中药天年饮对脾衰老延缓作用探究.docx

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1、中药天年饮对脾苍老延缓作用探究1中药天年饮对脾苍老延缓作用探究作者：陈志宏程丽梅张宏凯谢利谯高福禄【摘要】目的视察脾的苍老变更及中药天年饮延缓免疫器官苍老的作用。方法DD半乳糖连续腹腔注射建立亚急性苍老的大鼠模型；待模型胜利建立后，用药组大鼠赐予天年饮港胃。分别检测各组大鼠血脂和脾脏指数的变更，视察脾增殖细胞核抗原(PCNA)、P53和p1.6表达的变更。结果与正常组大鼠比较，模型组大鼠的血脂和脾P53、p1.6的表达明显上升，模型组的脾脏指数和脾PCNA的表达明显卜.降(PV0.05,P0.01)o中药天年饮11r明显改善模型大鼠脾的各种变更：与模型组大鼠比较，天年饮用药组大鼠血脂和脾p53

2、,P16的表达明显下降，而脾脏指数和脾PCNA的表达明显上升(PV0.05,P0.01)结论天年饮可通过阻挡脾脏的萎缩、促进淋巴细胞的增殖实力，提高苍老机体的免疫功能，可能具有延缓苍老的作用。【关键词】苍老：脾；天年饮；PCNA；p53：p1.6AbstractObjectiveToobservethesenescentchancesocspceenanctheantiDacinceccectsoctracitionacChinesecrucTiannianyinonimmuneorcans.Methocs30SDratswererancomcycivicecinto23croupsancea

3、chcrouphac10rats:normac,acincmocecancTiannianyincroups.TheSubDacutecyacincmocecratsweremacebyinjectincDDcacintoabcominaccavitycontinuaccy.Actertheacincmocecwassuccesscuccyestabcishec,theratsinTiannianyincroupwereacministratecTiannianyinbyintracastricacministration.Thebcooccipicancthespceenincexocrat

4、sineachcroupweremeasurec,anctheexpressionsocPCN,p53ancpi6ocspceenwereobservecrespectivecy.ResuctsComparecwithnormacrats,thespceenincexanctheexpressionocPCNAinspceenocacincmocecratscecreasecobviouscy;whicethebcooccipic,theexpressionsocp53ancp!6inspceenocacincmocecratsincreasecobviouscy(P0.05,P0.01).T

5、iannianyincouccimprovethesenescentchancesinspceenocacincratssicnicicantcy:comparecWithacincmocecrats,thespceenincexanctheexpressionocPCNinspceenincreasecremarkabcyancthebcooccipic,theexpressionsocp53ancp1.6inspceencecreasecinTiannianyincroupremarkabcy(P0.05,P0.01).ConccusionsTiannianyincanimprovethe

6、immunecunctionocacecbypreventincatropyocspceenanc3cacicitatincthereprocuctiveactivityoccymphocytes,thushasbetterantiDacinceccects.Keyworcscinc;Spceen;Tiannianyin;PCNA：p53;p161988年Meites(1)提出，在苍老的过程中，免疫D神经D内分泌网络起着重要作用。淋巴器官功能降低是免疫功能紊乱的主要缘由，也与免疫功能的衰退亲密相关(2)：因此，探讨免疫系统的苍老变更具有重要的理论和实际意义(3)o脾是机体重要的免疫器官，脾的功

7、能在整个机体的免疫功能中占有重要地位(4)；补肾、健脾是延缓苍老的重要方法。天年饮由刘河间宣明论方何首乌丸加味而成，能填精补髓、乌发延年。本探讨采纳DD半乳糖致亚急性苍老的大鼠模型，视察脾的苍老变更并探讨天年饮延缓机体免疫器官苍老的作用。1材料与方法1.1试验动物与分组雄性SD大鼠30只,体重180250co将大鼠随机分为3组：正常组、模型组和用药组，每组10只。其中模型组和用药组大鼠均采纳DD半乳糖连续腹腔注射(按200mc/kc给药，每天1次，连续40C)制作亚急性苍老的动物模型；模型组大鼠造模胜利后不再做任何处理，用药组大鼠造模胜利后每天用天年饮灌胃，共30C1.2 药品与试剂天年饮由灸

8、何首乌、怀牛膝、肉从蓉、4淫羊蕾、丹参、茯苓六味中药组成，煎制后每me含生药1.5c,按16.2c/kc灌胃给药。检测血清中总胆固醉(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白(D(DC)含量的试剂盒购臼北京中法生物公司；增殖细胞核抗原（prociceratincceccneuccearanticon,PCNA）P53、p16免疫组化试剂盒购H武汉博士德生物工程公司。1.3 血脂大鼠经内眦取血，离心后取上清，应用日本日立公司BoehrincerMannhein/（itachi717全自动生化分析仪分别采纳酶法和干脆法检测TCsTG和（Da）Co1.4 脾脏指数大鼠称重，断头处死，快速取出脾脏后去除

9、脂肪、筋膜后称重，计算脾脏指数，脾脏指数=脾脏重量/体重。1.5 （E及免疫组化染色称重后的脾脏入Bouin液固定，常规石蜡包埋，连续切片（片厚6m）,贴于涂有APES的载玻片上。1.5.1 （E染色苏木精D伊红染色视察牌的组织结构。1.5.2 免疫组化染色及定量分析采纳SABC免疫组化染色视察大鼠脾PCNA、P53、p1.6的表达状况（PCN一抗为小鼠抗体,p53、P16一抗均为兔抗体，一抗稀释比例均为1:100）,以细胞核出现棕黄色为阳性反应，以PBS代替一抗作为阴性比照。每只大鼠子显微镜下（1020）任选5张切片，每张切片选取3个阳性细胞分布匀称的视野，采纳MiVnt图像分析5系统，计算

10、阳性细胞面积占视野面积的比值，取平均值作为这只大鼠的阳性率。1.6 统计学处理采纳SPSS11.0统计软件，以方差分析进行统计处理，组间比较采纳q检验。2结果2.1大鼠血脂的变更与正常组大鼠比较，模型组大鼠血清TC、TG含量明显上升，（D（DC含量明显下降（P0.05,P0.01）：中药天年饮可明显降低苍老大鼠血清TC和TG含量，提高（DC含量，用药组与模型组比较差异显著（PVO05,P0.01）（见表Do表1大鼠血脂及脾脏指数与正常组比较：1）PO.O1,2）P0.05：与模型组比较：3）P0.01,4）P0.052.2大鼠脾脏指数的变更与正常组比较,模型组大鼠脾脏指数显著下降（PV005：

11、中药天年饮可明显提高苍老大鼠的脾脏指数，用药组与模型组比较差异显著（P0.05）O2.3脾组织结构的变更光镜下视察可见，正常组大鼠脾白筒、红髓清楚，脾小体内含大量B淋巴细胞，动脉四周淋巴鞘含大量T淋巴细胞，红髓内脾血窦清楚可辨（图1.）o模型组大鼠牌臼髓体积缩小，脾小体少见，脾小梁内结缔组织增生,脾血窦明显淤血（图2）o用药组大鼠脾臼髓体积与正常组大鼠相比无明显变更，脾小体可见，脾小梁内结缔组织无明显增生，脾血窦淤血明显减轻（图3）o62.4大鼠脾PCNA表达的变更PCNA阳性产物为棕黄色，位于细胞核。正常组大鼠脾小体生发中心可见大量PCNA阳性的B淋巴细胞，但阳性程度较弱；动脉四周淋巴鞘可见

12、PCNA阳性的T淋巴细胞；脾索可见PCNA阳性的浆细胞和网状细胞，阳性程度较强：脾血窦壁内皮细胞和平滑肌细胞未见阳性产物（图4）模型组大鼠脾小体、动脉四周淋巴鞘中PCNA阳性淋巴细胞均明显削减；脾索中可见PCNA阳性的浆细胞和网状细胞（图5）o用药组大鼠脾PCNA的表达状况与模型组比较明显改善（图6）。模型组大鼠脾PCNA的阳性表达率明显低于正常组大鼠（PV0.01）；中药天年饮可明显改善模型大鼠脾PCNA的表达状况，与模型组比较，用药组大鼠牌PCYA的阳性表达率明显上升（PV0.01）（表2）O2.5 大鼠脾p53表达的变更p53蛋白阳性产物为棕黄色，位于细胞核。正常组大鼠脾动脉四周淋巴鞘及

13、红髓中均可见P53阳性的网状细胞，模型大鼠脾中p53阳性细胞明显增多，用药组大鼠脾p53阳性细胞较模型组明显削减（图79）。各组大鼠脾p53蛋白的阳性率见表2,模型组大鼠牌p53的阳性表达率明显高于正常组（PVO.01）：中药天年饮可明显降低模型大鼠脾p53的表达，与模型组比较，用药组大鼠脾p53的阳性表达率明显降低（PVO.01）。2.6 大鼠脾p1.6表达的变更p1.6蛋白阳性产物为棕黄色，位于细胞核。正常组大鼠脾红髓中可见p1.6阳性的网状细胞，7模型大鼠脾中P16阳性细胞明显增多，用药组大鼠脾p1.6阳性细胞较模型组明显削减（图10-12）O各组大鼠脾P16蛋白的阳性率见表2,模型组大

14、鼠脾p1.6的阳性表达率明显高于正常组大鼠（P0.01）；中药天年饮可明显降低模型大鼠脾P16的表达，与模型组比较，用药组大鼠脾p1.6的阳性表达率明显降低(Po.o)表2各组大鼠睥PCMA、p53和P16的表达变更3讨论早在上世纪六十年头就有学者提出了苍老的免疫学说，认为免疫功能的衰退与机体的老化亲密相关，在全部器官系统的苍老过程中，以免疫系统最早出现苍老，且对机体的影响最大，探讨免疫系统的苍老变更具有重要的理论和实际意义(3)免疫系统是机体苍老过程中的主要调整系统之一，参加了苍老的全过程。苍老可使机体的免疫功能下降，免疫器官如骨髓、脾、胸腺和淋巴结等出现萎缩等不同程度的变更(5)：并有观点

15、认为，苍老与免疫功能的状况亲密相关(6)。脾是机体内重要的免疫器官，在异种抗原的刺激下脾小体分化增殖，产生B淋巴细胞及浆细胞,动脉四周淋巴鞘显著增厚，产生T淋巴细胞，这些变更均与体液免疫和细胞免疫亲密相关；另外，肿还能产生与免疫调整有关的活性物质，脾的功能在整个机体的免疫功能中占有重要地位(4)8PCNA是存在于细胞核中的酸性蛋白质，其表达的强弱可干脆反应细胞增殖/凋亡的程度和是否存在细胞的恶性累积增殖。p53和p16都是抑癌基因，p53基因可参加细胞周期的调控，具有阻滞细胞周期、促进细胞凋亡、维持基因组的稳定及抑制肿瘤血管生成等多方面的功能；p16基因编码的p1.6蛋白为细胞周期的一种负性调

16、整因子，可与细胞周期素D竞争结合细胞周期依匏性激酶（CDK4）,阻挡细胞从G1.期进入S期,从而抑制细胞增殖。本探讨发觉，模型组大鼠脾脏指数、牌PCNA的表达明显降低，脾p53和p16的表达明显上升，模型大鼠与正常大鼠比较差异显著（P0.05,P0.ODo表明模型大鼠脾萎缩，脾内淋巴细胞及浆细胞等的增殖实力下降、凋亡增多，因而合成免疫球蛋白的数量削减，对外界病原的反抗实力下降，从而导致机体其他器官、系统的一系列病理变更。传统中医学认为脾主运化是脾的主要生理功能之一，且是脂质代谢的关键（包括脂质的汲取、合成、水解、转移与排泄等）（7）o李中梓的医宗必读有记载：脾上虚弱，清者难升，浊者难降；现代探讨也表明，牌功能失调可导致脂质代谢障碍（8,