化妆品菌落总数的测定程序文件.docx

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1、XX精细化工有限公司文件标题化妆品菌落总数的测定文件编号编制部门品管部文件级别普通执行日期1、目的：明确微生物菌落总数的检验操作方法，保证检验结果的准确性。2、范围与职责：适用于本公司产品的微生物检测。品管部制定，微生物检验员执行，品管部主管监督3、术语和定义：菌落总数：是指化妆品检样经过处理，在一定条件培养后（如培养基成份、培养温度和时间、PH值、需氧性质等），所得ImL（或Ig）检样中形成菌落的总数。所得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温需氧性菌落总数。测定菌落总数便于判明样品被细菌污染的程度，是对样品进行卫生学总评价的综合依据。4、化枚品菌落总数的测定4.1 试剂和材料4.1.

2、1 卵磷脂、吐温80-营养琼脂培养基；4.1.2 生理盐水：称取8.5gNaQ溶于I（M）OmL蒸储水中；4.1.3 75%乙醇；4.1.4 液体石蜡；4.1.5 吐温80。4.1.6 0.5%TTC溶液4.2 仪器4.2.1 恒温培养箱：36CC;4.2.2 冰箱：25；4.2.3 恒温水浴锅：46oCC;4.2.4 天平：感量0.1g；4.2.5 锥形瓶:300mL；4.2.6 玻璃珠：直径约5mm；4.2.7 培养皿：直径为90mm；4.2.8 试管：16mmxl60mm04.2.9 酒精灯；4.2.10 吸管：ImL（具0.0ImL刻度）、IOmL（具QlmL刻度）或微量移液器或吸头4

3、.2.11 均质器或乳钵；4.2.12 烘箱;4213高温灭菌器。4.3 分析步骤431样品的稀释4.3.1.1 水溶性的液体样品称取IOg样品于含有90mL灭菌生理盐水的锥形瓶中，充分混匀后，制成1：10稀释液。若样品少于IOmL,仍按十倍稀释法进行，如：5g样品加入45mL灭菌生理盐水。4.3.1.2 油性液体样品称取IOg样品于空的灭菌锥形瓶中，先加5mL灭菌液体石蜡混匀，再加IOmL灭菌吐温80混匀，加入灭菌生理盐水75mL,充分震荡混匀，制成1：10的悬液。（为使样品快速溶解可将液体石蜡、吐温80、生理盐水在4044C水浴中预温）4.3.1.3 亲水性膏、霜、乳剂半固体状样品称取IO

4、g样品于带玻璃珠的含有90mL灭菌生理盐水的锥形瓶中，充分震荡混匀，制成1：10的悬液。若样品少于IOmL,仍按十倍稀释法进行，如：5g样品加入45mL灭菌生理盐水。4.3.1.4 水性膏、霜、乳剂半固体状样品称取样品IOg于空的带玻璃珠的灭菌锥形瓶中，先加IOmL灭菌液体石蜡摇匀或研磨成稠状，再加IOmL灭菌吐温80混匀，加入灭菌生理盐水70mL,充分震荡混匀，制成1：10的悬液。（为使样品快速溶解可将液体石蜡、吐温80、生理盐水在4044C水浴中预温）4.3.1.5 固体样品称取样品IOg于含有90mL灭菌生理盐水的锥形瓶中，振荡混匀，使其分散混悬后，静置后，取其上清液作为1：10稀释液。

5、43.1.6 如有均质器，上述水溶性膏、霜、粉剂等，可称IOg样品加90mL灭菌生理盐水，均质l2min:疏水性膏、霜及眉笔、口红等，称IOg样品加IOmL灭菌的液体石蜡，再加IOmL灭菌吐温80,加70mL灭菌生理盐水或Ig样品加ImL灭菌液体石蜡、Ig灭菌吐温80、7mL灭菌生理盐水，均质35min043.1.7 取1：10的检液2mL分别注入2个灭菌平皿内，每皿ImLo另取ImL注入到9mL的灭菌生理盐水试管中（注意勿使吸管接触液面），充分混匀，使制成1:100稀释液，更换支吸管取2mL分别注入2个灭菌平皿内，每皿ImL。如样品菌量较多时可依序再做稀释1：100；1：1000等。同时作空

6、白对照。43.1.8 分别注入灭菌好并冷却至45C左右的卵磷脂吐温80培养基约15mL,充分摇匀。凝固后，翻转平板，置36C1C培养箱，培养48h2h,计数。43.1.9 为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每IOOmL卵磷脂、吐温80-营养琼脂培养基中加入ImLO.5%的TTC溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而化妆品颗粒颜色无明显变化。4.3.2 菌落计数方法先用肉眼观察，点数菌落数，必要时用5/0倍的放大镜检查，以防遗漏。求出同一稀释度各培养皿生长的平均菌落数，若培养皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该培养皿不宜计数。若片状菌落不到培养皿中的一半，而其余一半中菌落数分布又很

7、均匀，则可将此半个培养皿菌落计数后乘2,以代表整个培养皿的菌落数。4.3.3 菌落计数及报告方法1.1 3.1首先选取平均菌落数在3O3OO之间的培养皿，作为菌落总数测定的范围。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该培养皿菌落数乘其稀释倍数。（见表1中例1）1.2 .3.2若有两个稀释度，其平均菌落数均在30-300个之间，则应求出两者菌落总数之比值来决定，若其比值小于或等于2,应报告其平均数，若大于2则报告其中较小的菌落数。（见表1中例2及例3）1.3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300个，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。（见表1中例4）1.4 若所有稀释度的平均

8、菌落数均少于30个，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。（见表1中例5）1.5 若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300个之间，其中一个稀释度大于300个，而相邻的另一稀释度小于30个时，则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。（见表1中例6）1.1.1 .6若所有的稀释度均无菌生长,报告数为每克或每毫升小于10个。4.33.7 菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零的个数，也可用10的指数来表示。（见表1中“报告方式”栏）表1稀释度选择及菌落数报告方式例次稀

9、释液及菌落数两稀释之比菌落总数个/（g或mL）报告方式个/（g或mL）IO-1IO-210-31多不可计164201640016000sgl.61042多不可计295463775038OOO或38XIO3多不可计271601.02710027OOo或2.7X1044多不可计多不可计313L.L313000310000或3.1XIOfi527115270270或2.7X10260001X10107多不可计305123050031OOo或3.1X1044.4控制要点4.4.1 仪器的使用要点4.4.1.1 培养箱的使用要点：将温度设定成（361）C,在培养过程中,注意漏电开关跳闸。4.4.1.2

10、电子天平使用要点：使用前必须用75%的乙醇擦拭整个外壳。441.3灭菌锅使用要点：完全按琼脂要求设定温度、灭菌时间，加水量到绿色的指示灯亮时再加50OmL水；盖上盖子时先检查垫圈是否在槽内，盖盖子时一定要把盖拧紧，以免压力过高水从垫圈缝隙喷出；压力降到“0”帕时，打开上排气阀，方可打开盖子；严格按灭菌锅的使用说明书操作。4.4.1.4操作室应采用紫外灯灭菌,约30分钟,灭菌后1小时后方可进去操作。4.4.2玻璃仪器使用要点442.1实验完后,培养皿用洗涤剂清洗干净、烘干，装入桶内待灭菌.4.4.2.2培养皿用干热法灭菌，所需条件是160,2小时。4.4.23所用的玻璃仪器必须是专用的，以免交叉

11、污染4.4.2.4锥形瓶、移液管等用清洗干净后，烘干待用。4.4.3试剂的质量控制要点4.4.3.1 实验中所使用的培养基应在保质期内，放置于干燥环境下，并经过高压灭菌后方可使用。4.4.3.2 各种试剂应无分层、无悬浮物、无异味。443.3 试剂应严格按照产品说明书，进行储存和使用。443.4 检验程序控制要点444.1 无菌室必须经过紫外线杀菌，在杀菌过程中不得入内，紫外灯关闭30min以上方可入内。444.2 进入无菌室时，必须更换工衣工帽以免带入细菌造成污染。与微检工作无关的人员不得随意进出微检室。444.3 操作时，按要求使用超净工作台，并注意关闭门窗，所用样品和试剂容器外壁必须使用75%乙醇溶液擦洗过，并由送样窗进出。整个操作过程中必须靠近点燃的酒精灯。444.4 .4稀释成各稀释度时注意吸管尖端不要触及管内稀释液。444.5 检验过程中必须快速熟练完成整个操作过程。444.6 培养后带菌样品不得随便乱置，按要求灭菌后再统一处理。444.7 指标444.7.1 细菌总数WlOoCFUg注：在检验过程中,从开封到检验结束,均需防止微生物的再污染和扩散,所用器皿和材料均应事先灭菌。全部操作都在无菌条件下进行。编制审核批准日期日期日期