甜菜碱对大鼠肝癌的作用及其抗氧化机制的探讨.docx

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1、甜菜碱对大鼠肝癌的作用及其抗氧化机制的探讨杜艳平，区俊文，王军花，习文韬，唐艳辉(广州中医药大学祈福医院营养科，广东广州510000)摘要目的探讨甜菜碱(Bet)在二乙基亚硝胺(DEN)致大鼠肝癌过程中对肝脏病理损伤及肝功能的影响，并从抗氧化作用探讨其机制。方法在0.01%DEN诱导大鼠肝癌过程中，用1%Bet进行干预，观察大鼠一般情况。肝脏切片用HE染色观察病理改变；全自动生化分析仪检测肝功能相关酶ALT、AST、ALP、GGTo测定肝匀浆丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽硫转移酶(GST)和超氧化物歧化酶(SOD)酶活性、以及总抗氧化能力(T-AC)C).结果从第2周开始，DEN组和DEN+1

2、%B组大鼠体重低于正常组，差异有统计学意义(P0.05)；病理结果显示DEN+1%B组肝脏癌变程度比DEN组轻；给予DEN的2个组大鼠肝脏功能均受损，但给予DEN+1%B组较轻(P0.05),差异有统计学意义；第8周DEN组MDA含量及GST酶活性均高于正常组(P0,05),而DEN+1%B组MDA含量低于DEN组(P0.05)O结论l%Bet能够减弱DEN对大鼠肝脏的诱癌效应，具有抗脂质过氧化能力，在DEN致大鼠肝癌过程中起到一定作用。关键词甜菜碱；肝癌；脂质过氧化Effectsofbetaineonlivercancerofratanditsantioxidation.DUYan-Ping

3、,OUJun-Wen,WANGJun-Hua,XIWen-Tao,TANGYan-Hui.NutritionalDepartment,CliffordHospital,GuangzhouUniversityofChineseMedicine,No.3.HongfuRoad,PanyuDistrict,Guangzhou511495,China(Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectsofbetaine(Bet)onpathologydamageofliverandliverfunction,andinvestigatethemechanismfromi

4、tsantioxidationtoliverintheprocedureofdiethylnitrosamine(DEN)inducinglivercancerofrats.MethodsIntheprocessof0.01%DENinducedhepatocellularcarcinomainrats,1%BETwasusedtointervene,andthegeneralconditionofratswasobserved.HepaticsectionswerestainedwithHEtoobservethepathologicalchanges.Liverfunctionrelate

5、denzymesALT,AST,ALPandGGTweredetectedbyautomaticbiochemicalanalyzer.Thecontentsofmalondialdehyde(MDA),theactivitiesofglutathionethiotransferase(GST)andsuperoxidedismutase(SOD),andthetotalantioxidantcapacity(T-AOC)ofliverhomogenateweredetermined.ResultsFromweek2,thebodyweightofratsintheDENgroupandthe

6、DEN+Betgroupwaslowerthanthatinnormalgroup,andthedifferencewasstatisticallysignificant(P0.05).Conclusion1%betainecanattenuateeffectsofDENinducinglivercancerandprotectliveragainstlipidperoxidation,soitplayssomerolesinthedevelopmentoflivercancerofratinducedbyDEN.KeyWords：betaine;livercancer;lipidperoxi

7、dation原发性肝癌(PrimaryhePatiCCarCinoma,PHC,以下简称肝癌)严重威胁我国居民身体健康，是我国排名第四位的常见恶性肿瘤。肝癌死亡率高，在我国恶性肿瘤中死亡顺位仅次于胃癌和食道癌而居第三位。肝癌的形成是一个多因素的复杂过程，发病过程隐匿，不利于早期防治。甜菜碱(Betaine)是季胺盐型水溶性生物碱，具有多种生物学功能，可以降低毒物所导致的肝脏毒性，改善肝脏脂质过氧化状态，对肝脏起到保护作用，这在一定程度上可减弱外来化合物诱发肝癌的效应但)。为探讨甜菜碱在肝癌发生过程的作用，本研究以SPraggDaWley(SD)大鼠为研究对象，二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠产生

8、肝癌，并用不同剂量的甜菜碱进行干预，以观察甜菜碱对肝癌形成的影响，并探讨可能的机制。1材料与方法1.1 动物受试物及试剂甜菜碱（纯度96%）,购自FinnfeedsFinlandLtd（芬兰）公司；DEN（纯度95%）,购自Sigma公司；血清肝功能相关前所用试剂购自中生北控生物技术股份有限公司；肝匀浆脂质过氧化及抗氧化指标所用试剂盒购自南京建成生物工程研究所。1.2 实验动物及处理44只SPF级健康雄性SD大鼠，体重15010（g）,购自广东省医学动物实验中心（合格证号：）。适应环境3天后进入实验，将大鼠按照体重编号后采用完全随机与分层随机相结合的方法分为5个组：正常组12只、DEN组18只

9、、DEN+甜菜碱组（DEN+1%B组）14只。正常组、DEN组给予AIN-93G基础饲料，在基础饲料基础上，甜菜碱干预剂量参考既往研究，DEN+Bet组添加1%甜菜碱。所有大鼠代谢笼饲养，自由摄食饮水，除正常组外，其余4组均给予0.01%DEN水置于避光饮水瓶中任其自由饮用。在第8周各组随机选取5只大鼠股动脉取血后脱臼处死，取肝、脾、肺、肾，称重后-80C保存。DEN组在实验第14周和15周各随机选取2只大鼠处死以观察肝癌形成情况，第15周末肝癌出现时处死所有大鼠。1.3 指标测定1.3.1 肝脏病理切片的制备对已发生肝癌的大鼠取肝结节及周围组织，没发生肝癌大鼠取右1/4肝上叶，10%中性福尔

10、马林固定，经脱水、透明、浸蜡、常规石蜡包埋、制备成5um左右的切片，苏木素伊红（HE）染色，进行常规组织学检查。1.3.2 血清肝功能相关酶测定全自动生化分析仪检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）.碱性磷酸酶（ALP）.y-谷氨酰转移酶（GGT）。1.3.3 肝匀浆脂质过氧化及抗氧化指标的测定称取0.5克肝脏，转移至预冷的玻璃匀浆器中，加9倍（4.5ml）冰冷的生理盐水,冰上将肝脏研磨至10%匀浆,40OOg离心20分钟,取上清,分装后-20保存待测。按试剂盒方法分别测定丙二醛（MDA）含量、谷胱甘肽硫转移成(GST)和超氧化物歧化酶(SOD)酶活性、以及总抗氧化能力(T-

11、AOC),考马斯亮蓝法测定肝匀浆蛋白质含量。1.4 统计分析SPSS22.0软件建立数据库，结果以均数士标准差Gs)表示，采用单因素方差分析(One-WayANoVA)及LSD检验进行统计分析，检验水准设为0.05。2结果2.1 实验动物一般状况给予DEN的2个组大鼠从第2周开始体重低于正常组；第4周之后逐渐出现被毛蓬松污秽、毛色黯淡，眼睛无神，精神萎靡，拱背等变化；DEN+1%B组上述症状比DEN组轻。DEN+1%B组第15周有一只大鼠死亡，解剖发现肝癌结节有破裂。对各组不同周次的大鼠体重进行方差分析及LSD检验，有图1可见，从第2周开始DEN组、DEN+Bet组体重低于正常组(P0.05)

12、。注：曲线上,表示正常组与其他组相比，P0.05,差异有统计学意义图1各组大鼠体重变化曲线图2.2 各组大鼠的脏器指数表1可见，DEN组在第8周及第15周均有多个脏器指数升高(P0.05),而DEN+1%B组只在第8周出现肺脏指数升高(P0.05)0表1各组不同时间的脏器指数（Xs,g100g）周次组别肝脏指数脾脏指数肺脏指数肾脏指数正常组（n=5）2.5300.1910.150+0.0320.4160.0380.650+0.021DEN组(n=5)2.5190.0940.206+0.0350.8360.206”0.789+0.161*8wDEN+1%B组(n=5)2.2040.1930.20

13、20.0440.8540.29140.6120.027F值2.2923.5617.92612.56P值0.1440.0610.0060.001正常组（n=7）2.1480.1800.1570.0240.3710.1030.551+0.024DEN组(n=9)3.5060.5110.2190.035*1.4170.9070.6140.10715wDEN+1%B组(n=8)2.485+0.4440.1840.0240.7340.2510.584+0.026F值13.595.67015.330.308P值0.0010.0180.0010.740注：同一时间数值旁*表示与正常相比，P0.05,差异有统

14、计学意义2.3 大鼠肝脏形态学观察大体观（见图1）：第8周DEN+1%B组肝脏肉眼观无明显变化，DEN组肝脏肿大，表面粗糙暗淡、部分可见灰白色点状斑点；第15周给予DEN的2个组所有大鼠均有灰白色或灰黄色结节出现，但结节病变程度并不相同，DEN组肝脏多出现弥漫性大结节（直径多为5mm左右），DEN+1%B组结节较小（直径Imm左右）、个数也比DEN组少。镜下观（见图2）：第8周DEN+1%B组肝细胞结构轻微破坏，出现部分肝细胞肥大增生、少量空泡变性；DEN组肝细胞明显空泡变性，局灶性坏死,纤维组织增生。第15周DEN+1%B组肝细胞核增大，染色质深染，呈现不典型增生；DEN组肝小叶结构完全破坏，结节内肝细胞异型性增生明显，胞质染色不均匀，核大，核仁清楚，核分裂像多见。DEN+1%B组DEN组图1大鼠肝脏大体观正常