免疫自动化分析仪器让您做第一时间的知讯人.ppt

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1、第二十三章第二十三章 免疫自动化仪器分析免疫自动化仪器分析掌握：自动化免疫比浊分析原理及类型，化学发掌握：自动化免疫比浊分析原理及类型，化学发 光自动化免疫分析原理及类型，荧光免疫光自动化免疫分析原理及类型，荧光免疫 自动化分析原理及类型，各类型分析特点。自动化分析原理及类型，各类型分析特点。熟悉：分析试剂中不同标记物的作用原理及类型，熟悉：分析试剂中不同标记物的作用原理及类型，抗原过量检测设计原理。抗原过量检测设计原理。了解：自动化分析的发展历史、基本原理、临床了解：自动化分析的发展历史、基本原理、临床 应用范围。应用范围。免疫学测定（免疫学测定（IAIA）利用抗原和抗体特异性结合反应的特点

2、，利用抗原和抗体特异性结合反应的特点，检测样本中微量物质的方法检测样本中微量物质的方法 免疫球蛋白及其片免疫球蛋白及其片 补体、细胞因子、补体、细胞因子、体黏附分子及其配体体黏附分子及其配体 病原体抗原或体、多病原体抗原或体、多种凝血因子、酶和种凝血因子、酶和 同同工酶、激素及多肽工酶、激素及多肽肿瘤标志物、药物及毒品等肿瘤标志物、药物及毒品等高高精精度度高高效效率率 免疫分析的基本技术免疫分析的基本技术新技术的应用新技术的应用手段更先进手段更先进方法更可靠方法更可靠自动免疫分析仪的结构特点：自动免疫分析仪的结构特点：发发射射光光源源系系统统信信号号检检测测系系统统稀稀释释加加样样清清洗洗样样

3、处处理理系系统统品品计算机系统计算机系统信息信息处理处理及及数字数字转换转换信息信息储存储存分析分析报告报告系统系统报报告告打打印印SYNCHRON CX PROSeriesSYNCHRON LX,LX20 PROSeriesYNCHRON LXi 725SCOULTER LH 755InstrumentSolutionsSYNCHRON CX PROSeriesSYNCHRON LX,LX20 PROSeriesYNCHRON LXi 725SCOULTER LH 755InstrumentSolutions设计思路设计思路五点技术指标五点技术指标免疫检测的基础免疫检测的基础抗原抗体间的特异

4、性反应抗原抗体间的特异性反应 手工操作手工操作 自动化分析自动化分析免疫比浊分析技术发展免疫比浊分析技术发展两两个个阶阶段段免免疫疫比比浊浊法法分分类类当一束光当一束光线通过溶线通过溶液受到光液受到光散射和光散射和光吸收两个吸收两个因素的影因素的影响而使光响而使光的强度减的强度减弱弱一、散射免疫比浊分析原理一、散射免疫比浊分析原理散射比浊法：散射比浊法：在液相中可溶性抗原、抗体特异性结合，形成一定大小的复合物粒子，当入射光沿水平轴照射在粒子颗粒上时，光线被颗粒吸收或折射，发生偏转，其偏转的角度与发射光的波长和复合物颗粒大小和多少有关。散射光的强度与复合物的含量成正比，即待测抗原越多，形成的复合

5、物越多，散射光就越强。（一）（一）基本原理基本原理 是将沉淀反应与散射比浊分析相结合，是将沉淀反应与散射比浊分析相结合，“在抗原抗体反在抗原抗体反 应几秒钟后开始测定峰值信号应几秒钟后开始测定峰值信号”。目的是排除抗原抗体反应的目的是排除抗原抗体反应的不稳定性，降低检测误差不稳定性，降低检测误差。时间时间检测分两个检测分两个在预反应时段，在预反应时段，加小量样本与加小量样本与抗原抗体反应，抗原抗体反应，测定第一次散测定第一次散射光信号值射光信号值加全量样本，加全量样本，约反应约反应 2 2分分钟后，第二钟后，第二次测定散射次测定散射光信号光信号信号峰值信号峰值计算机处理计算机处理转换为样转换为

6、样品浓度品浓度（二）（二）抗原过量检测抗原过量检测抗体过量抗体过量 在检测中抗体结合抗原的能力可达到相当于正常在检测中抗体结合抗原的能力可达到相当于正常 血清的血清的5050倍以上，以保证高浓度样本中的抗原与倍以上，以保证高浓度样本中的抗原与 抗体的结合。抗体的结合。对抗原过量进行阈值限定对抗原过量进行阈值限定 先测定预反应时段抗原先测定预反应时段抗原-抗体复合物的散射光信抗体复合物的散射光信 号，若未超过阈值，可进行全量样本测定。若超号，若未超过阈值，可进行全量样本测定。若超 过阈值，提示样品浓度过高，需稀释后测定。过阈值，提示样品浓度过高，需稀释后测定。采用两项保证措施：采用两项保证措施：

7、（一）（一）基本原理基本原理 是测定抗原抗体结合反应的动态过程。是测定抗原抗体结合反应的动态过程。所谓速率，是在所谓速率，是在单位时间内单位时间内抗原抗体结合形成抗原抗体结合形成 复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的 速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态 的速率比浊分析。的速率比浊分析。当仪器测定到某一时当仪器测定到某一时 间内形成速率下降时，间内形成速率下降时，即出现即出现速率峰速率峰，该峰，该峰 值的高低，即代表所值的高低，即代表所 测抗原的量。测抗原的量。（一）（一）基本原理基本原理 （二）（二）抗原

8、过量检测抗原过量检测 设计原理设计原理 速率峰值一般在速率峰值一般在2525秒时出现。秒时出现。在反应介质中加入一定量的促凝剂，可加速抗在反应介质中加入一定量的促凝剂，可加速抗 原抗体复合物的形成，以减少反应时间。原抗体复合物的形成，以减少反应时间。速率法的优点：是快速率法的优点：是快 速、不需要减去样本速、不需要减去样本 和试剂本底读数，校和试剂本底读数，校 正结果也较稳定。正结果也较稳定。（一）（一）基本原理基本原理当光源的光路（角度与正前方夹角为当光源的光路（角度与正前方夹角为0 00 0时），通时），通 过一定体积的溶液，由于溶液中抗原抗体结合复过一定体积的溶液，由于溶液中抗原抗体结合

9、复 合物粒子对入射光因反射、吸收或散射而衰减。合物粒子对入射光因反射、吸收或散射而衰减。透射光的强度和形成的复合物的量呈反比。透射光的强度和形成的复合物的量呈反比。检测器检测器检测器检测器光源光源 透镜透镜 滤光片滤光片平光线平光线散散射射光光透射光透射光 散射比浊、透射比浊光路图散射比浊、透射比浊光路图（一）（一）基本原理基本原理v 是个极其简单的方法。在抗原过量情况下，与待测是个极其简单的方法。在抗原过量情况下，与待测样品中相应的样品中相应的IgIg发生抗原发生抗原-抗体反应，形成可溶性复合抗体反应，形成可溶性复合物，使反应介质的浊度发生改变。物，使反应介质的浊度发生改变。v 测量方法利用

10、分光光度计测量被吸收的量。读数以测量方法利用分光光度计测量被吸收的量。读数以吸收单位（吸收单位（A A）或）或ODOD值表示，值表示，A A值反映了入射光和透射光值反映了入射光和透射光的比率。待测物中的比率。待测物中IgIg含量可通过标准曲线计算得出。含量可通过标准曲线计算得出。v 待测样品中的抗原含量与吸光度呈正比，而与透射待测样品中的抗原含量与吸光度呈正比，而与透射光呈反比。光呈反比。v 反应在反应在PEGPEG的作用下，加速复合物的形成。的作用下，加速复合物的形成。（二）（二）实验要求实验要求 检检范范围围测测如免疫球蛋白如免疫球蛋白IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM、；补体；补体

11、C3C3、C4C4；血浆蛋白血浆蛋白AATAAT、TRFTRF、A1MA1M、CERCER、HPTHPT、PABPAB、ALBALB；炎性反应蛋白炎性反应蛋白 SAASAA、CRPCRP；载脂蛋白载脂蛋白 APOAPO、ABIABI；尿蛋白系列尿蛋白系列小分子治疗药物小分子治疗药物检检范范围围测测血浆、体液中特种蛋白血浆、体液中特种蛋白 在常温下，一些特定的化学反应产生的能量使其产物或中间在常温下，一些特定的化学反应产生的能量使其产物或中间态分子激发，形成电子激发态分子；当其衰退至基态时，所释放态分子激发，形成电子激发态分子；当其衰退至基态时，所释放出的化学能量以可见光的形式发射，这种现象称为

12、出的化学能量以可见光的形式发射，这种现象称为化学发光化学发光(CL)(CL)。能产生能产生CLCL反应的物质称为反应的物质称为化学发光剂化学发光剂或或化学发光底物化学发光底物 。化学发光反应与免疫反应结合，即具有免疫反应的特异性，化学发光反应与免疫反应结合，即具有免疫反应的特异性，又兼有发光反应的高敏感性又兼有发光反应的高敏感性 气相反应体系气相反应体系液相反应体系液相反应体系固相反应体系固相反应体系化学能转化学能转化为电子化为电子激发态能，激发态能，使中间体使中间体变成电子变成电子激发态激发态即反应生即反应生成中间体成中间体激发分子激发分子辐射迁回辐射迁回到基态到基态 两两种种分分类类法法两

13、类两类酶参与的酶参与的CLCL反应反应非酶参与的非酶参与的CLCL反应反应三类三类直接参与发光反应的标记物直接参与发光反应的标记物以催化作用或能量传递参与发光反应的酶标记物以催化作用或能量传递参与发光反应的酶标记物以能量传递参与氧化反应的非酶标记物以能量传递参与氧化反应的非酶标记物（一）直接参与发光反应的标记物（一）直接参与发光反应的标记物 这类化学发光物其结构是有一能产生发光的这类化学发光物其结构是有一能产生发光的特殊基团特殊基团，直接参，直接参 与发光反应。其特点没有本底发光；并可检测微量浓度样本。与发光反应。其特点没有本底发光；并可检测微量浓度样本。最常用的标记物吖啶酯类，不需要催化剂的

14、参与，在过氧化氢的最常用的标记物吖啶酯类，不需要催化剂的参与，在过氧化氢的 稀碱溶液中即能发光。发光波长稀碱溶液中即能发光。发光波长430nm430nm。（二）（二）以催化作用或能量传递参与发光反应的酶标记物以催化作用或能量传递参与发光反应的酶标记物 这类这类酶标记物酶标记物作为能量传递的介质直接参与催化发光反应。作为能量传递的介质直接参与催化发光反应。其酶催化其酶催化 反应后发光效率的强弱与样本的含量呈正比。常用的酶标记物有两种：反应后发光效率的强弱与样本的含量呈正比。常用的酶标记物有两种：辣根过氧化酶（辣根过氧化酶（HRPHRP）在碱性条件下在碱性条件下，HRPHRP标记抗体与样本中的抗原

15、结合成抗原标记抗体与样本中的抗原结合成抗原-抗体复抗体复 合物后，在合物后，在HRPHRP和和H H2 20 02 2的作用下，使底物鲁米诺发光，发光的强度取的作用下，使底物鲁米诺发光，发光的强度取 决于形成的抗原决于形成的抗原-抗体抗体酶标记物酶标记物复合物量。复合物量。碱性磷酸酶（碱性磷酸酶（ALPALP）用用ALPALP标记抗体，当形成的抗原标记抗体，当形成的抗原-抗体抗体ALPALP标记物标记物复合物后，复合物后，ALPALP催催 化底物化底物AMPPDAMPPD，迅速水解脱去磷酸根，生成不稳定的中介，迅速水解脱去磷酸根，生成不稳定的中介APMDAPMD，此，此 生成与分解，就产生持续

16、稳定的发光。生成与分解，就产生持续稳定的发光。（三）以能量传递参与氧化反应的非酶标记物（三）以能量传递参与氧化反应的非酶标记物 这类标记是用一种化学发光剂取代酶标记物标记抗体，不直接这类标记是用一种化学发光剂取代酶标记物标记抗体，不直接 参与化学发光反应，只作为发光反应的催化剂或能量传递过程中的参与化学发光反应，只作为发光反应的催化剂或能量传递过程中的 中间体。通过检测发光物在激发态与基态的活动所产生的光子的量中间体。通过检测发光物在激发态与基态的活动所产生的光子的量 反映样本中被测物的浓度。反映样本中被测物的浓度。上述三类化学发光反应的动力学反应，上述三类化学发光反应的动力学反应，发光剂从高能量级的激发态，回到低能量发光剂从高能量级的激发态，回到低能量 级的稳定态。发光所释放的能量，由超敏级的稳定态。发光所释放的能量，由超敏 感光电流倍增管接受发光信号，检测发光感光电流倍增管接受发光信号，检测发光 强度，并进行自动控制。强度，并进行自动控制。化学发光免疫分析（化学发光免疫分析（CLIACLIA），标记物为吖啶酯类），标记物为吖啶酯类 化学发光酶免疫分析（化学发光酶免疫分析（CLEIA