3.2月季的花药培养课件肖婷.ppt

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1、花丝花丝花药：花药：囊状结构，内有很多花粉囊状结构，内有很多花粉雄蕊雄蕊1个小孢子母细胞（2n）4个小孢子（n）4个营养细胞（n）4个生殖细胞（n）42个精子（n）减数减数分裂分裂有丝有丝分裂分裂有丝有丝分裂分裂小孢子母细胞小孢子母细胞小孢子小孢子花粉囊花粉囊花药花药花粉粒（双核期）花粉粒（双核期）成熟花粉成熟花粉F.生殖细胞游离存在于营养细胞的细胞质中；生殖细胞游离存在于营养细胞的细胞质中；GH.3细胞型花粉，生殖细胞分裂形成细胞型花粉，生殖细胞分裂形成2个精子，游离于营养细胞的个精子，游离于营养细胞的 细胞质中；细胞质中；花粉母细胞花粉母细胞-四分体四分体-单细胞花粉粒单细胞花粉粒-单细胞

2、花粉粒单细胞花粉粒-二细胞花粉二细胞花粉-生殖生殖细胞细胞-三细胞花粉（成熟花粉）三细胞花粉（成熟花粉）减数分裂减数分裂单核居中期单核居中期液泡扩大，细胞核靠边液泡扩大，细胞核靠边单核靠边期单核靠边期营养细胞，生殖细胞营养细胞，生殖细胞营养细胞营养细胞1个，精子个，精子2个个有丝分裂有丝分裂有丝分裂有丝分裂 花粉是由花粉母细胞（小孢子母细胞）经花粉是由花粉母细胞（小孢子母细胞）经过过而形成的，因此，花粉是而形成的，因此，花粉是。花粉的发育要经历：花粉的发育要经历：时期、单核期、时期、单核期、双核期双核期等阶段。等阶段。8 8个精子个精子4 4个花粉管细胞核个花粉管细胞核4 4个小孢子个小孢子减

3、分减分有分有分4 4个生殖细胞核个生殖细胞核有分有分1 1花粉母细胞花粉母细胞 营养细胞营养细胞A.A.花粉是花粉母细胞经有丝分裂形成的花粉是花粉母细胞经有丝分裂形成的B.B.花粉的发育要经历小孢子四分体时期、单核花粉的发育要经历小孢子四分体时期、单核期和双核期期和双核期C.C.花粉发育经历的四分体时期与减数分裂的四花粉发育经历的四分体时期与减数分裂的四分体时期含义相同分体时期含义相同D.D.花粉母细胞形成花粉粒中精子的过程是一系花粉母细胞形成花粉粒中精子的过程是一系列减数分裂的过程列减数分裂的过程1.1.下列关于被子植物花粉的形成，说法下列关于被子植物花粉的形成，说法正确的是正确的是B2.2

4、.下列关于被子植物花粉发育的说法，下列关于被子植物花粉发育的说法，不正确的是不正确的是A.A.被子植物精子的形成是直接减数分裂的被子植物精子的形成是直接减数分裂的结果结果B.B.花粉粒是在花妖中的花粉囊中形成的花粉粒是在花妖中的花粉囊中形成的C.C.花粉粒在发育过程中，核先位于细胞中花粉粒在发育过程中，核先位于细胞中央，在移到细胞的一侧央，在移到细胞的一侧D.D.被子植物花粉的发育要经历小孢子四被子植物花粉的发育要经历小孢子四分体时期、单核期和双核期等阶段分体时期、单核期和双核期等阶段A移栽移栽花药中花药中的花粉的花粉胚状体胚状体脱分化脱分化 愈伤组织愈伤组织 花药中花药中的花粉的花粉脱分化脱

5、分化 分化分化 丛芽丛芽 再分化再分化 丛芽丛芽 诱导诱导生根生根两种途径之间无明显的界限，主要取决于培养基中的激素的种类两种途径之间无明显的界限，主要取决于培养基中的激素的种类及其浓度配比。及其浓度配比。体细胞胚（胚状体）：体细胞胚（胚状体）：在组织培养过程中，某些体细胞在形在组织培养过程中，某些体细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似，被称为结构，发育过程亦与合子胚类似，被称为。3.3.下列对产生花粉植株途径的叙述，下列对产生花粉植株途径的叙述，不正确的是不正确的是A.A.花粉通过胚状体阶段直接发育成植株花粉通过胚状体阶

6、段直接发育成植株B.B.花粉先形成愈伤组织在诱导分化成植株花粉先形成愈伤组织在诱导分化成植株C.C.花粉经脱分化形成胚状体，在分化出根，花粉经脱分化形成胚状体，在分化出根，然后诱导生芽然后诱导生芽D.D.两种途径并无绝对的界限，主要取决两种途径并无绝对的界限，主要取决于培养基中激素的种类和浓度比例于培养基中激素的种类和浓度比例C1、材料的选择材料的选择 不同植物不同植物 同一植物的不同生理状况同一植物的不同生理状况（花期早期初花期）（花期早期初花期）合适的花粉发育期合适的花粉发育期（单核居中期与靠边期之间）（单核居中期与靠边期之间）植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等植株生长条件、材料低温

7、预处理、接种密度等 花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉植株。花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉植株。一般月季的花药培养时间选在五月初到五月中旬，即月一般月季的花药培养时间选在五月初到五月中旬，即月季的季的。选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的重选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的重要因素。一般来说，在要因素。一般来说，在，细胞核，细胞核由中央移向细胞由中央移向细胞一侧的时期一侧的时期，花药培养成功率最高。，花药培养成功率最高。为了挑选到单核期的花药，通常为了挑选到单核期的花药，通常选择选择完全未开放完全未开放的花蕾的花蕾。培养基的种类因植物的不同而有所变化，如小麦培养基的种

8、类因植物的不同而有所变化，如小麦中为中为N6N6，马铃薯、月季中为，马铃薯、月季中为MSMS，油菜中为，油菜中为B5B5培培养基养基2.培养基的组成培养基的组成培养基各成分中，培养基各成分中，植物生长调节剂的水平和配比植物生长调节剂的水平和配比，常对诱导细胞的分裂、生长和分化起决定作用。常对诱导细胞的分裂、生长和分化起决定作用。月季花的培养基配方月季花的培养基配方 在在1000mlMS1000mlMS培养基配方中添加培养基配方中添加 2 2，4 4D 0.4mgD 0.4mg KT 0.2mg KT 0.2mg IAA 4mg IAA 4mg调节调节PHPH为为5.85.8一、材料的选取一、材

9、料的选取二、材料的消毒二、材料的消毒三、接种和培养三、接种和培养 选择花药时，一般通过镜检来确定其选择花药时，一般通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。中的花粉是否处于适宜的发育期。最常用的方法有最常用的方法有醋酸洋红法醋酸洋红法。但是，。但是，某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青焙花青-铬矾法铬矾法，这种方法能将花粉细胞核，这种方法能将花粉细胞核染成染成蓝黑色蓝黑色。4.4.用醋酸洋红法确定花粉发育时期的用醋酸洋红法确定花粉发育时期的原理是原理是A.A.醋酸洋红可使细胞全部着色醋酸洋红可使细胞全部着色B.B.醋酸洋红可使单核期的细胞着色醋酸洋

10、红可使单核期的细胞着色C.C.醋酸洋红可使花粉细胞核着色醋酸洋红可使花粉细胞核着色D.D.醋酸洋红可进入细胞显示放射性标记醋酸洋红可进入细胞显示放射性标记C1 1、花蕾用、花蕾用V/VV/V为为70%70%的酒精的酒精浸泡浸泡3030秒秒2 2、无菌水清洗、无菌水清洗3 3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分4 4、放入、放入质量分数为质量分数为0.1%0.1%的氯化汞的氯化汞溶液中溶液中2424分钟（也可分钟（也可质量分数为质量分数为1%1%的次氯酸钙溶液的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液或饱和漂白粉溶液）5 5、无菌水冲洗、无菌水冲洗3535次次 用于培养花药，实际上多

11、数未熟，由于它的外面有用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将只要将整个花蕾或幼穗消毒即可整个花蕾或幼穗消毒即可 灭菌后花蕾，要在无菌条件下除去萼片和花瓣，灭菌后花蕾，要在无菌条件下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上并立即将花药接种到培养基上 在剥离花药时，要尽量不损伤花药（否则接种在剥离花药时，要尽量不损伤花药（否则接种后，容易从受伤部位产生后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织二倍体的愈伤组织）同时还要彻底去除花丝，因为与同时还要彻底去除花丝，因为与花丝相连花丝相连的花的花药不利于愈伤

12、组织或胚状体的形成。药不利于愈伤组织或胚状体的形成。通常每瓶接种花药通常每瓶接种花药7-107-10个，温度控制在个，温度控制在2525左左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。一般经过一般经过20-3020-30天培养后，会发现花药开裂，长天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。出愈伤组织或释放出胚状体。将将愈伤组织愈伤组织及时转移到及时转移到分化培养基分化培养基上，以便进上，以便进一步分化出再生植株。一步分化出再生植株。如果花药开裂释放出如果花药开裂释放出胚状体胚状体，则一个花药内就会，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药

13、开裂后尽快产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小将幼小植株分开植株分开，分别移植到，分别移植到新的培养基新的培养基上，否则这些植上，否则这些植株将很难分开。株将很难分开。在花药培养中，特别是通过愈在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性染色体倍性的变化。（主要原因是的变化。（主要原因是营营养核和生殖核融合养核和生殖核融合造成的。造成的。）故需故需对培养出来的植株作进一步的鉴定和对培养出来的植株作进一步的鉴定和筛选。筛选。植物组织培养技术与花药培养技术的比较植物组织培养技术与花药培养技术的比较项目项目相同点相同点不同点不同点植物组

14、织植物组织培养技术培养技术离体的植物离体的植物组织经脱分组织经脱分化形成愈伤化形成愈伤组织，再分组织，再分化成丛芽，化成丛芽，诱导出根，诱导出根，然后进行移然后进行移栽。栽。外植体为体细胞，染色体数无外植体为体细胞，染色体数无需加倍。需加倍。花药培养花药培养技术技术取材为花药，培养的为取材为花药，培养的为，植株弱小，高度不育，植株弱小，高度不育，必须用秋水仙素处理，使染色必须用秋水仙素处理，使染色体加倍，恢复正常植株的染色体加倍，恢复正常植株的染色体数，而且为体数，而且为。植物组织培养技术与花药培养技术的植物组织培养技术与花药培养技术的 相同相同之处之处是：培养基配制方法、无菌技术及接种操是：

15、培养基配制方法、无菌技术及接种操作等基本相同。作等基本相同。不同之处不同之处在于：花药培养的选材非常重要，需在于：花药培养的选材非常重要，需事先摸索事先摸索时期适宜的花蕾；花药裂开后释放出时期适宜的花蕾；花药裂开后释放出的愈伤组织或胚状体也要及时更换培养基；花的愈伤组织或胚状体也要及时更换培养基；花药培养对培养基配方的要求更为严格。这些都药培养对培养基配方的要求更为严格。这些都使花药培养的难度大为增加。使花药培养的难度大为增加。课题成果评价课题成果评价课题成果评价课题成果评价课题成果评价课题成果评价接种是否成功接种是否成功 如果接种的花药长出愈伤组织如果接种的花药长出愈伤组织或释放出胚状体，花药培养的第一或释放出胚状体，花药培养的第一步就成功了。要适时转换培养基，步就成功了。要适时转换培养基，以便愈伤组织或胚状体进一步分化以便愈伤组织或胚状体进一步分化成再生植株。成再生植株。