异种移植用无指定病原体 医用供体猪：病理学诊断规范.docx

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1、异种移植用无指定病原体医用供体猪：病理学诊断规范1范围本部分规定了异种移植用无指定病原体(DeSignCdPathogenFree,DPF)医用供体猪病理学检查的内容和方法，包括检查规则、检查程序、临床病理学检查、解剖病理学检查、结果判定和检查结论等。本部分适用于异种移植用DPF医用供体猪的病理学诊断。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1异种移植用DPF医用供体猪medicalgradeDPFdonorpigforXenotransplantaHon经人工饲养与培育，遗传背景明确或者来源清楚，12月龄体重宜不超过50kg,不携带世界卫生组织(WOHdHealthOrganizatio

2、n,WHO)指定供体动物应排除的潜在感染或条件致病和感染性人畜共患疾病病原，必须利用生物安全屏障环境防止病原体感染，不得使用抗生素或疫苗，用于医用异种移植供体、科学研究、教学、生产和质量控制鉴定以及其他科学实验的小型猪。2.2临床病理学clinicalpathology用化学、微生物学、血液学和分子生物学的方法对体液(血液和尿液)和组织等进行实验室分析，从而对疾病进行诊断的医学学科。2.3解剖病理学anatomicalpathology通过肉眼、显微镜、化学的、免疫学的和分子生物学的方法对整体、器官和组织的形态进行检查而对疾病做出诊断的医学学科。3缩略语ALB：白蛋白AST： XX冬氨酸氨基转

3、移酶CRE：肌肝HCT：红细胞比积MCH：平均红细胞血红蛋白含量MCV：平均红细胞体积PET：血小板RDW：红细胞分布宽度T-BIL:总胆红素TG：甘油三脂ALT：丙氨酸氨基转移酶BUN：尿素氮GLU：空腹血糖HGB：血红蛋白MCHC：平均红细胞血红蛋白浓度MPV：平均血小板体积RBC：红细胞WBC：白细胞T-CHO：总胆固醉TP：总蛋白4检查规则4.1 检查频率无指定病原体级异种移植用DPF医用供体猪临床病理学检测每半年至少检查一次；解剖病理学检测每隔一年至少检查一次。4.2 抽样要求4.2.1 方式选择6月龄以上异种移植用DPF医用供体猪用于检测，随机抽样。4.2.2 数量根据群体大小，抽

4、样数量见表1。表1抽样数量群体数量抽样数量500头不少于5%注：临床应用的猪需要进行100%抽样检查。5检查程序检查程序见图U图1异种移植用DPF医用供体猪检查程序6临床病理学检查6.1 外观检查6.1.1 检查项目精神状态、被毛、皮肤、天然孔、营养状况、运动状态、饮食情况、呼吸状态等。6.2 血液学检查6.2.1 采样要求动物准备：空腹12h20h。采血位置：耳静脉、前腔静脉或后肢外侧隐静脉。采血量：LOmL,采用相应规格的EDTA-K2抗凝管。标本储存条件：室温条件下不超过8h06.2.2 检测项目RBCxHCT.MCV、HGB、MCHMCHC、RDW、PLT、MPV、WBCo6.2.3

5、正常参考值异种移植用DPF医用供体猪血液学指标正常参考值参见附录Ae6.3 血液生物化学检查6.3.1 采样要求动物准备：空腹12h20h0采血位置：耳静脉、前腔静脉或后肢外侧隐静脉。采血量：2.0mL。标本处理：室温放置30min60min,3000rpm离心5min,取血清用于检测。标本储存条件：血清标本密封、避光保存，室温条件下不超过12h,4条件下不超过24h。6.3.2 检测项目ALT、AST、CRE、BUN、TP、ALB、GLU、T-BlL、TGT-CHOo6.3.3 正常参考值异种移植用DPF医用供体猪血液生物化学指标正常参考值参见附录Bo7解剖病理学检查7.1 大体解剖7.1.

6、1 解剖程序体表检查一皮下检查T剖开腹腔做一般视查一剖开胸腔作一般视查一摘出腹腔脏器并检查T摘出胸腔脏器并检查一摘出口腔和颈部器官并检查一摘出骨盆腔脏器并检查一剖开颅腔,摘出头部器官并检查T剖开脊椎管，摘出脊髓并检查T肌肉、关节和淋巴结检查T骨和骨髓检查。7.1.2 检查内容体表：发育状态、营养状态、精神状态、感觉器官、呼吸系统、被毛、皮肤、睾丸。皮下：脂肪、乳腺、淋巴结（颌下淋巴结、颈浅淋巴结、腋下淋巴结、胴淋巴结）、附睾。头颈部：口腔、鼻腔、大脑、小脑、脑干、垂体、扁桃体、甲状腺、甲状旁腺。胸腔：胸腔液、胸腺、肺和肺门淋巴结、心包、心包液和心脏、主动脉、气管和支气管。腹腔：腹腔液、脾脏和脾

7、门淋巴结、肝脏、胆囊、肝门部位的血管、胆管和淋巴结、胰腺、肾脏、肾上腺、胃、肠道（十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠）、肠系膜淋巴结。盆腔：膀胱、输尿管、前列腺、精囊腺、卵巢、输卵管、子宫、阴道。7.2 组织病理学检查7.2.1 组织标本取材规范组织标本取材规范参见附录Co7.2.2 检查内容心、肺、肝、脾、肾、胃、空肠、肠系膜淋巴结、睾丸/卵巢，以及大体解剖检查发现异常的器官和组织。8结果判定8.1 临床病理学检查结果判定8.1.1 判定标准临床病理学检查结果分为四个等级，分别为未见异常、轻微异常、轻度异常和明显异常，病理病变分为先天性病变及感染性病变，无论哪个等级，出现非感染性病变排除

8、病变个体，感染性病变则排除整个群体，判定标准如下：a）未见异常：动物外观无异常，同时血液化验指标均在正常参考值范围内。b）轻微异常：动物外观无明显异常，但是血液化验指标有12项异常升高或降低，最大变异不超过正常参考值范围临界值的20%。c）轻度异常：1）动物外观无明显异常，但是超过2项血液化验指标异常升高或降低，最大变异达到正常参考值范围临界值20%50%；2）动物外观轻微或轻度异常，同时超过2项血液化验指标异常升高或降低，最大变异达到正常参考值范围临界值20%-50%od）明显异常：1）动物外观无明显异常，但是超过2项血液化验指标异常升高或降低，最大变异超过正常参考值范围临界值的50%；2）

9、动物外观轻微或轻度异常，同时超过2项血液化验指标异常升高或降低，最大变异超过正常参考值范围临界值的50%；3）动物外观明显异常。8.1.2 结果确认临床病理学检查结果若出现异常变化需要重复检测一次。如果两次检测结果不相符，对于血液学指标需再以显微镜检测做最终判定，对于血液生物化学指标则需再做第三次检测，以其中两次一致的结果为准。8.2 解剖病理学检查结果判定8.2.1 判定标准解剖病理学检查结果分为四个等级，分别为未见异常、轻微异常、轻度异常和明显异常，病理病变分为非感染性病变及感染性病变，无论哪个等级，出现非感染性病变排除病变个体，感染性病变则排除整个群体，判定标准如下：a）未见异常：未发现

10、病理形态学异常变化；b）轻微异常：发现轻微的病理形态学变化，推测动物仍然能够表现正常的生理功能；c）轻度异常：发现轻度的病理形态学变化，推测动物正常生理功能已经出现偏差；d）明显异常：有明显的病理形态学变化，推测动物出现生理功能障碍。8.2.2 结果确认解剖病理学检查结果需要有同行复核，检查报告要求由病理专业高级职称的技术人员签署。9检查结论9.1 动物个体检查结论无指定病原体级小型猪病理学检查未见异常或轻微异常时，判定合格；发现轻度异常或明显异常判定为不合格。临床病理学与解剖病理学检查结果不一致时，依据解剖病理学检查结果做出检查结论。9.2 动物群体检查结论屏障区域内任一抽检无指定病原体级小

11、型猪不合格时，应检测是否为感染所致，如果为指定病原体感染判定该屏障区域内异种移植用DPF医用供体猪不合格。附录A（规范性附录）异种移植用DPF医用供体猪的血液学指标正常值参考范围项目单位异种移植用DPF医用供体猪RBC红细胞10,2L6.85-9.37HCT红细胞压积%42.67-64.71MCV平均红细胞体积IL63.00-69.60HGB血红蛋白g/L130.80-198.87MCH平均红细胞血红蛋白含量Pg19.51-21.30MCHC平均红细胞血红蛋白浓度g/L298.11-317.89RDW红细胞分布宽度fL36.36-39.97PET血小板109LMPV血小板平均体积fL8.50-

12、15.50WBC白细胞109L7.61-11.89附录B（规范性附录）异种移植用DPF医用供体猪的血液生物化学指标正常值参考范围项目单位异种移植用DPF医用供体猪ALT丙氨酸氨基转移酶UfLASTXX冬氨酸氨基转移酶U/LCRE肌肝moiLBUN尿素mmol/LTP总蛋白龈ALB白蛋白叽GLU空腹血糖mmol/LT-BIL总胆红素molLTG甘油三脂mmol/LT-CHO总胆固砰mmol/L附录C（规范性附录）异种移植用DPF医用供体猪组织病理学检查及标本取材规范C.1总则C.1.1一般用于组织学取材的动物剖杀前应先隔离检疫7-10d,并详细记录实验动物来源、种类、年龄、性别、原编号、体重、临

13、床症状等，记录剖检时间、地点、麻醉方法、时间、麻醉者、处死方法、解剖者、记录人、温度、湿度。动物剖杀前禁食（不禁水）时间一致，为12h。C1.2病理标本应及时取材、及时固定。病理检查应分层次进行，先进行一般外观观察，然后剖检观察，再进行光镜详细检查。C.1.3取材部位宜选择正常与病灶交界处、病变特别明显处以及眼观变化特殊处。适量包括与病变区域毗邻的“正常”结构和坏死组织等。采取的病理组织材料，要包括各器官的主要结构，如肾脏应包括皮质、髓质、肾盂粘膜及被膜。相同器官取材时，选材部位应尽量一致。C.1.4大体积和分叶的器官，应视不同组织选取多个部位；小器官可整体取材并固定，如淋巴结、扁桃体、甲状腺

14、等。胃肠标本应将内容物冲洗掉，以免内容物影响组织固定，产生自溶。取材时不得牵拉、刮抹、压挤和冲洗（胃肠内容除外）。C.1.5所取组织块厚度宜为0.5Cm-LOCm,不宜太厚或太薄。C.1.6组织块放入固定液时忌卷曲、互相粘贴和贴靠瓶壁，食管、胃、肠、胆囊及膀胱等空腔脏器应剪开，以浆膜面平贴于硬纸后再放入固定液内固定。大脑等中枢神经系统的病理组织学检查，应在处死动物的同时进行固定液灌注后再取材，胃肠道组织的取材和固定应控制在动物死后20min以内。C.1.7固定液用量要充足，为被固定标本体积的5-10倍。常规固定液为4%中性甲醛（10%中性福尔马林）。C.1.8如发现病变组织，在组织取材之前，应

15、记录组织大小，质地性质及硬度，包膜的厚度和完整性以及与周围其他脏器之间位置关系，必要时称重。C2体表检查和取材C2.1体表检查对全身皮肤做一全面观察，触摸检查表面淋巴结，注意不同部位的外伤。仔细观察各处皮肤，注意颜色变化，有无伤痕、脱毛或者其它异常。仔细观察蹄壳部及趾间，观察关节的活动状态及异常。检查口、鼻、眼、肛门、生殖器等有无出血现象，有无分泌物渗出物和排泄物，以及可视黏膜的色泽，有无出血水疱溃疡结节假膜等病变检查皮肤的色泽变化，有无充血、出血创伤炎症溃疡结节脓疱肿瘤水肿等病变，有无寄生虫和粪便粘着等变化。注意体表淋巴结有无肿大、硬结。C2.2皮肤取材取肩背部肤组织和其他有病变肤。取材时皮下脂