2025《超高效液相色谱仪（UHPLC）安全操作规程》.docx

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1、超高效液相色谱仪（UHPLC）安全操作规程一、引言超高效液相色谱仪（UHPLC）作为一种高精度、高灵敏度的分析仪器，在实验室的化学、生物、医药等领域的科研与检测工作中具有重要地位。为保障操作人员的人身安全、仪器设备的正常运行以及检测数据的准确性与可靠性,特制定本安全操作规程。本规程适用于所有使用UHPLC的人员，要求操作人员必须严格遵守，确保实验过程安全、高效、有序进行。二人员要求（一）资质与培训操作人员应具备化学、分析化学、仪器分析等相关专业知识背景，经过专业培训并考核合格后，方可独立操作UHPLCo新入职或初次接触该仪器的人员，需在经验丰富的操作人员指导下进行至少X次实际样品的分析操作练习

2、，包括仪器的开关机、样品制备与进样、数据采集与处理等环节，并通过理论知识考核和实际操作考核，确保熟悉仪器的基本原理、操作流程、日常维护及安全注意事项。定期组织操作人员参加安全培训和技术更新培训，培训内容包括但不限于新的检测方法、仪器软件升级后的操作要点、安全事故案例分析及应急处理措施等，培训频率不少于每年X次，以不断提升操作人员的专业技能和安全意识。三操作前准备（一）环境检查UHPLC应放置在清洁、干燥、通风良好且温度和湿度相对稳定的环境中。实验室温度应控制在具体温度区间,相对湿度保持在具体湿度区间,避免阳光直射和强电磁场干扰，防止环境因素对仪器性能和稳定性产生不利影响。操作区域应配备有效的灭

3、火器材、急救箱、紧急洗眼器和淋浴装置，并确保其处于正常工作状态，以便在发生意外时能够及时进行应急处理。（二）仪器检查检查仪器外观是否有损坏、变形、部件松动等异常情况，各连接管路是否牢固、无泄漏，电源插头是否插好且接地良好。开启仪器电源，观察仪器自检过程，检查显示屏、指示灯、操作键盘等部件是否正常工作，仪器自检完成后，查看软件界面是否有错误提示信息，确认仪器的泵压、流速、柱温等关键性能指标是否正常，如有异常应及时通知维修人员进行检修，严禁使用故障仪器进行检测操作，以免造成数据错误或仪器进一步损坏。四操作流程（一）开机先接通UHPLC的总电源，等待片刻后，依次打开仪器的各个模块电源，包括输液泵、自

4、动进样器、柱温箱、检测器等，启动仪器控制系统。在仪器启动过程中，密切关注仪器的状态指示灯和显示屏信息，确保仪器正常启动。待仪器各模块启动完成并进入待机状态后，打开与之相连的计算机，启动操作软件，进入UHPLC的操作界面，准备进行检测工作。（二）流动相准备根据实验要求，选择合适的流动相试剂，并确保试剂的纯度和质量符合要求。使用前，对流动相进行过滤和脱气处理，以去除其中的杂质和气泡，防止堵塞管路和影响检测结果。过滤可使用具体孔径的滤膜，脱气可采用超声脱气、真空脱气或在线脱气等方法，确保流动相的稳定性和均匀性。将处理好的流动相倒入仪器的流动相瓶中，并注意标记好试剂名称和浓度，避免混淆。（三）样品制备

5、根据检测需求，准确称取适量的样品，使用合适的溶剂进行溶解和稀释，制备成均匀、澄清的样品溶液。样品溶液的浓度应在仪器的检测线性范围内，且无杂质和沉淀。在样品制备过程中，如涉及有毒、有害、易燃、易爆等危险化学品，应严格按照相关化学品的操作规程进行操作，佩戴好防护手套、护目镜、防护面具等个人防护用品，在通风橱内进行样品制备和处理，防止化学品泄漏、挥发对人体造成伤害。（四）参数设置在操作软件中，根据样品的性质和检测要求，设置合适的仪器参数，包括流动相流速、柱温、检测波长、进样体积、洗脱程序等。设置参数时，应仔细核对各项参数值，确保其准确无误，避免因参数设置不当导致分离效果不佳、峰形异常或检测结果不准确

6、。同时，应注意参数的合理性，避免设置过高或过低的参数值，以免影响仪器的使用寿命或造成数据异常，参数设置完成后，再次确认无误方可进行下一步操作。（五）平衡系统将流动相管路连接好，打开输液泵，设置合适的流速，使流动相通过色谱柱进行平衡。平衡时间应根据色谱柱的类型和规格以及实验要求确定，一般不少于具体时间。在平衡过程中，观察柱压和基线的变化情况，确保柱压稳定且基线平稳，无明显波动和噪声，达到稳定状态后方可进行样品分析。（六）进样分析将制备好的样品溶液转移至自动进样器的样品瓶中，并将样品瓶放置在进样器的样品架上，确保样品瓶放置正确且无泄漏。在软件界面中设置好样品序列和进样次数等信息，点击”开始进样”按

7、钮，启动进样程序。此时自动进样器将按照设定的顺序和体积吸取样品溶液,并注入色谱柱进行分离分析。在进样过程中，操作人员应密切关注仪器的运行状态和进样进度，避免因外界干扰（如震动、强光照射等）影响进样结果，同时不得随意触碰仪器和样品瓶，防止进样过程中断或出现异常数据。（七）数据采集与处理在样品进样分析的同时，仪器将自动采集色谱图和相关数据。操作人员应在软件界面中实时观察色谱峰的出峰情况，确保峰形正常、分离度良好。分析完成后，使用操作软件对采集到的数据进行处理和分析，包括峰面积积分、定量计算、谱图绘制等。在数据处理过程中，应严格按照操作规程进行操作，确保数据处理的准确性和可靠性，避免因操作失误导致数

8、据丢失或分析结果错误。处理完成后，将分析结果进行保存和记录，保存格式应符合实验室数据管理要求，同时记录好数据处理的过程和参数设置等信息，以便后续查询和追溯。（八）关机分析工作结束后，先关闭自动进样器、柱温箱、检测器等模块的电源，然后停止输液泵的运行，关闭流动相管路的阀门。使用适当的溶剂（如甲醇、乙月青等）冲洗色谱柱和系统管路，冲洗体积应根据色谱柱的规格和使用情况确定，一般不少于具体体积,以去除残留的样品和流动相，防止色谱柱堵塞和污染。冲洗完成后，关闭仪器主机电源开关，最后切断总电源。在关机过程中，应确保仪器和各模块已完全停止运行，避免因突然断电对仪器造成损坏。关机后，清理样品瓶和操作区域，将使

9、用过的样品、试剂、工具和耗材放回原位，保持实验室整洁有序，并填写仪器使用记录，记录本次使用的时间、样品信息、仪器状态、维护保养情况等内容，为仪器的日常维护和管理提供依据。五安全注意事项（一）化学安全在使用UHPLC过程中，会涉及到各种化学试剂，操作人员应熟悉所使用试剂的性质和潜在危险，如腐蚀性、毒性、挥发性、易燃性等。对于有毒、有害、易燃、易爆等危险化学品，应严格按照相关化学品的操作规程进行操作,佩戴好防护手套、护目镜、防护面具等个人防护用品，在通风橱内进行试剂的取用、配制和处理，防止化学品泄漏、挥发对人体造成伤害。使用后的试剂应及时密封保存，妥善存放于指定位置，避免与其他试剂发生混淆和反应。

10、废弃的化学试剂和样品应按照实验室废弃物管理规定进行分类收集、标识和处理，防止环境污染和交叉污染。（二）高压安全UHPLC的输液泵在运行过程中会产生高压，操作人员应避免直接接触高压管路和部件，防止被高压液体喷射造成伤害。在检查和维护仪器时，应先关闭输液泵电源，并确保系统压力已完全释放后，方可进行操作。如发现高压管路有泄漏或破裂等情况，应立即停止输液泵的运行,并采取相应的安全措施,如切断电源、关闭阀门等，防止高压液体泄漏引发安全事故，及时通知维修人员进行检修和更换受损部件。（三）电气安全仪器必须可靠接地，定期检查接地电阻，确保其符合电气安全标准，防止因接地不良引发触电事故。在操作过程中，严禁湿手触

11、摸仪器的电源插头、插座和开关等电气部件，避免发生触电危险。如发现仪器有漏电、冒烟、异味等异常电气现象，应立即切断电源，并通知专业维修人员进行检修，严禁自行拆卸和修理仪器的电气部分，以免造成更严重的电气事故。定期对仪器的电气系统进行检查和维护，包括电源线、电路板、继电器等部件，及时发现并排除潜在的电气安全隐患，确保仪器的电气性能稳定可靠。（四）光学安全对于配备有紫外检测器或其他光学检测器的UHPLC,操作人员应避免直视光源，防止强光对眼睛造成伤害。在仪器运行时，严禁打开检测器的光学舱门，以免强光泄漏和损坏光学系统。如需要对光学部件进行清洁和维护，应先关闭仪器电源，并在专业技术人员的指导下，使用专

12、用的光学清洁工具和试剂进行操作，避免刮伤或污染光学镜片和光栅等部件，确保光学系统的性能和精度不受影响。六维护与保养（一）日常维护每日使用完毕后，用干净柔软的湿布擦拭仪器外壳，保持仪器表面清洁，防止灰尘和污垢积累影响仪器散热和外观。定期检查仪器各部件的连接是否牢固，有无松动现象，如发现松动应及时紧固；检查仪器的电源线、数据线、管路等线缆是否有破损、老化等情况，如有问题应及时更换，确保仪器的连接可靠，正常运行。定期清洗自动进样器的样品针和进样阀，防止样品残留和交叉污染，使用合适的清洗剂和清洗方法进行操作，确保清洗效果。（二）定期保养每月对UHPLC进行一次全面的性能检查和校准，包括流速准确性、柱温

13、准确性、检测波长准确性、进样体积准确性等，确保仪器的各项性能指标符合技术要求。使用标准样品和校准试剂对仪器进行校准操作，根据校准结果对仪器的参数进行调整和优化，保证检测数据的准确性和可靠性。定期更换色谱柱和流动相过滤器，根据色谱柱的使用情况和样品性质确定更换周期，一般色谱柱的使用寿命为具体时长,流动相过滤器的更换周期为具体时长L确保色谱柱的分离效果和系统的稳定性。每季度对仪器的泵头和柱塞进行清洗和润滑，使用合适的清洗液和润滑剂进行操作，防止泵头磨损和柱塞卡顿，延长仪器的使用寿命。每年邀请专业的仪器维修工程师对UHPLC进行一次全面的深度保养和维护，包括对仪器的机械系统、电子系统、光学系统等进行

14、拆解、清洁、调试和更换易损部件等操作，确保仪器的整体性能处于最佳状态，满足长期稳定运行的要求。七应急处理措施（一）化学品泄漏如发生化学品泄漏，应立即疏散实验室人员，远离泄漏区域,避免人员接触泄漏的化学品。根据泄漏化学品的性质和泄漏量，采取相应的应急处理措施，如对于少量泄漏的液体化学品，可使用沙子、蛭石、活性炭等吸附剂进行吸附处理，然后将吸附后的物质收集起来，按照危险废弃物处理规定进行处置；对于大量泄漏的化学品，应构筑围堤或挖坑收容，防止泄漏物扩散，并使用泡沫覆盖，降低化学品挥发产生的危害，同时通知专业的危险化学品处理单位进行救援和清理工作，确保泄漏物得到妥善处理，避免对环境造成污染和人员伤害。

15、（二）触电事故如发生触电事故，应立即切断电源，可使用绝缘工具（如干燥的木棍、塑料棒等）将触电者与电源分开，避免直接接触触电者身体，防止自身触电。迅速检查触电者的呼吸和心跳情况，若呼吸、心跳停止，应立即进行心肺复苏术，并呼叫急救人员，在等待急救人员到来的过程中，持续进行心肺复苏操作，不得随意中断，直到专业急救人员接手进行救援。（三）火灾事故若实验室发生火灾，应立即停止UHPLC的运行，切断电源，并迅速使用附近的灭火器材进行灭火。灭火过程中应根据火灾的类型选择合适的灭火器，如干粉灭火器、二氧化碳灭火器等，针对火源根部进行喷射灭火，同时呼喊周围人员协助灭火，并拨打火警电话“119”报警。在火灾扑灭后，保护好现场，配合消防部门进行火灾事故调查，分析火灾原因，总结经验教训，采取相应的预防措施，防止类似火灾事故再次发生。