Aspirin增强溶瘤腺病毒特异性杀伤肝癌细胞实验研究.docx

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1、附件1项目编号：浙江省高校生科技创新项目申报书创新项目名称：ASPirin增加溶瘤腺病毒特异性杀伤肝癌细胞的试验探讨创新项目负责人：赵红芳学校名称：浙江理工高校申报日期：2013月11日项目类别：个人项目口团队项目浙江,高校生科技创新活动支配新苗人才支配实办公*M填写说明一、申报书要依据要求，逐项仔细填写，填写内容必需实事求是，表达明确严谨。二、格式要求：申报书中各项内容以Vord文档格式填写，表格中的字体为小四号仿宋体，1.5倍行距；表格空间不足的，可以扩展或另附纸张；均用A4纸双面打印，于左侧装订成册。三、申报书由所在学校领导审查、签署看法并加盖公章后，一式1份（均为原件），报送浙江省高校

2、生科技创新活动支配暨新苗人才支配实施办公室。一、项目债介项目概况项目名称ASPirin增加溶痛腺病毒特异性杀伤肝痛细胞的试骏探讨项目性质。基础探讨（J）应用基础探讨项目来源O自主立题（J）老师指导选题起止时间自2013年11月至2014年9月项目状况1.，研发阶段2、中试阶段3,批量（规模）生产（选项打J）申清人姓名赵红芳性别女诞生年月1991.3入学1997.9年月所在院系生命科学学院联系电话电子信箱项目组主要成员姓名年龄性别专业详细分工赵红芳22女生物技术总体负责，试验设计以及细袍培育王彬荣21女生物技术分子试舲、细胞培育游承浩20男生物制药细胞试舲韦誉20女生物技术整理试验前、中、后期资

3、料项目指导教师姓名王毅刚性别男诞生年月1976.12主要探讨方向肿瘤的基因治疗近三年获奖成果：国京级等奖项，省部级等奖项近三年科研经费90_万元,年均一：；（）一万元项目主要内容简介精症仍是威谩人类健康的疾病之一，而肝梗(HCC)在全哥癌症中致死率尚居世界箕次,并且每年的发病率呈上潴超势。全球每年新发肝癌病例75万，而基于病人的探讨显示肝痛的发病率和致死率愈发接近，预示着一旦患上肝施将很难治愈。随着近些年生物科学的发展，生物治疗有望成为肿瘤治疗的新方法。此次课题将生物治疗溶痛腺病毒)和传统的药物治疗结合(Aspirin).以寻求更好的抗肝珞疗效。试脸开展将借助新元医药探讨所的平台，利用试脸室构

4、建的溶瘤胰病毒，通过与ASPirin联用评价抗肝瘪的活性。试脸将通过摸索确定ASPirin与病毒联合的药物比例以及分析联合用药就单用溶瘤病者和ASPirin存在的优势。最终分析药物联用增加肝癌杀伤活性的机制。二、项目的探讨目的及意义1、申请项目的必要性、目的及意义肝痣是我国常见的恶性肿瘤之一，是我国位居其次的提症“杀手”，每年大约有IO万人死于肝癌。因其恶性度高、病情进展快，病人早期一般没有什么不适，一旦出现症状就诊，往往已属中晚期。故治疗诲度大、疗效差，一般发病后生存时间仅为6个月，人称“癌中之王”。肝罐是我们国家肿瘤中的王中王，在全世界肝够发病的病人当中，我国的肝癌患者占，10%以上，将近

5、1.半的肝癌发生在中国。因为肝癌跟肝硬化、肝炎有关，我们国家的肝痛患者大部分有肝炎和肝硬化的病史，肝炎在咱们国家是相当多，跟环境、饮食卫生以及血液感染等等有关。肝癌在我们国家发病率应当说是居高不下，对于我们来说如何做肝癌的早期发觉、早期诊断、早期治疗是特别有意义的，这就是所谓的“三早”.目前肿痛的传统治疗手段已经出现了严竣的瓶硬效应，犯向基因治疗是一种极具前量并已经取得了良好疗效的珞症治疗手段，而以溶痛探病毒为代表的生物治疗成为肿瘠治疗探讨的热点。近年来，为了得到更加优化的治疗方案,科研工作者们力图将肿瘠治疗的其它方法与基因治疗法相结合以期达到更佳的抗肿瘠疗效。前人的探讨性结果表明溶痛腺病毒的

6、溶瘤作用与腺病毒进行胞内增殖紧密相关.胞内增殖的前提又要求宿主细胞处于细胞周期中。刘新垣院士等结合基因治疗和病毒治疗的优势提出了一种新型的肿瘤治疗黄略.即福症的靶向基因）病毒治疗策略.这种策略能达到溶痛痛毒和治疗基因协同杀伤肿瘤的目的,为肿瘤治疗开拓了新的途径。ASPirin由水杨酸二钠盆乙酰化组成，化学名乙酰水杨酸（甜柳酸），是20世纪初由德国化学家EelixHoCfnunl合成并推出的一个化学结构较为简洁的“百年老药百年来，与其同时代诞生的绝大多数药物在历史长河中渐被淘汰，推阿斯匹林一枝独苏，因其药理作用不断有新发觉，适应不断有新扩展，堪称奇造。最初，阿司匹林因其蟀热镇痛和较强的抗炎抗风湿

7、作用而面世；后又发阿司匹林可促进尿酸抹泄和抗血小板凝X.使其格床适应证渐渐犷展到预防术后血栓形成、脑血栓成、心肌梗死等。近年来，ASPirin的抗癌作用受到广泛关注，特殊是对消化道肿描、前列腺癌、孔腮癌的武防或抑制的探讨巳成热点。并且Aspirin作为临床常用的解热镇痛药,价格低廉,易于购买,不良反应小，为肝癌联合用药供应了新思路。我们小组采Aspirin与溶瘤腺痛毒ZD55单独及联合运用治疗肝肿瘤细胞.逋过对比探讨来证明具有细胞周期抑制剂的抗肝瘙药物在与溶液膑病毒联合应用时是否能像人们所期盼的那样增加抗肝癌的治疗效枭,以期为近来有关溶痛腺病毒联合抗癌药物的研发提出一些新的启示。2.项目的背景

8、、主要内容、技术水平及应用范围Aspirin作为称床常用的解热镇痛药，价格低廉，易于购买，不良反应小，为肝鹿联合用药供应了新思路,溶瘤腺病毒是利用肿瘤细胞与正常细胞结构及代谢途径的差异，靶向性地在肿瘤细胞内复制增殖,最终裂解肿瘤细胞,通过基因工程技术改造磔病毒.使其在肿倭细胞内复制实力和溶解和细胞的实力增加,同时这些作用在正常体细胞内被减弱，对正常组织或细胞不会产生毒性作用。本课题联合溶瘤腺病毒与ASPirin作用于肿f三,探讨其治疗的可行性。项目探讨的主要试脸方法如下：一、细胞形态视察去对数生长期的HePG2细胞，调整细胞浓度,接种于灭菌孔板。设置单独一组溶瘠腺病毒与不同浓度的以及溶癌腹病毒

9、与不同浓度的阿司匹林共同作用于肝癌细胞。作用24小时后视察细施贴壁状况、透光性、大小、形态。二、Vrr法检测对肝珞细胞的抑制作用不同浓度的ASPirin与溶瘠腺病毒结合，作用于肝疮细胞。取对数长期的细胞，制成每毫升5X103个细胞的悬液，加入培育板中，培育24小时后，吸出液体，加入MTT后接着培育4h,弃上清液，再加入DMS0,于A590下测吸光值，同时做平行试验3殂。从而得出癌细胞的抑制率三、荧光显做镜视察将阳胞倒置于荧光显微镜下，调整液光片为绿色激发光，激发出红色荧光，通过显微镜数科相机在明场和暗场下对比细胞与荧光比较视野下荧光的细胞数。将溶蜃棣病毒所带红色荧光蛋白作为参照，通过具有具有荧

10、光的细胞数量来确定不同浓度Asprin与溶痛腺病毒在杀伤细胞中的作用。本项目基于肿病对人类的危害，虽然肿瘤的治疗已经取得了很大的成就，但还须要不懈的努力达到志向的治愈效果。ASPirin与溶搐腺病毒都有良好的治疗肿瘤的效果，本项目，探究联合药物对肿瘤细胞的杀伤实力，对其可行性进行探讨。为联合药物治疗肿瘤供应肯定的基础。3、实施该项目所具备的基础、优势和风险申请人所在的团队具有较高的试验技能和从事项目相关工作的何历，娴熟奇驭与本课题有关的各项试验操作的原理和方法，娴熟驾驭了生物技术专业学问。而且本团队成员工作严谨，甜爱科研,有苦一丝不荷的做事看法和较强的应变实力。对于探讨过程中所遇到的问题，能敏

11、捷的依据自己所学的专业学问来解决问题。申请人所在试超室浙江理工南校新元医学与生物技术探讨所基于浙江省重中之重学科平台,拥有美国BD流式细胞仪，ABI7300Real-TimePCR仪，化学发光仪.红外检测仪，诲标仪，BeCknIan超速离心机，ViIliPOre高效液相色语伏、纯水仪，日本OIymPUS荧光显微镜、显微操作仪等国际一流的洗脸设备，因此具备本课题所需的各项试脸条件。本试赘室已有以下设备，为该探讨的I版当开展供应了坚实的基础：正置荧光显微镀BX51T-32H01型奥林巴斯公司高速冷冻高心机CF16RX日本Hitachi台式低温离心机ERESCO贺利氏二氧化炭培育箱BBG161V15

12、11.型德国Heraeus公司荧光倒置显微镜IX71-22F1./PH日本奥林巴斯稳压稳流电泳仪HE-120天能自动蒸发消毒柜ES-315型Tomy公百梯度PCR仪PTC-200型美国MJResearch紫外分光光度仪HITACHIU2800日本Hitachi水平电泳槽IIE-120天能超低温冰箱Nuaire6382ENlAIRE凝胶成像仪GGWD2GeneGenius生化培育箱1.RH-1501.上海一恒倒置显微镜XDS-IB重庆光仪纯水系统ZMQS50l01型Millipore公司电子天平B1.310型泰多利斯公司空气摇床WS1.-100A型B1.UDPARDPCR仪IyTC-100型-9

13、6型美国MJResearch爵标仪TECANDNAexportTECAN转移仪E1.1TE200型WE1.TEC公司液氮罐Director4000ICI脱色摇床Ts-I江苏其林贝尔流式细胞仅FACSAriaTMBD公司以上条件能够充分保证我们I版当进行本课题的探讨，为完成课题供应坚实的保障。申请人所在试验家负责人刘新垣院士在肿摘的能向基因-病毒治疗方面创建了一系列新思维和新策略，指导教怖王毅刚博士在肿瘤的基因治疗方面具有丰富的科研经骏和指导阅历。团队以溶痛膑病毒为我体进行的靶向基因-病毒治疗肿瘤方面，完成了很多精彩的工作。如增殖性溶描膘病管ZD55-gene系统的建立，并利用其携带外源基因的抗

14、肿瘤探讨。以腺病毒和腺相关病毒为我体，通过针对恶性肿痛的分子靶点如hTERT、AFP及SUrViVin等进行治疗，取得了很好的效果，多篇论文发表在OnCOgene.Cancerresearch.Genetherapy,HUmangenetherapy,Hepatology,Moleculartherapy,Journalofgenemedicine.Cancerletters等杂志。申请人所在的团队所探讨的课题若是探讨胜利，无疑是绐现在的医学供应了更多的治疗肿瘤携症的方法，也为我们国家乃至全世界的患者带去了康复的福音。但我们也熟知的是，不同浓度的试剂对细胞的效果也大不相同，我们须要设置不同的浓

15、度梯度来进行试般，把最适浓度的范围弄的越来越小，精确度也越来越商.这得投入大量的人力、物力和时向。4.项目支配目标1 .验证溶瘤腺病毒ZD55-联合ASPirin可以有效地治疗肝癌.2 .找到扬晌效果战好的浓度范围以及两者的浓度比例。3 .进行溶痛腺病棒ZD55-联合ASPirin能够消加溶藕稼病毒ZD55-对诱导肝癌细胞凋亡作用机制的探讨。4 .课题总结，撰写论文并申请工作脸收。三、颈期成果、学问产权形成及经济、社会效益分析1、项目的预期成果及学问产权归屏状况通过该项目的探讨，脸证溶描膘病母ZD55-联合ASPirin可以有效地治疗肝癌。找到影啕效果最好的浓度范圉以及两者的浓度比例,并发表核心期刊论文一篇。学问产权归属浙江理工高校和赵红芳等四位同学。2、项目的市场前景分析纯的放、化疗对机体损伤大，副作用强。近年来生物治疗已成为肿瘤治疗的第四种模式，它以其特异性强，副作用小，激发免疫系统