防龋DNA疫苗pVAX1-SG免疫下大鼠乳腺FcRn的表达研究.docx

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1、I防弱DNA疫苗pVAXl-SG免疫下大鼠乳腺FcRn的表达研究I邹潇龙I王月月2,吴砧冰3,犹然淞4,周民希陈彬（1.遵义医科大学口腔疾病研究特色重点实般室,贵州遵义5630062.遵义医科大学附属口腔医院，贵州遵义5630）I摘要I目的：本研究在SD大鼠不同生理阶段以及免疫条件下分析乳腺FCRn基因mRNA表达量的变化，探索防隔DNA疫苗 PVAXlSG对大鼠乳腺FCRn表达的影响，方法：将40只雌性受孕SD大鼠随机分成四蛆（防般DNAI5苗组，空戟质粒蛆，生理 盐水组，空白对照组），在其分娩后第I天及第1周分别用对应试剂进行注射，第2周处死SD大鼠并取乳腺迸行mRNA检测.结 果：经防踽

2、DNA疫苗pVAXlSG免疫后的大鼠乳腺FCRn基因表达量较正常组大鼠乳腺FCRn基因表达量显著上升（p Bin I*. （I. Key Laboratory Of Oral Disease Resean h, Zunyi Medical University, Zunyi 563006, China： 2. Affiliated Stomatological Hospital of Zunyi Medical University, Znnyi 563000, China ）Abstract Objectives Herein, in order to vxplrc the effects

3、of anti-caries DNA vaccine pVAXl-SG on the expression of nits批注IAW请补充：第一作者：姓名（年份），性别， 职称，主要研究方肉通讯作者；姓名（年份），性别，职称，主要研究方 向t E-mail TTt投稿论文的题目、摘要、关健词、图题、表题、图注、 表注以及中文参考文献必须有中英文对照（中文汇献、二； 娈翻译的（本身就有英文翻译的再翻译，本身无英文翻 译的保留中文就可），请先列出英文同译后是中文批注A2:知网13.4%万方37.82%.文章现制率较高请修改至20以下，引用他人文字 部分可换种表达方法，或者正文相应增加些内容，复 制

4、率均可下降,如要自行查受制率请剔除摘要和文献. 只杏正文部分breastFcRn,thechangesofmRNAexpressionobreastFcRngeneinSDratsWereanalyzedatdiferentphysiologicalstagesandunderimmuneconditions.Methods40fcmalc-conceivedSDratxwererandomlydividedintofourgroupswhichwereIabclsanti-VariesDNAvaccine,emptyplasmid,physiologicalsaiincwandblankco

5、ntrolgroups.Atthefirstday.thestudiedrateswereimmunizedwithcorrespondingreagents,respectively.Subsequently9afterthedeliver)forIweek,theSI)ratswereexecutedandthemammaryglandwastakeninthesecondweekfordetection.ResultssTheexpressionofFcRngeneinthemammaryglandsafterimmunizationwiththeanti-cariesDNAvaccin

6、epVAXl-SGassignificantlyhhcrthanthatofthenormalg)pofrats(p0.05).ConclusionsTheanti-cariesDNAvaccinepVAXl-SGcanincreasetheexpressionofFcRninratsInHInmaryglands.Keywords)nti-cariesDNAvaccine;BreastFcRnzImmuneexpression;FcRn是一种位于细胞膜表面的IgG抗体受体,其蛋白结构和MHC-I分子类似,主要在内皮细胞中表达，其结构包含由链和。2微球蛋白组成的异二聚体FcRn可以和IgG的F

7、c部分结合，阻止IgG分子被溶酶体裂解，可以起到增长IgG体内半衰期的作用，参与到IgG的体内转运、维持和分布代谢过程中ULFCRn作为将IgG从母体传递到幼崽体内的特异性载体，WallaCe和ReeS在啮齿类动物刚出生的幼崽小肠上皮细胞刷状缘上首次分离得到。FCRn在许多成年哺乳动物的呼吸道、消化道和生阳道的黏膜上皮细胞及肺脏、肝脏、肾脏、胎盘及乳腺等组织都有表达a”FCRll与IgG在酸性环境中结合，在中性环境解离，其相互作用具有PH值依赖性二因此，IgG从组织间隙液中流经乳腺上皮细胞过程中,在腺泡上皮细胞的基底侧与酸性环境中的FcRn结合,经胞吞转运释放到腺胞腔中。防僦DNA疫苗免疫后产

8、生的抗体在许多哺乳动物比如小鼠的肾脏、肝脏、血管内皮细胞等组织器官都有表达网。FCRn在不同动物中传递母体IgG的途径不同。比如：在人和兔子中主要通过胎盘内转运母体的IgG分子，在乳汁中则几乎不含IgG;在啮齿类动物中一部分可以通过胎盘中的FcRn转运母体IgG分子，部分可以通过乳腺中的FcRn转运IgG.FCRn可以调控血清中IgG的浓度，当IgG少的时候，与IgG结合可以保护其不被体内溶菌满降解，延长IgG的半衰期I。L益金项目I步州有普通ItJi等学校青年科技人才成长项目（髀科鲁KY字20221276号九贵州省普通四等学校为年科技人才成长项目黔科合KY字2O22289号L费州省卫生做康委

9、科学技术珞金项目iUKngul）14J837XM62QI7Q9J61.3 RNA提取、测序、分析一每个样本编号，按照RNA提取试剂盒说明书分别提取总RNA。使用Agilent公司21型生物分析仪配试剂盒（AgiIenlRNA6000NanoKit）检测总RNA的浓度、28S/18S值、RNA完整值（RlN）以及片断大小。每个样本总RNA单独建麻，构建好的文库用Agilcnt21Bioanalyzcr和ABIStcpOnePlusReal-TimePCRSyStem质检合格后进行ReSeqUenCingIlluminaHiSeq2000测序。过滤掉低质JR、接头污染以及未知碱基N含量过高read

10、s（SOAPnuke-V1.5.2）.获得高质量数据后，比对到人参考基因组上（HISAT2-v2.04）,然后用StringTie对每个样品分别进行转录本的重构，用Cuffmerge将所有样品的重构信息整合在一起，对整合后的数据再使用CUffcOmPare采集、比较和整合。2.1 pVAXI-SCi质粒提取及测序殴证将提取的质粒送SangOnBi。IeCh测序，结果如图1所示，序列峰图清晰有序，主峰明显，由于一个测序反应只能测到IooObP左右，pVAXl-SG的两个重要毒力功能区SpaP/A-CAT基因大小为1.8kb。对于PCR样品测序结果测到PCR终止末端的A减基，显示测序结果正常100%,真实可信（如图1）。图1pVAXI-SG质粒测序结果Fig.1SequencingresultsofpVAXl-SGPlaSmid2.2 实险样本的采集在免疫后7天采集乳腺（乳头周围ICm的范围，包埋于皮下组织中）后生理盐水冲洗，装入无菌、无醉EP管，并放入液缸速冻后80CC保存（图2和图3）。图2经肌肉注射DNA疫苗免疫SD大鼠Fig.2ImmunizationofSDratsbyintramuscularinjectionofDNAvacc