，尤其是兽药残留问题已成为人们关注的焦点。兽药残留如抗生素、激素、镇静剂等残留是指动物在应用兽药（包括兽药添加剂）后，蓄积或贮存在细胞、组织或器官内，或进入泌乳动物的乳或产蛋家禽蛋中的药物以及有毒理学意义的代谢物和药物杂质。其中，类固醇激素又称幽体激素，包括性

4、激素（包括雄激素、雌激素、孕激素）和肾上腺皮质激素（包括糖皮质激素和盐皮质激素）。糖皮质激素具有抗炎及抗过敏等作用，并能提高禽畜肉产量，促进它们的快速生长。然而若在奶牛饲养过程中过多使用糖皮质激素类药物，多余的未被代谢完的药物造成动物体内残留，人类食用后则会严重危及健康。一些生产者为了增加产量和提高奶牛生产效率，对奶牛使用性激素，而该类药物一般为亲脂性小分子，易分泌进入牛奶中，是导致儿童性早熟及性发育异常的重要因素。乳制品中残留激素可通过食物链进入人体并产生一系列健康危害。因此，我国农业部176号公告明确规定，禁止饲料和动物饮用水中添加己烯雌酚、雌二醇等雌性激素,块诺醇、左烘诺孕酮、烘诺酮等孕

5、激素，并在235号公告规定了己烯雌酚、醋酸甲羟孕酮等外源性激素物质在动物性食品中的最高残留限量为不得检出。目前，我国尚未有单独水牛乳中类固醇激素类药物的检测标准，因此，建立水牛乳中类固醇激素残留的检测方法对于水牛乳的食用安全、保障当地水牛乳产品质量安全以及维护和提升本地水牛乳品牌形象具有重要意义。三、项目编制过程（一）成立标准编制工作组团体标准水牛乳中类固醇激素类药物多残留检测方法液相色谱-串联质谱法项目任务下达后，南宁市疾控中心提出，广西壮族自治区产品质量检验研究院、广西化工研究院有限公司、广西皇氏乳业有限公司组织成立了标准编制工作组，制定了标准编写方案，明确任务职责，确定工作技术路线，开展

6、标准研制工作。具体由南宁市疾控中心提出，广西壮族自治区产品质量检验研究院、广西化工研究院有限公司、广西皇氏乳业有限公司相关人员配合。编制工作组下设三个组，分别是资料收集组、草案编写组、标准实施组。资料收集组负责国内外有关食品中类固醇激素类药物检测的文献资料的查询、收集和整理工作，查阅前人对水牛乳的研究情况、水牛乳定义及分类和目前企业广西水牛乳的生产情况。草案编写组负责起草标准草案、征求意见稿和标准编制说明、送审稿及编制说明的编写工作，包括后期召开征求意见会、网上征求意见，以及标准的不断修改和完善。标准实施组负责标准发布后，组织相关广西水牛乳生产企业以及相关检测单位开展标准宣贯培训会，对标准进行

7、详细解读，让相关人员了解标准，并根据标准对广西水牛乳中的类固醇激素检测技术进行规范和指导，保证广西水牛乳的产品质量，并对标准实施情况进行总结分析，不断对团体标准提出修正意见。（二）收集整理文献资料标准编制工作组收集了国内有关食品中类固醇激素类药物检测以及水牛乳相关文献资料。主要有：GB/T219812008动物源食品中激素多残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法农业部1031号公告-12008动物源性食品中11种激素残留检测液相色谱-串联质谱法农业部1031号公告-22008动物源性食品中糖皮质激素类药物多残留检测液相色谱-串联质谱法SN/T4744-2017进出口食用动物源性激素残留量的测定液相

8、色谱-质谱/质谱法SN/T2677-2010进出口动物源性食品中雄性激素类药物残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法GB/T27404-2008实验室质量控制规范食品理化检测T/GXAS384-2022广西水牛乳T/SHNX001-2021巴氏杀菌鲜牛乳DBS45/011-2014食品安全地方标准生水牛乳DBS45/012-2014食品安全地方标准巴氏杀菌水牛乳DBS45/023-2015食品安全地方标准水牛乳及其制品中掺入牛属乳DBS45/ 024-2016DBS45/ 037-2017DBS45/ 046-2018DBS45/ 047-2018食品安全地方标准 食品安全地方标准 食品安全地方标

9、准 食品安全地方标准酸水牛乳灭菌水牛乳调制水牛乳风味发酵水牛乳（三）研讨确定标准主体内容标准编制工作组在对收集的资料进行整理研究之后，标准编制工作组召开了标准编制会议，对标准的整体框架结构进行了研究，并对标准的关键性内容进行了初步探讨。经过讨论、研究，标准的主体内容确定为范围、规范性引用文件、原理、试剂及其配制、仪器设备、试样制备与保存、测定步骤、结果计算和表述、精密度、测定低限和回收率。（四）调研、形成草案、征求意见稿在前期工作的基础之上，通过方法建立、方法优化，方法验证，按照科学、适用性等原则编制完成了团体标准水牛乳中类固醇激素类药物多残留检测方法液相色谱-串联质谱法（草案）。2023年1

10、月5月，编制小组通过调研广西水牛乳产区及有代表性的广西石埠乳业有限责任公司、广西农垦西江乳业有限公司和广西皇氏乳业有限公司，考察企业水牛乳生产情况及类型，查阅水牛乳的分类，确定检测基质类型，在之前的基础上，在确定了样品基质和确定检测目标物之后进行方法开发和优化，形成标准草案。2023年6月9月，编制小组对建立的方法进行系统的方法验证，并邀请相关检测单位贵港市疾病预防控制中心、广电计量检测（南宁）有限公司进行方法验证，根据验证结果和意见进行多次讨论修改形成团体标准水牛乳中类固醇激素类药物多残留检测方法液相色谱-串联质谱法（征求意见稿）和编制说明。四、标准制定原则1、实用性原则本文件是在充分收集相

11、关资料和文献，分析水牛乳当前现状以及类型，食品中类固醇激素类药物检测标准现状，结合现有检测基础，通过方法开发和优化结果总结起草的，建立的方法简单快速，实用性强，符合相关检测标准的要求，方法的建立有利于提高广西水牛乳质量和商品经济价值，提高人民经济效益，对推动广西水牛乳产业健康发展，维护当地乳制品品牌形象，具有较强的实用性和可操作性。2、协调性原则本文件编写过程中注意了与广西水牛乳相关法律法规的协调问题，在内容上与现行法律法规、标准协调一致。3、规范性原则本文件严格按照GB/T1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则编写本标准的内容，保证标准的编写质量。4、科学性原则本文

12、件是在实验基础上，按照标准方法开发的相关要求建立的方法，形成草案，并经过多方方法验证，秉承科学严谨的实验原则，建立的方法可靠性强，适应性广。五、主要关键指标及确定依据1.范围本标准规定了水牛乳中异氟泼尼松、卤米松、氟尼缩松、地索奈德、睾酮、美雄酮、孕三烯酮、快诺孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸甲羟孕酮、孕酮、己酸羟孕酮残留量的液相色谱-串联质谱检测方法。根据水牛乳的定义，水牛乳是以生产的生水牛乳和以生水牛乳为原料，加工的水牛乳制品，包括巴氏杀菌水牛乳、灭菌水牛乳、发酵水牛乳、风味发酵水牛乳、调制水牛乳。主要是依据DBS45/011食品安全地方标准生水牛乳、DBS45/012食品安全地方标

13、准巴氏杀菌水牛乳、DBS45/037食品安全地方标准灭菌水牛乳、DBS45/024食品安全地方标准酸水牛乳（发酵水牛乳）、DBS45/047食品安全地方标准风味发酵水牛乳、DBS45/046食品安全地方标准调制水牛乳的有关要求确定本标准。因此本标准适用于水牛乳中异氟泼尼松等13种类固醇激素类药物的检测,包括巴氏杀菌水牛乳、灭菌水牛乳、发酵水牛乳、风味发酵水牛乳、调制水牛乳等，其它同类食品可参照执行。2.规范性引用文件依据正文中规范性采纳的标准列出规范性引用文件，排列顺序符合GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的要求。3原理根据食品中前处理的一般步骤分为提取

14、和净化两个步骤，本方法采用的是水和乙月青作为混合提取液，由于水牛乳含有蛋白质，因此采用蛋白沉淀剂沉淀蛋白，然后进行净化除水、脂肪和糖类等，最后上机检测。因此确定试样中的原理为用水和乙月青提取，用硫酸锌和铁氧化钾沉淀蛋白，用吸附剂MgSO4、PSA、C18进行净化，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。4.试剂及其配制根据标准GB/T6682,本实验用水均需符合GB/T6682中规定的一级水。按照色谱上机的要求，本实验所有试剂均为分析纯或者色谱纯；此外根据本实验的实验原理(提取、沉淀蛋白、盐析、净化)以及方法优化结果最终确定试剂以及配制步骤如下：试剂和材料乙睛(C2H3N)：色谱纯。亚铁氟化钾(

15、K4Fe(CN)63H2O)乙酸锌(C4H6O4Zn2H2O)。氯化钠(NaCI)。无水醋酸钠（CH3COONa）。无水硫酸镁（MgSo4）。N-丙基乙二胺（PSA）:4060mHC-CI8型吸附剂（Cl8）：4063mo净化管：分别称取0.15g无水MgSO4、0.10gPSA、0.10gC18至15mL离心管中。溶液配制10%亚铁氯化钾溶液：称取115g亚铁氧化钾，用水溶解定容至1L。20%乙酸锌溶液：称取239g乙酸锌，用水溶解定容至1L。乙睛水溶液（l+l,v/v）：取50OmL乙精1,加入50OmL水,摇匀备用。标准品13种类固醇激素标准物质纯度均大于96.3%或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质，相关信息见附录A。标准溶液配制标准储备液：分别称取适量（精确至0.0001g）各标准物质，用甲醇溶解配制浓度为100g/mL的标准储备液，避光-18C保存，保存期12个月。混合标准中间液：分别准确移取适量的异氟泼尼松、卤米松、氟尼缩松、地索奈德、睾酮、美雄酮、孕三烯酮、淡诺孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸甲羟孕酮、孕酮、己酸羟孕酮标准储备液，用甲醇稀释配制成浓度为1gmL,避光-18。C保存,保存期1个月。混合标准工作液：准确移取适量的混合标准中间液，用50%乙睛水配制成适用浓度（至少5个浓度系列，用于做标准工作曲线），现配现用。5仪