酶联免疫法检测登革病毒 IgG 抗体标准操作程序.docx

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1、募联免疫法检测登革病毒IgG抗体标幽*作程序1目的检测出登革病毒特异性IgG抗体.2适用范围适用于人血清或血浆中登革病毒特异性IgG抗体的快速检测。3实验前准备（1）核对被检样品（血清或血浆）患者的姓名、编号及检测项目等。（2）待测样品在检测前应放置于2-8C冰箱或置F冰上.4检测项目及参数本方法检测项目为检测血清或血浆中病毒特异性IgG抗体5检测仪器设备和材料加样潺、温箱、洗板机、含波长45Onm的酸标仪、登革病毒IgG抗体检测试剂盒，或实脸室自省材料：5.1 揄京：阳性抗原：采用C6/36细胞感染登革病毒培养物为阳性抗原。阳性抗原：未接种病毒的正常C6/36细胞为阴性抗原对照。5.2 辣根

2、过氧化物的标记的抗人IgG抗体：5.3 缓冲击包被液：pH9.6碳酸缓冲液：稀择液：pH7.4PBS（含5%脱脂奶）洗涤液：pH7.4PBS-T（0.05%吐温-20）；5.4 显色液：ZB液5.5 终止液：4NH2SO45.6 酶标板、酶标仪。6检潴的环境条件生物安全二级实验室（BS1.-2）中进行,灭活后样本在生物安全一级实验室(BS1.-I)内进行。7检潴步骤7.1 用包被液按工作浓度稀释抗原，100W1.,4过夜：7.2 弃去包被液，用PBS-T重犯洗涤35次，甩干：7.3 将待检血清用稀拜液从I：100开始作2或4倍连续稀样，加入抗原孔，1001.孔,同时设阴、阳性对照，37C水浴I

3、小时：7.4 弃去血清，用洗涤液洗涤56次：7.5 加的结合物，用稀择液按工作浓度稀择，100的孔，37C水浴I小时：7.6 弃去的标抗体，用洗涤液洗涤6次，甩干；7.7 加显色液：干各反应孔内加A,B液各滴,37G避光35分钟：7.8 加终止液于每反应孔，1001孔。S结果判断于45Onm(TMB)阳性对照孔OD值/阴性对照孔OD值，即PN2.1.,对照成立；若待检血清孔OD值与阴性对照孔OD比值221，则标本为登革.热IgG抗体阳性，反之阴性。(阴性对照孔OD值小于0.05按0.05记，若大于0.05按实际数值计算)9意义阳性结果，衣明曾受到DV感染：核星期血清抗体阳转，或抗体滴度比急性期抗体滴度有4倍及以上升高则可确诊.