抗菌药物最小抑菌浓度的测定[1].docx

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1、抗菌药物最小抑菌浓度的测定、概念：最小抑菌浓度（minimuminhibitoryConCentratiOn,MIC）：在特定环境下孵育24小时，可抑制某种微生物出现明髭增长的最低药物浓度即最小抑菌浓度，用于定址测定体外抗菌活性。二、试验目的：通过采纳常量稀释法，检测几种抗菌药物对一一菌株的最小抑菌浓度（MIC）,对临床诊断用药有指导作用。三、仪器和试剂:MH液体培育基无菌试管分光光度计0.5麦氏标准比浊管MH琼脂微量加样器蒸储水吸头0.1mo1.磷酸缓冲液(PH6.0)接种环无菌生理盐水无菌平板无菌滤膜022无菌针筒金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌抗菌药物四、检验方法：液体稀释法、琼

2、脂稀释法、E试验（EteSt）液体稀释法操作步骤：抗菌药物原液配置OOOOOOOOOOOOOMH液体试管中抗荫药物树咬稀择】抗菌药物原液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于100O%m1.(如1280gm1.)i10倍干最高测定浓度。溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。所需抗曲药物溶液量或粉剂量可公式进行计算。例如：需配制100mI浓度为1280gm1.的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750gmg用分析天平精确称取抗生素粉剂的量为182.6mg0依据公式计算所需稀释剂用量为：(182.6mg750gm1.)1280gm1.=107.0m1.,然后将182.6mg抗生素粉剂溶解于10

3、7.0m1.稀稀剂中。制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表Io配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-20C环境，井留意抗甫药物的保存期限。表1稀释法中常用的抗菌药物容积稀释法药物浓度取药液砧加稀释剂药物稀释浓琼脂或肉汤中最终含药浓度(ugm1.)(m1.)量度(ugm1.)(m1.)(ugm1.)药物：琼脂（或肉汤）=1：95120105120512512011256025651201312801281280116406412801332032128017160161601180816013404160172022011101201350.520172.50.252.5111.250.1252.

4、5130.60.062.5170.30.032.药敏试验用抗菌药物浓度范围依据NCC1.S抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特别状况例外。3培育基NCC1.S举荐运用MUeIIer-Hinton(MH)肉汤，pH7.27.4o需依菌与兼性厌辄商在此培育基中生长良好C在测试葡葡球菌对笨嚏西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%(WV)M化钠，按制造厂家的要求配制须要盘的MH肉汤。嗜血杆菌属菌运用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌运用含2%5%溶解马血的MH肉汤。4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相像待检菌落3-5个，接种于4-

5、5m1.的水解酪素白(MH)肉汤中，35C孵育2-6h0增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1.2x1.O8CFUm1.二是干脆菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌与甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，举荐干脆取培育1824h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的曲悬液。用MH肉汤将上述曲悬液进行1:】OO稀稀后备用。留意应在15分钟内接种完配制好的接种物，并取一份接种物在非选择性琼腑平板上传代培育，以检查接种物纯度。5.稀稀抗菌药物的制备与菌液接种取无菌试管(13X10Omm)13支，排成一排,除第1管加入1.6m1.MH肉汤外,其余每

6、管加入MH肉汤1m1.,在第1管加入抗菌药物原液(如1280gm1.)0.4m1.混匀，然后吸取Im1.至第2管，混匀后再吸取Im1.至第3管，如此连续倍比稀释至第11管，并从第11管中吸取Im1.弃去，第12管为不含药物的生长比照。此时各管药物浓度依次为256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5O.25gm1.o然后在每管内加入匕述制备好的接种物各1m1.,使每管最终菌液浓度约为5105CFUm1.o第1管至第11管药物浓度分别为128、6432、16、8、4、2、1、05、0.25、0.125gm1.另外设比照3支，别为肉汤比照、质控曲比照和待测前生长比照。6 .孵育将接种好

7、的稀馨管塞好塞子，置35匕一般空气孵箱中孵育1620h;嗜血杆菌和链球菌在一般空气孵箱中孵育2024h;对可能的耐甲氧西林前萄球菌和耐万占霉素肠球菌应持续孵育满24h7 .结果推断与说明在读取和报告所测试菌株的MIC前，应检查生长比照管的细菌生长状况是否良好，同时还应检杳接种物的传代培育状况以确定其是否污染，质控菌株的MIC值是否处于质控范围。以肉眼视察，药物最低浓度管无细菌生长者，即为受试菌的MIC。甲氧苦胺喙或磺胺药物的肉汤稀释法终点推断，与阳性生长比照管比较抑制80%细菌生长管药物浓度为受试菌MIC。【MIC分考落国】表2稀释法质控标准菌株MIC预期值范围(ugm1.)抗金黄色葡简球曲W

8、(ATCC29213)药物粪肠球前(ATCC29212)大肠埃希茵(ATCC25922)铜绿假单胞曲(ATCC27853)青0.251.O霉0.120.5素0.52.01.04.0-G-苯-0.52.02.08.01.04.01.04.0哩0.120.5-4.0-16-西0.251.0-1.04.0-林-2.08.0-0.060.51.04.0甲卜-0.03-0.121664氧-0.06-0.252.08.0西0.121.0-0.251.01.0-4.0林-0.54.02.08.00.06-0.25-氨0.120.51.04.0-茉0.52.01.04.0-西0.120.50.252.00.0

9、04-0.0150.251.0林哌拉西林头胎痣曲南庆大霉素阿米卡星克林霉素红霉素万古徭索环丙沙星常用抗Ira物稀拜和配制方法前修NS一次应士西林NS一*钳把i林期总阿琪西林箴Gt阿葭加秋都丹阿班用林克拈泰古西林_NS一冰NS一次N.S一出NS_-JVNs一次N.S一次阿反加秣I羊洛西林K%CNJH-IC%C6一出一州P牛田ICm1.注自HHkT5%GNS.5-10%Gf一次重落西林舒巴的梨加林N.S.5%GNS.51.0%G.S.S%GS二次.佐田话金注射田友或牛理外水溶解一出裨士曲林甫珀5%GS一出一j田Iom1.注的田永波告？眼恭而林h-一出跟其血赫他咄mi及峰西林S%GS.NS一波E%G

10、S.NS一次N.S.G.S一比止的感曲NeGS一比一牛田四的用代法他玉k4fft:1.他fitJ决NS.5%GS1次.人图注时用永溶翻NS一*4剂咏聆Ns5%C6一&4田9Cn1.注时田永法解4-Ajut彳一次4他羊阵NS.G.S一出中狗榜由NS.CS一M小泡棒映NS.GS一出也闹以西NS.5-10%G.S一r4-1.HfN6S-1%GS一*冰痢壬名NSS%CS一派S1.rt1.仙东NS.5%GS一r1.1.1.1.1.fcNS.5%CS一出F11QHIk.NS、JGS&Ihfc01.pm1.S1.ft1.哌曲！GNS一次波临k5-2Sma/m1.M1.根麻附舒内圣狗J丘酿他0业N.S.S%G

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12、出攵丽11:左J1.株型:素Na一m王一次小耳拄Fm心比岫及油好Rfr一次B土eNSS%CS一I匕乐用ICrn1.注QHHzk法翩.Btf1.II入空心去甲万古徭素N.S,5%G.S二次.先用注射用水溶解，再用至少20Om1.液替考拉宇N.S,5%G.S二次.先用注射用水溶解，双手滚动小瓶至药感知浊星5%GS一Mr迪沙星R%CS一M*洛羊川星NS.R%CS13E*-”1Sm1让aFHIk涂ft,左氮氢i星NSGS一次加棱M?星NS.5%GS-*Iftr2mpm1.能法川星S%GS一次IMEt油星NS一)利猛霖去5%G.S一*州底盹彳一出两性霉素B5%G.S（用NS有沉淀）二次.5m1.注射用水溶解25mg药物，终浓度阿普洛韦N.S,5%G.S二次.每0.1g用IOm1.注射用水溶解成50g1.史普洛韦N.S,5%G.S先用N.S或注射用水溶解，再用大瓶稀稀成务由次丰NS.5%GS一件滕甲的铀诟一次.阳差Tk住(051.d1.BUS11.阿炖脱汴h-t.HIM10mekc点击眦NSS%GSM*Imp/m1.福油磁发素NSk5%CS力用注时用ki.弱涪1-2小时.总结：1.MS溶解：育然气茗西林类、阿莫西林类、奈夫西林、头布匐MU帕珠沙星（阿育安怕牛来）