YY_T 1939-2024 医疗器械细菌内毒素试验方法 重组C因子法.docx

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1、ICS11.040.01CCSC30YY中华人民共和国医药行业标准YYTT19392024医疗器械细菌内毒素试验方法重组C因子法Testforbacteria1.endotoxinsofmedica1.devicesRecoinbinantfactorCmethod20254)7-20实施2024-07f8发布国家药品监督管理局发布本文件按照GB,T1.1-20204标准化工作3则第1部分：标i化文件的结构和起草规则8的规定起草.请注您本文件的某些内容可能涉及专利。木文件的发布机构不承担识别专利的行任.本文件由国家药品需将管理局提出.本文件由全国医疗器械生物学评价标准化技术委员会(SAC/TC

2、248)归口。木文件起草单位；山东省医疗器械和药品包装检验研究院、中国食品药品检定研究院、辽宁各医疗器械检脸检测院。本文件主要起草人：孙令骁、邵安良、余洋、徐越,王小柒、王诗琪,细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁的重要成分,通常由多优O型抗原、核心低聚犍和类脂A组成，其中类脂A是内有淞的生物活性中心。从临床角度看，内华索引起的脓母症、脓毒性休克和多器官袁湘是死亡率较高的全身性疾病.在自然界中，革竺氏阴性曲广泛分布于水（江河和海洋）、空气、土填和人体中，医疗器械制造过程中的高压蒸汽火菌、辎照和气体灭曲能绯杀火细菌，但不能灭活内毒素.由于细曲内毒素广泛存在于自然界中,性质稳定并且可以穿透常规的除落港股

3、,因此很难预防细菌内毒素污染.目前凝胶法和光度测定法是医疗器械细菌内毒素试验故主要的试蕤方法之、该方法具有较高的灵敏性、特异性、准确性和经济性，但该方法需要使用大麻的农血来生产微试剂,而东方欲已成为我国的二级保护动物.因此维续推广使用凝胶法和光度泅定法不利干赏资源的保护和发展.理组C因子法是细菌内毒素检变法的一种补充方法,该方法的推广使用,可保护生态环境、减暖做资源枯竭速度,且本法不存在G因子旁路干扰，具有较高的专属性。医疗器械细菌内毒素试验方法:组C因子法1CT本文件描述了利用重组C因子法检测医疗器械中细菌内毒素含Ift的试验方法.本文件适用于对医疗器械进行细衡内揖素的检测.2捉范性引用文件

4、本文件没有规范性引用文件。3轨下列术语和定义适用于本文件.3.1C因子factorC赏试剂中一种对细菌内毋素极感.且能选择性识别内揖泰的蛋白,3.2BfiC因子FecoabinantfacUaC俄试剂中的C因子（3.D通过柒因的祖技术在此核细咆中表达的曲组蛋白。4试”理重组C因干法是利用重组C因f试剂与内毒素反应过程中的荧光信号变化而测定内毒索含量的方法，重俎C因子与细菌内毒素结合后被激活，由无活性的蛋白IW原转变成具有生物活性的蛋白薜，识别并催化下游黄光底物产生荧光信号，荧光信号的强度和内毒索浓度成比例，分别测收王组C因子试剂和供试M溶液孵育前后的荧光值并校正，通过标准曲税计算出供试品中细菌

5、内毒素的含1.5主要设备灵光而标仪或多功能陆标仪、电热干燥箱、旋涡混合零等.6试剂和材料细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品（以下简称“内毒素标准品”八重组C因子试剂食、细菌内毒索检查用水、移液器喷头、微孔板.注I：物Ie因干试剂盒中一般包括3ncwr和溶液、荧光联物、独怖等试机注2:试皱所用耐热耨具常用灭曲法，用电热丁傀箱CSOC、至少3011）去除UJ能存在的外源性塑料器具如微孔板、与移液器配套的吸头等.选用标明无热原或内毒素含JM1.（W5E1.11.的涔儿15min或参照标准品说明书中要求的混匀时间进行操作,制成至少3个浓度的稀程液（相邻浓度间稀择倍数不应大于1（,最低浓度不应低

6、于所用笊组C因子试剂的标示检测限.每桶糅一步均应在旋涡混合器上混匀30S或参照标准品说明书中要求的混匀时间进行操作，祗一浓度至少整3个平行孔。使用内毒素检查用水作为阴性对照（细菌内毒素含量小于0005EU/m1.的灭菌注射用水），阴性对照应设置不少于2个平行孔。8.2.2按照由祖C因子试剂说明拈的要求向跟孔板中相应的孔内加入一定体枳的阴性对照和内毒素标准品.于（371）D的温度下预转育至少5min.取舟微孔板.按说明书要求将试剂众中各试剂按比例混合，每个孔加入一定体枳的!Hfi1.C因子试剂，设置好激发/发射波长，读取时间零点的荧光值后进行螂育,孵育完成后再次读数.当阴性对照的RF1.小于标准

7、曲规的最低点时，可将数据进行线性ISI归分析。如选择找性回归分析结果，标准曲城的相关系数的绝时值应大于或等于0980,试验方为有效，否则Hi新试骁。&3ftit为了确定供试品溶液是否会干扰内毒索和H1.祖C因子的反应，进行新产品的内毒素检食试验前应进行干扰试蕤，选择标准由戏中点或一个旅近中点的内毒素浓度（设为m）,作为供试品干扰试验中添加的内毒素浓度,按我I制备溶液A、溶液B、溶液C和溶液D.1干扰试!蝴*E6号内柝索浓度被加入内t索的溶液平行孔t沼液A无供试品沼液至少2沼液Bb标准曲战的中点（或附近点）的浓度（设为n）供试品溶液至少2沼液CC更少3个浓改（1低一点设定）IB菌内毒素检仅用水每

8、浓度至少2溶液D无维茵内海卷检衣用水至少2浸地介册休税不超过公式中浸根介做取大体枳的供i品溶液，加入/标准由线中点或存近中点的一个已知内毒素浓度的.且与溶液Xj相同稀株倍数的供试M溶液.用了喇备标准曲线的内馋米标准晶溶液（相郃浓度间稀铎倍数不应大门（0,最鸟浓度和最侬浓度用在叱阻C因了试剂的校泗队内.d阴性对照.将试验溶液和入澈孔板内，按照8.2.2的操作步骤进行试蛤，按所得税性回归方程分别计算出溶液A和溶液B的内毒素含吊C和C,.再按公式（2）计算该试骁条件下的回收率（R）R=（CC,WJnXIO0%（2）式中：R亚I收率：C1溶液B的内毒素含fitEU/m1.;C.一溶液A的内毒素含fit

9、.E1.Vm1.;m溶液B中加入的标准曲线的中点（或附近点）的内毒素浓度.E1.Vm1.当内毒索的I可收率在50%-200%之间，则认为在此试验条件下供试品溶液不存在干扰作用.当内毒素的网收率不在上述指定的范阳内,若供试品溶液在小于最大浸提体枳的情况下对试验有干扰，应对供试品进行不超过最大浸提体积的进步稀称，除此之外还可通过其他适宜的方法（如过迩、中和、透析或加热处理等）排除干扰后再曳亚干扰试验应确保所选择的处理方法能有效地排除干扰且不会使内毒案失去活性.当重组C因子试剂、产品的配方、结构组成、生产工艺改变或试脸环境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时，业新进行干扰试验，&4按照8.3的操作

10、步骤进行试验，获得供试品溶液反应终点和时间零点的RFU值.9靖果计算和评价9.1 结果反应终点和时间零点的RRJ的差值为昨U计算平行孔的平均AR卜U并用阴性对照进行校正，按照公式计算细菌内棒素浓IW（Y）=Ax1.gfXHB（3）式中：YRFU;A直线斜率：X一细曲内毒素浓段.EUn1.B直践截距。法公拟腕M部噬嗾俎9.2 结果评价与M9.2.1 试验应符合以下三个条件方为有效：力系列溶液C的结果应符合标准曲线的相关系数（r）的绝时值大于或等于0.980的要求：b）用溶液B中的内毒素浓度减去溶液A中的内毒素浓度后，计算出的内毒素的回收率在50%200的范用内：c）阴性对照溶液D的RFU小于标准曲线公低点的RFU9.2.2 若供试品溶液所有平行孔的平均内揖素浓度乘以稀择倍数后,小于规定的内存素限值.判定供试品符合规定.若大于或等于规定的内毒素限值，判定供试品不符合规定.10试报告试验报告中应包含下列信息：-T共试品名称、爆格型那眦号；一供试品溶液制备方法：-一试脸条件和试脸步骤：一试验结果：结果评价：结论.考文献1GB2YY3YY18671一次性使用卷必输液针0618医疗器械细像内庭素试验方法常说监控与跳批检验1282次性使用静脉留置针4中华人民共和国药典