乙肝为何测e抗原和s抗原[1].docx

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1、乙肝为何测e抗原和s抗原乙型肝炎病毒(HBV)外膜蛋白包括S、前S2和前S1.三种成分.前S1.蛋白在病毒侵入肝细胞过程中起重要作用.含有前S1.的蛋白主要存在于Dane颗粒和管型颗料上.前S1.蛋白在病毒感染、装配、复制和刺激机体产生免疫反应等方面起有特别重要作用.乙肝病毒前S1.抗原酶免测定试剂盒的正式推向临床以及近两年在北京、四川、浙江、河南、深圳、海南等近百家医院与乙肝“两对半”检测的联合应用,充分显示了该试剂在病毒性乙型肝炎的临床诊断,指导治疗等方面的重要价值.前S1.抗原(Pre-S1.Ag)检测是对乙肝“两对半”尤其是e抗原和HBV-DNA测定的重要补充和加强.前S1.抗原与HB

2、V-DNA检出率两者符合,前SI抗原仅在HBV-DNA阳性血清中检出.前S1.蛋白随HBeAg消逝而消逝,且与阴转时间呈正相关,这样,前SI抗原可作为病毒清除与病毒转阴的指标.前S1.抗原阳性的乙型肝炎患者传播乙型肝炎病毒比前S1.抗原阴性和无症状HbsAg携带者的危急性更大,因而说明前S1.抗原可反映乙型肝炎病毒复制和传染性的指标.假如前S1.抗原持续阳性,指示AHB向慢性转变.比较急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、和HBSAg阳性的患者血清中前S1.蛋白,前S1.抗原阴转愈早,AHB患者的疗程愈短,预后也愈好.说明前S1.抗原及其抗体的检测是急性乙型肝炎的临床诊断,疗效视察和判数据预后的良好指标

3、.前S1.蛋白的分子生物学特性1 .乙肝病毒（HBV）的基因结构HBV为嗜肝DNA病毒,由一个不完全双链DNA组成，约3200个氨基酸.长链1.含4个开放读码框架,为病毒蛋白的编码区:S区、C区、P区、X区.短链S相当于长链的50%-100%,其不固定端可被内原性DNA多聚酶延长,使病毒成为完整的双链.2 .HBV基因组编码HBV抗原,全部四个功能性读码框架位于DNA负链,P基因编码DNA聚合酶.C基因编码HbcAg.S基因编码S抗原,前S1.抗原和前S2抗原.X基因编码X产物.3 .编码不同形式的表面抗原（HBSAg）的HBV基因区域由大蛋白（1.HBS）,中蛋白（MHBS）和小蛋白（SHB

4、S）组成,其氨基酸组成的肽段长短不同.在第和其次个起始密码子之间的序列称为PreSI,在其次和第三个之间为Pres2,从第三个密码子到终点密码子的序列为S.前S1.抗原（Pre-S1.Ag）的临床意义和用途:1 .反映HBV的感染与复制状况的指标前S1抗原主要存在于血清中HBV表面.提示机体内含有HBV就有前S1.抗原.前S1.抗原与HBV-DNA,HBeAg检测率高度符合是一项特别重要的病毒复制指标.提示前S1.抗原可作为HbcAg和HBV-DNA检测的补充和比照.抗HBeAb(+)慢性乙型肝炎(约占患者的30%左右)和HBV慢性无症状携带者中,前S1.抗原(+)可表示病毒的复制,提示临床上

5、只检测“乙肝五项”是不够的,补充前S1.抗原的测定是特别重要的,可弥补因病毒变异和其它缘由造成的HBeAg(一)的“误寻”.病毒附着于肝细胞上,最重要的介导部位是前S1.蛋白的氨基酸(AA)21-47片段,变异的病毒只要这一区段完好就有传染性.2 .预后及药物疗效的推断急性乙型肝炎患者前S1.抗原阴转越早,预后越好,是病毒清除的最早迹象,反之,前S1.抗原持续阳性,将发展至慢性肝炎.因病毒基因变异的HBeAb(+)慢性乙型肝炎病人,较易进展为肝硬化,甚至肝癌.加强检测前S1.抗原,是一种检测疾病预后的良好手段.前S1.抗原可作为药物抗病毒疗效的指标,是对HBV-DNA和HBeAg指标的补充和加

6、强.3 .早期诊断乙型肝炎病毒的感染前S1.抗原出现在急性乙型肝炎感染的最早期,在转氨酶上升前即可杳出,提示可作为早期诊断乙肝病毒感染.在体检和献血员中加查前SI抗原,可起来疾病的早期诊断和尽早切断传染原的重要作用.问题一、检验两对半为何还要杳Pre-SI,重复检杳是奢侈吗答：目前,乙型肝炎病毒血清学检测项目主要是HBV-M（即乙肝五项,包括HBSAg、HBSAb、HBeAg、HBeAb和HBCAb）.目的是诊断患者的感染状况,病毒复制状况,病程预后和药物疗效的视察等.前S1.抗原的检测能够从以下几个方面弥补和加强乙肝五项检测的不足.1 .前S1.抗原出现在急性乙型肝炎感染的早期,在转氨酶上升

7、前即可查出,提示可作为早期诊断乙肝病毒感染的指标.2 .急性乙型肝炎患者前S1.抗原阴转越早,预后越好,是病毒清除的最早迹象.反之,前S1.抗原持续阳性,将发展至慢性肝炎.（此指标比HBeAg阴转、HBSAb阳转指标提示要早）.3 .HBeAb（+）慢性乙型肝炎约占慢性乙肝的30%-50%,检测前S1.抗原,提示病毒在机体内接着复制.此类患者更简单演化为肝硬化或肝癌.加查前S1.抗原,弥补了因HBeAg缺失造成的诊断和治疗困难.4 .在HBV无症状携带者中,有肯定比例的HBeAb（+）者,加杳前S1.抗原（+）提示病毒在体内还较活跃.病毒并没有清除,肝脏还有潜在的病理损伤的可能.5 .抗病毒治

8、疗乙型肝炎,加杳前S1.抗原可作为治疗前的患者筛查和治疗后的疗效推断,尤其对HBCAb(+)的慢性肝炎患者抗病毒治疗的排查也起到重要作用.所以检验两对半,加查前S1.抗原可在急性肝炎,慢性肝炎,HBV无症状携带者和抗病毒治疗乙型肝炎诊疗过程中起到特别重要的作用.这样的加查,不能说是奢侈.二、HbeAb(+)的HBV感染者中,为何要检杳前S1.抗原在我国近3千万人的慢性乙型肝炎患者中,其中约有30%左右的患者,抗HBe阳转后,病毒在体内接着复制,病情较重,其中部分可以演化为肝硬化或肝癌,自然好转率特别低.同样,HBeAb(+)的HBV无症状携带者也占有肯定的比例.这一部分HBeAb(+)的慢性肝

9、炎和HBV无症状携带者,往往是因为病毒基因变异所致,其所携带的HBV变异毒株大多数表现为在病毒基因组前C区末端1896位发生G-A点突变，产生一个新的终止密码子(TAG),阻断了HBeAg的形成,导致在临床上出现HBeAg缺陷和HBV血清型.因HBeAg的缺失,造成诊断和治疗的困难.此时,检测前S1.抗原既能较为精确的检测病毒在机体内复制状况,又能诊断疾病的转归和了解是否携带HBV变异毒株.充分显示了前SI抗原的临床价值.所以抗HBeAb(+)的HBV感染者中,加查前S1.抗原是特别必要的.三、为什么检测HBV-DNA还要检测前S1.抗原1 .前S1.蛋白是乙型肝炎病毒（HBV）外膜蛋白的主要

10、专长部分,它含有肝细胞受体,在HBV感染细胞和机体免疫应答方面起重要作用.在病毒感染机体的整个周期中,前SI蛋白的独特功能,使其能够较充分的反应机体的体液免疫状况,直至病程的转归过程（如早期诊断,急性肝炎前SI抗原阴转是病毒清除的最早迹象,反之疾病将发展至慢性肝炎等临床诊断以及前S1.抗原阴转,前SI抗体出现等免疫学反应）这是单一测定HBV-DNA所不能做到的.2 .免疫测定技术因其有效、干脆、简便的特点,已经在临床诊断应用上占主导地位.前S1.抗原的检测与基因测定HBV-DNA在治疗方面能够相互补充和加强,就像HBV-DNA不能替代乙肝五项的检测一样,同样HBV-DNA也不能替代前S1.抗原

11、的检测.3 .HBVDNA-PCR技术要求精密、所须要的条件高,易发生污染和假阳性,不适于做常规检测,前S1.抗原测定与之相互补充和加强,使结果特异,精确无误,进而提高临床大夫的诊断和治疗水平.IiOS1.抗原的检测由上海阿尔法生物技术生产的乙型肝炎病毒前S1.抗原酶免诊断试剂盒采纳E1.ISA双抗体夹心法,测定前SI抗原肽,最低检测浓度为O1.ug1.检测原理采纳双抗体夹心E1.1.SA法,用抗-PreSI和抗HBs作为固相化抗体和酶标抗体,假如标本中存在乙肝病毒PreSI抗原，则形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,加入TMB底物产生显色反应,反之则无显色反应.适用于血浆和血清类标本.试剂盒组成

12、微孔板、阴性比照、阳性比照、酶结合物、显色液A、显色液B、终止液、洗涤液.操作步骤1 .反应孔内加入待测标本50u1.,设阴、阳性比照各2孔,每孔加入阴、阳性比照各50u1.,并设空白比照1孔,置37孵育30min.2 .洗板3 .每孔加入酣结合物1滴或50u1.（空白比照孔除外），置37孵育30min.4 .洗板5 .加入显色液A、B各一滴,充分混匀后,置37C孵育I5min.6 .加入终止液、混匀.7 .酶标仪读数.结果推断1 .全部阴性比照、阳性比照和标本的读数值减去空白比照读数即为计算值2 .阳性比照读数必需比阴性比照读数大0.300.试验结果成立.3 .结果推断：临界值（CUTOFF）=2.1*阴性比照平均OD值.测试标本的计算值大于或等于临界值为阳性.测试标本的计算值小于临界值为阴性.留意事项1 .运用前试剂盒应预先在室温下平衡30min.2 .试剂盒启用后应尽快用完.3 .不同批次的试剂组份不能混用.4 .运用本试剂盒应视为有传染性物质.5 .温行反应板温度和时间必需严格限制.6 .阳性比照仅用于判读试剂盒内的包被微孔板和酶是否有效,不是临界值的标记.7 .反应终止后,请在IOmin内判读结果.8 .封片纸不能重复运用.