霍乱实验室检测.ppt
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1、霍乱的实验室检测霍乱的实验室检测 霍乱是由霍乱是由0101群和群和01390139群群霍乱弧菌(霍乱弧菌(V Vcholeraecholerae)引起的急性肠道传染病,发病急、传播速度快、波引起的急性肠道传染病,发病急、传播速度快、波及范围广、危害严重的及范围广、危害严重的甲类传染病。甲类传染病。 古典生物型古典生物型 小川型小川型 Ogawa (AB) O1群群 稻叶型稻叶型 Inaba (AC) 埃尔托生物型埃尔托生物型 彦岛型彦岛型 Hikojim (ABC)霍乱弧菌霍乱弧菌 霍乱病原菌霍乱病原菌 O139群(群(Bengal) 非非O1群群 O2-O200群群 腹泻病原菌腹泻病原菌毒毒
2、 素素 霍乱肠毒素霍乱肠毒素(CT) :前噬菌体基因编码前噬菌体基因编码 小带联结毒素小带联结毒素 Zot 增加肠黏膜通透性增加肠黏膜通透性 副霍乱肠毒素副霍乱肠毒素Ace 肠段积液肠段积液侵袭力侵袭力 鞭鞭 毛毛 菌毛:菌毛:acf、tcpA致病物质致病物质CTCT的结构的结构B亚单位:亚单位:与小肠粘膜上皮细胞与小肠粘膜上皮细胞GM1神经节苷脂受体结合;神经节苷脂受体结合;由由1个个A亚单位和亚单位和5个个B亚亚单位构成的多聚体,不耐单位构成的多聚体,不耐热。热。(前噬菌体基因编码)(前噬菌体基因编码)1A+5B所致疾病:烈性肠道传染病霍乱所致疾病:烈性肠道传染病霍乱传染源传染源: :病人
3、病人/ /无症状带菌者无症状带菌者, ,人是霍乱弧菌的唯一易感者人是霍乱弧菌的唯一易感者传播途径:传播途径:粪粪- -口途径口途径 流行特征:地方性、季节性。流行特征:地方性、季节性。 霍乱典型临床特征霍乱典型临床特征患者出现上吐下泻,泻出物呈患者出现上吐下泻,泻出物呈“米泔水样米泔水样”。 并发症有血容量减少,并发症有血容量减少, 循环衰竭及肾功能衰竭,循环衰竭及肾功能衰竭,导致尿闭、电解质、酸碱平衡失调导致肌肉痉挛。导致尿闭、电解质、酸碱平衡失调导致肌肉痉挛。 免疫性感染后可获感染后可获牢固免疫力牢固免疫力;再感染少见;再感染少见 局部黏膜免疫;抗菌抗体(局部黏膜免疫;抗菌抗体(O);抗毒
4、素抗体();抗毒素抗体(B) O1群与群与O139群不存在交叉免疫保护作用。群不存在交叉免疫保护作用。 O1O1群,群,O139O139群霍乱弧菌群霍乱弧菌 剧烈腹泻、呕吐、严重脱水时致酸中毒、循环衰竭而致死亡剧烈腹泻、呕吐、严重脱水时致酸中毒、循环衰竭而致死亡 不治疗或医疗很差的条件下病死率可达到不治疗或医疗很差的条件下病死率可达到20205050(重症病人达(重症病人达7070100100) pH:7.4-9.6pH:7.4-9.6快速生快速生长长 WS 289-2008 WS 289-2008 霍乱诊断标准霍乱诊断标准 霍乱防治手册(霍乱防治手册(19991999年第五版)年第五版) 病
5、例:粪便、肛拭子、呕吐物病例:粪便、肛拭子、呕吐物 未使用抗生素之前未使用抗生素之前 “ “健康健康”人:粪便、肛拭子人:粪便、肛拭子 其他传播环节的标本:食物、水、环境类样品其他传播环节的标本:食物、水、环境类样品 监测:水样,水产品等监测:水样,水产品等一般要求在一般要求在3 3小时内小时内室温(室温(20-25 )条件下)条件下送达实验室检测送达实验室检测 C-B C-B运输培养基(运输培养基(pH8.4pH8.4); ; (或文腊二氏保存液)(或文腊二氏保存液) 碱性蛋白胨水碱性蛋白胨水(pH8.4-9.2) :不是最佳的,尤其:不是最佳的,尤其6 6小时内还不能进小时内还不能进行培养
6、时,尽量采用行培养时,尽量采用 C-BC-B运输培养基。运输培养基。 以采集病人自然排除的新鲜粪便为主,水样便采取以采集病人自然排除的新鲜粪便为主,水样便采取1 13mL3mL,成形便采取,成形便采取指甲大小的粪量,亦可用直肠棉拭或采便管由肛门插入直肠内指甲大小的粪量,亦可用直肠棉拭或采便管由肛门插入直肠内3 35cm5cm处处采取,采集后的样品应尽快挑取接种于碱性蛋白胨水(采取,采集后的样品应尽快挑取接种于碱性蛋白胨水(8.8.-9.2-9.2),),同时划线分离选择性培养基(庆大四号平板),如不能在同时划线分离选择性培养基(庆大四号平板),如不能在小时内送达实验室检测的样品,应插入小时内送
7、达实验室检测的样品,应插入Cary-BlairCary-Blair二氏半固体保存培养二氏半固体保存培养基(或文腊二氏保存液)中送检。标本与保存液比例约为基(或文腊二氏保存液)中送检。标本与保存液比例约为1515。碱性蛋白胨水(第一管)中,同时划线分离选择碱性蛋白胨水(第一管)中,同时划线分离选择性平板(庆大四号平板,第一板)。性平板(庆大四号平板,第一板)。 碱性蛋白胨水在碱性蛋白胨水在 增菌小时,沾取菌膜下表层液体,增菌小时,沾取菌膜下表层液体,划线分离选择性平板(庆大四号平板,第二板),同时吸划线分离选择性平板(庆大四号平板,第二板),同时吸取取0.10.10.2 ml0.2 ml表层培养
8、物表层培养物,接种碱性蛋白胨水(第二管)。,接种碱性蛋白胨水(第二管)。 碱性蛋白胨水增菌小时后划线分离选择性平板(庆大四号碱性蛋白胨水增菌小时后划线分离选择性平板(庆大四号平板,第三板)。平板,第三板)。 水体的采集一般用无菌的水体的采集一般用无菌的500ml500ml水样瓶采集相对静止的表层水水样瓶采集相对静止的表层水( (深度为深度为 30cm30cm以内以内)500ml)500ml,密封加盖后于室温(,密封加盖后于室温(20-25 20-25 )3 3小时内送达实验室小时内送达实验室检测。检测。 取取450ml450ml水样,用水样,用1M 1M 氢氧化钠调整至氢氧化钠调整至pH 8.
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