第一部分概述第二部分血脂脂蛋白及载脂蛋白测定名师编辑PPT课件.ppt

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1、第一节第一节 概概 述述第二节第二节 血脂、脂蛋白血脂、脂蛋白 及载脂蛋白测定及载脂蛋白测定一、血脂和血浆脂蛋白一、血脂和血浆脂蛋白 自学自学二、脂蛋白代谢紊乱二、脂蛋白代谢紊乱 （一）高脂蛋白血症（一）高脂蛋白血症 血脂含量超过正常称为血脂含量超过正常称为高脂血症，由于血脂均以血浆脂蛋白的形式存高脂血症，由于血脂均以血浆脂蛋白的形式存在，故也称为高脂蛋白血症。按发病原因分为在，故也称为高脂蛋白血症。按发病原因分为两大类。两大类。1.按表型分类按表型分类 以以Fredrickson（1967）分类）分类法为基础，经法为基础，经WHO（1970）修订的分类系统，）修订的分类系统，根据血清根据血清

2、TC、TG、外观和脂蛋白电泳图谱，、外观和脂蛋白电泳图谱，将其分为将其分为6型。型。第一节第一节 概概 述述 （1）型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症 又称高乳糜微粒又称高乳糜微粒血症。血症。是一种常染色体隐性遗传病。由于是一种常染色体隐性遗传病。由于LPL缺损或缺损或LPL活化因子（活化因子（ApoC）缺损所）缺损所致。婴儿期即可发生，但罕见。其生化检查致。婴儿期即可发生，但罕见。其生化检查特征：特征：4冷置试验，血清上层为奶油状，冷置试验，血清上层为奶油状，下层清亮。下层清亮。血清血清TG，达，达11mmol/L以上，血清以上，血清TC正常或轻度正常或轻度。血清血清LPL活性活性。血清脂蛋白电泳

3、，血清脂蛋白电泳，CM。（2）a高脂蛋白血症高脂蛋白血症 又称高又称高-脂蛋白血脂蛋白血症或高胆固醇血症。症或高胆固醇血症。属常染色体显性遗传，有属常染色体显性遗传，有明显的家族史。病因明显的家族史。病因LPL受体缺损，杂合子型受体缺损，杂合子型发生频率为发生频率为1/500，纯合子型发生频率为，纯合子型发生频率为1/100000。其生化检查特征：。其生化检查特征：4冷置试验，血清外观清亮透明。冷置试验，血清外观清亮透明。血清血清TC，15.6mmol/L尤其是尤其是LDL-C，TG正常。正常。血清脂蛋白电泳，血清脂蛋白电泳，-LP。临床表现，中青年常伴有冠状动脉硬化，临床表现，中青年常伴有冠

4、状动脉硬化，结局为心肌梗塞。结局为心肌梗塞。（3）b型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症 在在 a 型 基 础 上 伴 有型 基 础 上 伴 有 V L D L（高（高LDL+VLDL血症），病因不明。其生化检血症），病因不明。其生化检查特征：查特征：4冷置试验，血清外观清亮或微混。冷置试验，血清外观清亮或微混。血清血清TC，TG。血清脂蛋白电泳，血清脂蛋白电泳，-LP，pre-LP。（4）型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症 又称宽又称宽-脂蛋脂蛋白血症。白血症。属常染色体显性遗传病，发病率属常染色体显性遗传病，发病率1/10000，病因，病因，ApoE异常，与相应受体结异常，与相应受体结合率合率。其生化检

5、查特征：。其生化检查特征：4冷置试验，血清外观混浊，后形冷置试验，血清外观混浊，后形成蜡样黄色薄膜。成蜡样黄色薄膜。血清血清TC，TG。血清脂蛋白电泳，血清脂蛋白电泳，-LP，pre-LP，IDL。融合形成宽。融合形成宽区带。区带。（5）型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症 又称高前又称高前-脂蛋脂蛋白血症或家族性高甘油三脂血症白血症或家族性高甘油三脂血症。属常染色体。属常染色体显性遗传病，较常见，我国原发性高脂蛋白血显性遗传病，较常见，我国原发性高脂蛋白血症中一半属于此型。病因，症中一半属于此型。病因，ApoA2异常。其生异常。其生化检查特征：化检查特征：4冷置试验，血清外观混浊。冷置试验，血清外观

6、混浊。血清血清TG，TC正常或稍正常或稍。血清脂蛋白电泳，血清脂蛋白电泳，pre-LP。临床表现，多见于中年人易发生冠心病。临床表现，多见于中年人易发生冠心病。（6）型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症 属常染色体显属常染色体显性遗传病，病因不详，可能由几种遗传缺性遗传病，病因不详，可能由几种遗传缺陷所致，较罕见。生化检查特征：陷所致，较罕见。生化检查特征：4冷置试验，血清上层为奶油状，冷置试验，血清上层为奶油状，下层混浊。下层混浊。血清血清TG，TC。血清脂蛋白电泳，血清脂蛋白电泳，CM，pre-LP。2.按是否继发于全身性疾病分类按是否继发于全身性疾病分类 分分为原发性和继发性高脂血症。常继发于糖

7、为原发性和继发性高脂血症。常继发于糖尿病、肝病、肾病、肥胖以及过量饮酒，尿病、肝病、肾病、肥胖以及过量饮酒，成人发病率为成人发病率为3%5%。3.高脂血症的基因分型法高脂血症的基因分型法 一部分高一部分高脂血症患者存在单一或多个遗传基因的缺脂血症患者存在单一或多个遗传基因的缺陷，具有明显的家族聚集性，有明显的遗陷，具有明显的家族聚集性，有明显的遗传倾向。传倾向。（二）低脂蛋白血症（二）低脂蛋白血症 主要有四种类型主要有四种类型 1.低低LDL血症血症 是一种常染色体显性遗传病，是一种常染色体显性遗传病，病因病因ApoB100低下，血浆低下，血浆LDL减少，减少，TC。2.无无LDL血症血症 罕

8、见的常染色体隐性遗传病，罕见的常染色体隐性遗传病，病因病因ApoB100、B48缺损，血浆中无缺损，血浆中无LDL，TC。3.低低HDL血症血症 病因不详，血清病因不详，血清TG，动脉，动脉粥样硬化、冠心病的发病率高。粥样硬化、冠心病的发病率高。4.无无HDL血症（血症（Tangier病）病）罕见的常染色体罕见的常染色体隐性遗传病，隐性遗传病，ApoA、A缺损，血浆缺损，血浆TC，HDL-C。血脂测定方法很多，目前临床实验血脂测定方法很多，目前临床实验室室基本检验项目基本检验项目有：有：血清外观分析，血清外观分析，TC，TG，HDL-C，LDL-C测定。测定。进一步进一步可可做做HDL亚组分，

9、亚组分，IDL，Apo（如（如ApoA、ApoB100），），Lp（a）及脂蛋白电泳，）及脂蛋白电泳，LPL，LCAT测定，为保证分析结果的测定，为保证分析结果的可靠性，标本的采集应在餐后可靠性，标本的采集应在餐后12h以上。以上。第二节第二节 血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定一、血清外观分析（血清冷置试验）一、血清外观分析（血清冷置试验）混浊混浊（TG增高）增高）下层浊（下层浊（VLDL增高）增高）型型下层清（下层清（VLDL正常）正常）型型均匀混浊均匀混浊（VLDL）TC正常正常 型型上层奶油样上层奶油样（CM）TC增高增高 a型型TC正常正常 正常人正常人清亮清亮（T

10、G正常）正常）TC b，型型空空腹腹血血清清 测测TC 4过夜过夜 测测TC二、血清总胆固醇测定二、血清总胆固醇测定 胆固醇是人体重要的脂类成分，具有重胆固醇是人体重要的脂类成分，具有重要的生理功能，如合成类固醇激素，维生素要的生理功能，如合成类固醇激素，维生素D3胆汁酸，并构成细胞膜成分，胆汁酸，并构成细胞膜成分，TC包括包括FC（1/3）和）和CE（2/3），胆固醇与动脉粥样硬），胆固醇与动脉粥样硬化有密切关系，故胆固醇测定是最常用的实化有密切关系，故胆固醇测定是最常用的实验室检测项目之一。验室检测项目之一。TC测定方法很多，约测定方法很多，约200多种，分为化多种，分为化学测定法、酶法、

11、气相色谱法、高效液相色学测定法、酶法、气相色谱法、高效液相色谱法、核素稀释质谱法（决定性方法）。谱法、核素稀释质谱法（决定性方法）。（一）化学测定法（一）化学测定法 主要有两类主要有两类 1.Liberman-Burchard反应反应 简称简称L-B反反应，胆固醇经冰醋酸，浓硫酸脱水生成应，胆固醇经冰醋酸，浓硫酸脱水生成3.5-胆胆烷二烯阳离子，然后被醋酐，浓硫酸氧化生烷二烯阳离子，然后被醋酐，浓硫酸氧化生成绿色的胆烷六烯磺酸。呈色稳定性差。成绿色的胆烷六烯磺酸。呈色稳定性差。2.Zak反应反应 胆固醇经冰醋酸，浓硫酸脱胆固醇经冰醋酸，浓硫酸脱水生成水生成3.5-胆烷二烯阳离子，然后在胆烷二烯

12、阳离子，然后在Fe3+存在存在下氧化生成紫红色胆烷四烯阳离子，灵敏度下氧化生成紫红色胆烷四烯阳离子，灵敏度较较L-B反应高反应高7倍，且呈色稳定性好，但试剂倍，且呈色稳定性好，但试剂腐蚀性极大，不能用于自动化分析。腐蚀性极大，不能用于自动化分析。（二）酶法（二）酶法胆固醇酯胆固醇酯 胆固醇胆固醇 脂肪酸脂肪酸胆固醇胆固醇 O2 胆烷胆烷-4-烯烯-3酮酮 H2O2H2O2 4AAP 酚酚 红色亚胺醌红色亚胺醌 H2OCEHChODPOD 试剂中除上述三种酶外，还有胆酸钠和表面活试剂中除上述三种酶外，还有胆酸钠和表面活性剂及稳定剂，胆酸钠用于激活性剂及稳定剂，胆酸钠用于激活CEH，表面活性，表面

13、活性剂促进胆固醇从脂蛋白中释放。剂促进胆固醇从脂蛋白中释放。酶法操作简便，快速，试剂无腐蚀性，适合酶法操作简便，快速，试剂无腐蚀性，适合于自动化分析，但也存在有一些不足，于自动化分析，但也存在有一些不足，CEH对胆对胆固醇水解不完全，表面活性剂影响固醇水解不完全，表面活性剂影响CEH活性，黄活性，黄疸血清中过高的胆红素可还原疸血清中过高的胆红素可还原H2O2使结果偏低。使结果偏低。【参考范围参考范围】3.105.70mmol/L 【临床意义临床意义】血清血清TC含量受年龄、性别、含量受年龄、性别、饮食和运动等因素的影响。饮食和运动等因素的影响。20岁以上随年岁以上随年龄龄而而，70岁以后则有下

14、降趋势。岁以后则有下降趋势。2040岁阶段男性高于女性，但女性绝经后则高于岁阶段男性高于女性，但女性绝经后则高于男性。城市人群高于农村人群，与饮食和男性。城市人群高于农村人群，与饮食和运动有关。脑力劳动者高于体力劳动者。运动有关。脑力劳动者高于体力劳动者。病理性高胆固醇血症病理性高胆固醇血症 原发性高胆固醇原发性高胆固醇血症，糖尿病、胆道阻塞、肾病综合症、甲血症，糖尿病、胆道阻塞、肾病综合症、甲状腺功能减退。状腺功能减退。病理性低胆固醇血症病理性低胆固醇血症 严重贫血、甲亢、严重贫血、甲亢、营养不良。营养不良。三、血清甘油三脂测定三、血清甘油三脂测定 TG是有一分子甘油与三分子脂肪酸是有一分子

15、甘油与三分子脂肪酸组成的化合物，主要存在于组成的化合物，主要存在于VLDL和和CM中，中，临床化学中往往以测定甘油代表临床化学中往往以测定甘油代表TG的含量。的含量。TG的测定方法很多，如气相色谱法、高效的测定方法很多，如气相色谱法、高效液相色谱法、红外分光光度法。但上述方液相色谱法、红外分光光度法。但上述方法需特殊的仪器设备和技术，故一般只用法需特殊的仪器设备和技术，故一般只用于研究工作中。临床实验室主要用化学法于研究工作中。临床实验室主要用化学法和酶法。和酶法。（一）化学法（一）化学法 基本步骤可归纳为四步基本步骤可归纳为四步 1.提取：提取：甘油三脂的提取甘油三脂的提取 采用合适的溶采用

16、合适的溶剂，使脂蛋白变性提取剂，使脂蛋白变性提取TG，同时去除干扰物，同时去除干扰物质质(磷脂、游离甘油、葡萄糖等磷脂、游离甘油、葡萄糖等),常用方法有：常用方法有：（1）异丙醇抽提，沸石合剂（沸石、高岭）异丙醇抽提，沸石合剂（沸石、高岭土）吸附。土）吸附。（2）异丙醇抽提，氧化铝吸附磷脂。）异丙醇抽提，氧化铝吸附磷脂。（3）正壬烷、异丙醇、稀硫酸分溶抽提，）正壬烷、异丙醇、稀硫酸分溶抽提，免去吸附磷脂的操作，后用价廉的正庚烷代替免去吸附磷脂的操作，后用价廉的正庚烷代替正壬烷。应用较广。正壬烷。应用较广。2.皂化：皂化：甘油三脂的水解甘油三脂的水解 一般都采一般都采用用KOH乙醇或乙醇或KOH异丙醇溶液，异丙醇溶液，60，515min可使可使TG完全水解。完全水解。3.氧化：氧化：甘油的氧化甘油的氧化 最常用的氧化最常用的氧化剂是剂是HIO4，甘油在酸性条件下被氧化成，甘油在酸性条件下被氧化成甲醛、甲酸。反应受甲醛、甲酸。反应受-磷酸甘油、葡萄糖、磷酸甘油、葡萄糖、丝氨酸的干扰，故抽提时应尽量除去此类丝氨酸的干扰，故抽提时应尽量除去此类物质的干扰。物质的干扰。4.显色：显色：显色测定甲