梅毒螺旋体抗体（酶联免疫法）标准操作规程.docx

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梅毒螺旋体抗体(酶寐免疫法)标准操作规程1.操作步骤：(1)配液：浓缩洗涤液用蒸偏水或去离子水20倍稀释。(2)编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔(用双波长检测，可不设空白对照孔)(1)加样：分别在相应孔中加入待测样品，阴，阳对照100微升，轻轻振荡混匀。温育：用封版膜封版后，置37。C温育60分钟。(3)洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量拧干。(4)加酶标抗体：空白对照孔不加酶标试剂，每孔加入酶标记抗体100微升，轻轻振荡混匀。(5)温育：用封版膜封板后，置37C温育30分钟。(6)洗涤：揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量拧干(7)显色：每孔加入显色剂A,B液各1滴(50微升),轻轻振匀，37C避光显色30分钟。(8)终止：每孔加终止液1滴(50微升)，轻轻振荡混匀。(9)测定：10分钟内测定结果,设定酶标仪波长于45Onnl(建议双波长450nm/600-650nm测定)用空白孔调零点后测定各孔A值。2.结果判断(10) 临界值(CUT/OFF)计算：临界值二阴性对照孔A均值+0.18。(11) 阳性判定：样品A值三临界值(CUTOFF)者判定为TP阳性。(注意：初试阳性应重新取样双孔复试)(12) 阴性判定：样品A值临界值(CUTOFF)者判定为TP阴性。