WST 230—2024实时荧光聚合酶链反应临床实验室应用指南.docx

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1、ICSI1.020CCSC50WS中华人民共和国卫生行业标准WS/T2302024RVK/T230-2002实时荧光聚合酶链反应临床实验室应用指南Guidelinesforimplementationofreal-timefluorescentpolymerasechainreactioninclinicalIabomtories.2024-05-09发布2024-11-01实施中华人民共和国国家卫生健康委员会发布目次Wn1I莅国I2规莅性引用文件I3术语和定义J4缩略谓35样木采柒和处理36方:2.77污染预防和控制88质址管理IO9结果判读和报告1510实验室生物安全16Il临床适用范困1

2、6附录A（资料性附录）常用实时荧光PCR技术方法17时双B（资料性附录）实时英光PCR技术临床适用他国18参考文献21本标准为推荐性标准。本标准代替WS/T230-2002临床诊断中聚合由燧反应（PCR）技术的应用,与US/T230-2002相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如一更改了“范Ifr部分（见第1章，2002年版的笫1章），较WS/T2302002将所述技术范明由“PCR”缩小为“实时英光PCR”;一一增加了“规范性引用文件”部分（见第2章）：一一更改了“术谱和定义”部分（见第3章,2002年版的第2聿）；一一地加了“缩略语”部分（见第4章）；一一将“标本的收集、运输、处理

3、和存放”部分更身为“样本采集和处理”，对2002年版相关内容进行细化补充后纳入（见第5题,2002年版的第5章）；在“方法”中增加了针对实时戋光PCR技术的扩增体系、扩增反应内容，删除了该技术以外的其他PCR产物分析方法（见第6帝，2002年版的第I章）：一一在“污染预防和控制中增加了污染的处理与控制要求内容（见第7章，2002年版的第6段）：一将“质量控制”部分更改为“质量管理”，增加了人员及实脸室、设箸管理要求、方法性能命证、室内质控、实验室同比对要求内容（见第8章，2002年版的第7章）；-ft结果的判读、报告和解群”部分更改为“结果判读和报告”.增加检测方法局限性、结果报告要素、检测结

4、果解择内容（见第9章，2002年版的第8曲）：一一增加了“实验室生物安全”部分（见第10章）：一一将“用途”部分更近为“临床适用他国”，删除了过箱实验、诊断实验、蛤证实聆内容（见笫11章，2002年版的第3章）；一删除/2002年版“附录”内容（见2002年版的附录A“定IRPCR技术、附录B“对生产厂商的要求和建议”）：一一增加了资料性附录A常用实时荧光PCR技术方法”（见附录笛：一一增加了资料性附录B实时荧光PcR技术临床适用范围”（见附录B）.本标准由国家卫生健康标准委员会峪床检蛤标准专业委员会负责技术申宣和技术杏询，由国家卫生健康委医疗管理服务指导中心负由协询性和格式申杏，由国家TJ生

5、健康委M会医政司负击业务管理、法规司负货统筹管理.本标准主要起草单位：发旦大学附属中山医院、昆明医科大学第一附属医院、中国科学技术大学附M第一医院、发旦大学附属华山医院、北京大学人民医院、浙江省人民医院、中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心.本标准主要起草人:潘柏叭郭玮、段勇、沈佐君、关明、赵晓涛、荣向民、邱茂锋、王格丽.本标准于2002年首次发布，本次为笫一次修订。实时荧光聚合酶链反应临床实验室应用指南1三a本标准规定了实时荧光磨合酸链反应在临床实验空应用中的样本采集和处理、方法、污染预防和控制、质年管理、结果判读和报告、实的室生物安全、临床适用范国等要求，本标准适用于全国各级各类医疗

6、卫生机岗及医学检验实验室开展核酸犷剂基因定性及定属检测.本标准不适用于基于核酸柒交、核酸忸温扩增、基因测序等技术所开展的检测。2祝范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本标准必不可少的条款.其中.注日期的引用文件.仅该日期对应的版本适用于本标准；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修通单)适用于本标准.GB/T37874核酸提取纯化方法评价通则GB/T4097-1核酸样本侦IiU平价方法JJF1874(自动)核酸提取仪校准规冠JJF1527聚合触跳反应分析仪校准规范WS233病原激生物实脸宓生物安全通用准则WST348尿液标本的采集与处理WS/T414空间质信评价不合格原

7、因分析WST640临床微生物学检紧标本的采续和转运WS.T661峥脓血液标本聚集指南3*BWtX下列术语和定义适用于本标准.3.1XMUtfiPolyaerasechainreaction;PCK一种利用人工合成的寡核甘酸作为引物介导的DNA目标序列特异性解优扩增技术.当存在模板、底物、引初和酎热DM崇合院时，通过调节反应温度引导多次“变性-退火-延伸”反应循环，可令痕DM模板扩增数百万倍.3.2实时55光JR合反应real-timefluorescencepolymerasechainreaction：rcal-tinwPCR在PCR反应体系中引入荧光基团，利用荧光信号的松累实时监测将个PC

8、Ria程，通过连续监测绘制反应动力曲线，从而时样本中被扩增模板叭A的初始含量B行计算“该技术包含定性和定境检测，常以qPCR(qantitativcpolymerasechainreaction)代表定量检测.3.3反转录reverseIraKcriptiaizKF以RXA成做为模板，在反转录的催化下合成互补IAA(UPclXA)的过程.3.4模板template红制或转录.反转录过程中川来产生互补链的DNA或RNA核苻酸序列.目标序列targetsequence拟通过HR技术进行定性或定负检测的特定核酸/列区域.3.69Mprimer具有特定芹列的人工合成寡核甘酸片段,可与目标序列区域上下谢

9、可扑，从而形成检定的氢键连接.促进DNA娘合唧的结合和DNA鞋的延伸“3.7蛇隙针fluorescentprobe根据特定域因序列设计的标记有荧光菸团和泮灭翦用的人工合成分核音酸片段,与互补序列退火杂交后.通过PCR旷增陆促反应择放荧光信号.用于检测样本中是否含仃特定基因序列.3.8SHtdenaturationPCR反应体系中.利用岛源条件破坏核酸二级结构中的城键,使DNA，RNA均从复杂品级结构转变为妓性单槌核甘底的过程.3.9S5annealingPCR反应体系中,需通过降低反应体系温度,使两条线性单铳核首酸通过互补Wl基间的双谴形成同郃双集的过程.3.10SIextensionPeR反

10、应体系中，引物与模板发生退火后,在耐热Dw聚合前作用F,根据模板DNA的破葩顺序，以单个核甘陵为原料，白引物5缆向3端逐个添加核仃酸合成两条互补链的过程。3.11DNA*WMDNApolywrase以DNA单燧为模板、JNTP为原料，催化脱氧核仃酸加到货物或DNAsI的3-OH端，合成互补DNA新糙所得的酣.3.12反转录的reversetranscriptase以RNA为极板指导JNTR合成”:补DNA的聚合称3.13插入insertionDNA或RNA的一种突变出式，在原有核仔酸序列中插入了一个或多个额外核甘酸，3.14缺失deletionDNA或RNA的种突变形式，在原有核件酸序列中丢失

11、了个或多个原有核件酸.3.15抑制物inhibitor/干扰物interferentPCR检测反应体系中抑制或干扰PCR反应进行的物质，可导致PCR产物产业减少或非特界性产物增多.Ccntanimticn由于样本交叉污染或试剂、标准品、质控品、扩增产物污染等原因,导致PCR扩增体系中混入来自待检样本以外的模板，使PCR桧测出现以阳性结果的情况。3.17mplememaryDNA)crtNA游离DNA(CeiIfeDNA)Ct衢环阑曲(cyclethresholdvalue)ciDNA循环肿瘤DNA(CirCUlatingtumorDNA)DNA脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicac

12、id)DNaw脱轧核糖核酸酸(deoxyribonuclease)dNTP脱氧核件三磷酸(dcoxyribonucleosidcIriphosphaic)d,DNADNA(doublc-strandcdDNA)EDTA乙：胺四乙酸(elhyIenediaminaeiraaceticacid)FFPE福尔马林固定石蜡包埋(formalin-fixedDaraffin-e三bedded)miRNA微小RNAso,标准操作程序(standardoperatingprocedure)SSDNA而集DNA(SingIoStrandedDNA)real(i11)ePCR实时荧光聚合演SI反应(realin

13、efluorescencepolymerasechainreaction)rRNA核检体RNA(ribowmalRNA)Tm熔解温度(meltingtemperature)UDG尿啼噪-DXA糖地水解醉(UraCiI-DNA8Iycosylas)5样本果集和史理5.1 总体要求应正确进行样本采集、转运、处理和保存.发生在分析前阶段的操作不当可能会破坏样本完整性.导致核酸降斛，引入污染或干扰物，Ai终影响目标序列定性或定域检测结果的准确性，实验空应就各环节制定详细的技术要求，并向样本采集、转运、接收、检测人员分别提供相应培训.1.1.1.1 实验室在开展实时荧光PCR技术极务时.除常规遵循体外诊

14、断样本采集要求外,还可参照WST661、脚/T348、US/T640进行，应结合不同检测项目对样本的要求，并参考所使用试剂及耗材的说明，制定详细的样木采集程序，包括采样时效、采样部位、样本类型、采样装置与采集容器、采集方法、果样量、质房评价注意事项，并对采样人员提供相应培训与指导.1.1.1.2 采样人员在采集样本的应核对受检者身份、采样部位、样本类型、采样装置与采集容涔.采集完成的样本应予唯一性标识。1.1.1.3 如需受检者自行制取样本（例如痰液、尿液），应指导其如何正确制取并送检，避免因操作不当造成样本质圻不合格、检测结果不准确.5.2.2 *料5.2.2.1 采样时应参考检测r更目要求、疾病特性、病原微生物感染部位或培染细