蛋白质氨基酸.ppt
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1、第第4 4章章 蛋白质、氨基酸含量的检测蛋白质、氨基酸含量的检测主要内容主要内容 第一节第一节 蛋白质的定量测定方法蛋白质的定量测定方法 第二节第二节 氨基氮含量的检测方法氨基氮含量的检测方法 第三节第三节 多种氨基酸的分离和测定多种氨基酸的分离和测定 第四节第四节 味精纯度的测定方法味精纯度的测定方法第一节第一节 蛋白质含量的测定蛋白质含量的测定一、蛋白质概况一、蛋白质概况 蛋白质是含氮的有机化合物,分子量很大。蛋白质是含氮的有机化合物,分子量很大。主要由主要由C、H、O、N、S五种元素组成。某些蛋白五种元素组成。某些蛋白质中还含有微量的质中还含有微量的 P、Cu、Fe、I 等。等。样品中蛋
2、白质含量的测定,主要(也是最常用样品中蛋白质含量的测定,主要(也是最常用的)用凯氏定氮法测定总氮量,然后乘一个蛋白质的)用凯氏定氮法测定总氮量,然后乘一个蛋白质换算系数。这里也包括非蛋白的氮,所以只能称为换算系数。这里也包括非蛋白的氮,所以只能称为粗蛋白的含量。粗蛋白的含量。具体测定方法具体测定方法(一)凯氏定氮法(一)凯氏定氮法最常用的,国内外应用普遍最常用的,国内外应用普遍 (GB/T5009.5GB/T5009.52008 2008 第一法)。第一法)。(二)分光光度法(二)分光光度法(GB/T5009.5GB/T5009.52008 2008 第二法)第二法)(三)电位滴定法(三)电位
3、滴定法(四)双缩脲反应(四)双缩脲反应(五)杜马斯燃烧法(五)杜马斯燃烧法(SN/T2115-2008)(SN/T2115-2008)进出口食品和饲料中总氮及粗蛋白的检测方法进出口食品和饲料中总氮及粗蛋白的检测方法杜马斯燃烧法杜马斯燃烧法 二二 、蛋白质含量的定量测定蛋白质含量的定量测定 一些蛋白质的含氮量一般为一些蛋白质的含氮量一般为 15%-17.6%15%-17.6%,有的上下浮动有的上下浮动 可以测出总氮可以测出总氮 N N(一)凯氏定氮法(一)凯氏定氮法 丹麦化学家Johan Kieldahl(克达尔)(1849-1900)研制了今天人所共知的分析有机物中氮含量的凯氏法。于于1883
4、1883年提出,年提出,现发展为常量、微量、自动定氮仪法及改现发展为常量、微量、自动定氮仪法及改良凯氏法。只介绍前三种。良凯氏法。只介绍前三种。16%N=N=N6.25=6.25=蛋白质含量蛋白质含量 丹麦分析化学家。丹麦分析化学家。18491849年生于亚格普里斯年生于亚格普里斯,1900,1900年年7 7月月1818日卒于齐斯维勒莱厄。日卒于齐斯维勒莱厄。1873 1873年在哥本哈根大学毕业年在哥本哈根大学毕业后后,做过农业中学的教师。做过农业中学的教师。18751875年任卡尔斯堡研究所化年任卡尔斯堡研究所化学部负责人学部负责人,1876,1876年任所长年任所长,在研究所工作近在研
5、究所工作近2020年。他年。他是丹麦皇家科学院院士是丹麦皇家科学院院士,1884,1884年哥本哈根大学授予他名年哥本哈根大学授予他名誉博士学位。他主要研究发酵化学。誉博士学位。他主要研究发酵化学。18831883年发明测定年发明测定有机化合物中氮含量的方法有机化合物中氮含量的方法:他将一定质量的试样与硫他将一定质量的试样与硫酸作用酸作用,使试样中的氮全部转变为硫酸铵使试样中的氮全部转变为硫酸铵,然后往硫酸然后往硫酸铵溶液中加入碱铵溶液中加入碱,再将生成的氨蒸馏到一定体积的标准再将生成的氨蒸馏到一定体积的标准酸溶液中酸溶液中,再滴定过量的酸再滴定过量的酸,就能测出试样的含氮量。就能测出试样的含
6、氮量。此法普遍用于化学和医学研究及农业生产和药物工业。此法普遍用于化学和医学研究及农业生产和药物工业。后人称此法为克氏定氮法。此法所用的仪器是一种梨后人称此法为克氏定氮法。此法所用的仪器是一种梨形长颈烧瓶形长颈烧瓶,容量通常约容量通常约300300毫升毫升,微量分析用的可以小微量分析用的可以小到到1010毫升毫升,后人称这种烧瓶为克氏烧瓶。后人称这种烧瓶为克氏烧瓶。常量凯氏定氮法常量凯氏定氮法1.1.原理原理 样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出,质分解,其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出,而样品中的有机氮转
7、化为氨与硫酸结合成硫酸铵。而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏,使氨蒸出。然后加碱蒸馏,使氨蒸出。用用H3BO3吸收后再以标准盐酸溶液滴定。根据吸收后再以标准盐酸溶液滴定。根据标准酸消耗量可以计算出蛋白质的含量。标准酸消耗量可以计算出蛋白质的含量。也可以用过量的标准也可以用过量的标准H2SO4或标准盐酸溶液吸或标准盐酸溶液吸收后再以标准收后再以标准NaOH溶液滴定过量的酸。溶液滴定过量的酸。整个过程分三步:消化、蒸馏、吸收与滴定整个过程分三步:消化、蒸馏、吸收与滴定、消化消化 总反应式:总反应式:(1 1)加硫酸钾)加硫酸钾 作为增温剂,提高溶液沸点,作为增温剂,提高溶液沸
8、点,纯硫酸沸点纯硫酸沸点 340 340,加入硫酸钾之后可以提高,加入硫酸钾之后可以提高至至400400以上。也可加入硫酸钠,氯化钾等提以上。也可加入硫酸钠,氯化钾等提高沸点,但效果不如硫酸钾。高沸点,但效果不如硫酸钾。2NH2(CH2)2COOH+13H2SO4 (NH4)2SO4+6CO2+12SO2+16H2O一定要用浓硫酸一定要用浓硫酸(98%)(2 2)加硫酸铜加硫酸铜 作为催化剂。还可以作消化作为催化剂。还可以作消化终点指示剂(做蒸馏时碱性指示剂)。还可以终点指示剂(做蒸馏时碱性指示剂)。还可以加氧化汞、汞(均有毒,价格贵)、硒粉、二加氧化汞、汞(均有毒,价格贵)、硒粉、二氧化钛。
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- 关 键 词:
- 蛋白质 氨基酸