质谱分析技术.ppt
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1、用于蛋白质鉴定的两种基本的质谱分析技术用于蛋白质鉴定的两种基本的质谱分析技术1)MALDI-TOF MS Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization/基质辅助激光解吸附离子化 Time-Of-Flight mass spectrometry 飞行时间 PMF:peptide mass fingerprinting 肽质量指纹谱 MW:800-300,0002)SELDI-TOF MS Surface Enhanced Laser Desorption/Ionization 表面增强激光解吸附离子化 MW:2,000-50,0003)MS/MS Tan
2、dem MS串连质谱技术 MW:200-3,0001)MALDI-TOF MS(原理示意图)(原理示意图)Source Length=sField-free drift zone Length=DEd=0Microchannel plate detectorExtraction grid(source voltage-Vs)UV(337 nm)Detector grid-VsPulse voltageAnalyte/matrix用用MALDI-TOF MS和数据库鉴定细菌蛋白和数据库鉴定细菌蛋白GroELPMF肽质量指纹谱鉴定蛋白质例子Myoglobin GLSDGEWQQV LNVWGKVE
3、AD IAGHGQEVLI RLFTGHPETL EKFDKFKHLK TEAEMKASED LKKHGTVVLT ALGGILKKKG HHEAELKPLA QSHATKHKIP IKYLEFISDA IIHVLHSKHP GDFGADAQGA MTKALELFRN DIAAKYKELG FQGMyoglobin用胰蛋白酶限制酶切后产生的肽段(从碱性氨基酸的羧基端切断)Myoglobin GLSDGEWQQV LNVWGKVEAD IAGHGQEVLI RLFTGHPETL EKFDKFKHLK TEAEMKASED LKKHGTVVLT ALGGILKKKG HHEAELKPLA QSHA
4、TKHKIP IKYLEFISDA IIHVLHSKHP GDFGADAQGA MTKALELFRN DIAAKYKELG FQG胰蛋白酶酶切Myoglobin产生的肽段及其分子量 1811.90 GLSDGEWQQVLNVWGK 1606.85 VEADIAGHGQEVLIR 1271.66 LFTGHPETLEK 1378.83 HGTVVLTALGGILK 1982.05 KGHHEAELKPLAQSHATK 1853.95 GHHEAELKPLAQSHATK 1884.01 YLEFISDAIIHVLHSK 1502.66 HPGDFGADAQGAMTK 748.43 ALELFR 实
5、际质谱分析所得的肽质量指纹谱GLSDGEWQQVLNVWGKVEADIAGHGQEVLIRLFTGHPETLEKHGTVVLTALGGILKKGHHEAELKPLAQSHATKGHHEAELKPLAQSHATKYLEFISDAIIHVLHSKHPGDFGADAQGAMTKALELFR2)SELDI-TOF MS(原理示意图)(原理示意图)EAM:能量吸收分子SELDI-TOF MS分析使用的各种蛋白质芯片分析使用的各种蛋白质芯片SELDI-TOF MA检测结果与处理检测结果与处理实例:鼻咽癌病人血清标志物检测实例:鼻咽癌病人血清标志物检测卵巢癌细胞培养液卵巢癌细胞培养液上清中分泌蛋白的上清中分
6、泌蛋白的SELDI-TOF MS检检测分析测分析2)MS/MS串连质谱分析原理示意图串连质谱分析原理示意图限制酶切蛋白质为肽段Enzymatic DigestandFractionation第一步第一步MS分离各个肽段分离各个肽段第二步第二步MS对其中的一个肽段进行氨基酸序列分析对其中的一个肽段进行氨基酸序列分析MS/MS碰撞诱导解离碰撞诱导解离CID中多肽分子结构中中多肽分子结构中键断裂的多种可能性键断裂的多种可能性-HN-CH-CO-NH-CH-CO-NH-RiCH-Rbiyn-iyn-i-1bi+1R”i+1i+1aixn-icizn-i控制控制CID过程中的能量,使多肽主要从最弱的键过
7、程中的能量,使多肽主要从最弱的键-肽键处断裂产生肽键处断裂产生N-端端b系列和系列和C-端端y系列肽段系列肽段-HN-CH-CO-NH-CH-CO-NH-RiRi+1biyn-iyn-i-1bi+1串联质谱氨基酸序列分析例子串联质谱氨基酸序列分析例子肽段肽段SGFLEEDELK在理想条件下可生成的在理想条件下可生成的b、y系列离子系列离子MWionion MW88b1S GFLEEDELKy91080145b2SG FLEEDELKy81022292b3SGF LEEDELKy7875405b4SGFL EEDELKy6762534b5SGFLE EDELKy5633663b6SGFLEE D
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