WS-T421-2024抗酵母样真菌药物敏感性试验标准 肉汤稀释法.docx

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1、ICS11.020CCSC50WS中华人民共和国卫生行业标准WS/T4212024代替WS/T4212013抗酵母样真菌药物敏感试验标准肉汤稀释法StandardsforantifungalsusceptibilitytestingofyeastsBrothdilutionmethod2024-04-02发布2024-09-01实施中华人民共和国国家卫生健康委员会发布目次前言111范围I2规范性引用文件13术语和定义14抗真菌药物的配制25培养基的配制46肉汤稀释法操作步骤47结果判读与解释58质量控制8附录A（资料性）RPMl-1640肉汤培养基配制方法10附录B（规范性）肉汤稀释法质控菌株

2、MlC范围12附录C（规范性）酵母样真菌药敏试验可用的折点和/或ECV汇总表15附录D（规范性）体外微量肉汤稀释法MlC折点和ECV16附录E（规范性）EUCAST微量肉汤稀释法质控范围、折点和ECOFF值23参考文献28-XX-1-刖三本标准为推荐性标准。本标准代替WS/T421-2013抗酵母样真菌药物敏感性试验一肉汤稀释法，与WS/T421-2013相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下：一增加了术语和定义中“流行病学界值”、“野生型”、“非野生型”和“拖尾生长”，删除了“非敏感”（见3.8、3.9、3.10、3.12,2013年版的2.8）;抗真菌药物储存液使用的溶剂、稀释液

3、和检测范围表格增加了瑞扎芬净、艾瑞芬净、Manogepix.艾沙康哇、酮康噗、雷夫康嗖（见4.3.2）;更改了结果解释内容：按C1.SI（Clinicaland1.aboratoryStandardInStitUte）有折点的念珠菌属、无折点的念珠菌属、暂定折点的耳念珠菌、无折点的隐球菌属及有折点和流行病学界值（C1.Sl表述：epidemiologicalcutoffvalue,ECV）的念珠菌属分别进行说明，并在附录D分别列表：增加了对抗真菌药物的具体说明；C1.SI和EUCAST的肉汤稀释法步骤基本一致，对有差异部分在文中相应部分给予了说明，包括增加了EUCAST（TheEUroPean

4、CommitteeonAntimicrobialSusceptibilityTesting）折点和流行病学界值（EUCAST表述：epidemiologicalCUtoff,ECOFF）结果解释并在附录E列出试验条件、质控范围、折点、ECOFF值等表格（见7.2,2013年版的5.5）;增加了结果报告方式，C1.Sl及EUCAST两种药敏方法相应的结果报告方式（见7.4）;一删除了质量控制中质控频率和检测频率内容，增加了：按培养基和材料质控、纯度质控、终点判读和质控；日常使用质控菌株的复苏方法（见2013年版的7.3,见8.2、8.3、8.4、8.5.3）;一更改了附录A为相关培养基配制表格，

5、附录B为质控MIC范围，附录C为酵母样真菌的折点和ECV值汇总等（见附录A、附录B、附录C,见2013年版的附录A、附录B、附录C）。本标准由国家卫生健康标准委员会临床检验标准专业委员会负责技术审查和技术咨询，由国家卫生健康委医疗管理服务指导中心负责协调性和格式审查，由国家卫生健康委员会医政司负责业务管理、法规司负责统筹管理。本标准起草单位：北京医院/国家卫生健康委临床检验中心、北京大学人民医院、首都医科大学附属北京友谊医院、中国医学科学院北京协和医院、华中科技大学同济医学院附属同济医院、上海市东方医院（同济大学附属东方医院）、北京大学第一医院、解放军总医院第一医学中心。本标准主要起草人：胡继

6、红、王辉、苏建荣、胡云建、徐英春、孙自铺、吴文娟、李若瑜、沈定霞、骈亚亚。本标准于2013年首次发布，本次为第一次修订。抗酵母样真菌药物敏感试验标准肉汤稀释法1范围本标准规定了用经典的宏量肉汤稀释方法(BrothMacrodilutionmethod)检测抗醉母样真菌的最低抑菌浓度(MinimalInhibitoryConcentrationlMIC)的参考方法，并推荐了与本参考方法结果具有良好一致性的微量肉汤稀释方法(BrothMicrodilutionmethod)o本标准适用于引起感染的酵母样真菌(包括念珠菌属某些种Candidaspp.和隐球菌属某些种Cryptococcusspp.)

7、的药物敏感性试验，并推荐了某些相关抗真菌药物的肉汤稀释试验的最低抑菌浓度(MlC)质控参考范围、折点、结果解释性分类和流行病学界值。本标准不适用于双相真菌如皮炎芽生菌Blaslomycesdermatitidis、荚膜组织胞浆菌HistoplasmaCapsulatum及丝状真菌的检测。2规范性引用文件本标准没有规范性引用文件。3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1最低抑菌浓度minimalinhibitoryConcentrationjMIC肉汤稀释法中，抗真菌药物能抑制微生物生长的最低浓度。本标准使用评分确定MlC值。3.2折点breakpoint;BP用于区分菌株为敏感、剂量依赖

8、性敏感、中介、耐药的最低抑菌浓度(MlC)或抑菌圈直径数值。折点系综合微生物学特征、药代动力学-药效学(Pharmacokinetics-pharmacodynamics,PKPD)参数、临床疗效数据而得出，还可随特定的感染部位、常规药物剂量、给药途径及频次等的变化而不同。3.3解释性分类interpretivecategory结果解释性分类源于可获得的微生物特性、药代动力学-药效学(PK/PD)参数和临床疗效结果数据。根据建立的折点将药敏结果所得的MIC值进行敏感、剂量依赖性敏感、中介、耐药解释分类。3.4敏感susceptible;S此浓度的抗真菌药物在体外试验中能抑制真菌生长，当使用推荐

9、剂量时，可能获得良好的临床疗效。3.5剂依赖性敏感susceptible-dosedependent;SDD指分离株的敏感性依赖于对患者的用药方案，即对于药敏结果在SDD范围内的分离株，为了使血药浓度达到临床疗效，采用较高剂量和/或增加用药频率的给药方案，使药物暴露高于常用敏感折点的剂量。中介intermediate;1中介菌株的药物浓度通常可达到常规用药时血液和组织中的药物浓度水平，但反应率可能低于敏感株，不能明确划分为“敏感”或“耐药”。在体外可抑制真菌的生长，但不能确定此浓度的临床疗效。如在机体生理浓集部位或高于正常剂量用药可获得临床疗效。此外，还可作为检测方法固有变异的缓冲区，以防止微

10、小的、不可控的技术因素导致较严重的错误结果，特别是毒性范围窄的药物。3.7耐药resistant;R当使用推荐剂量时在临床治疗中很有可能失败。3.8流行病学界值epidemiologicalcutoffvalue;ECV/epidemiologicalCUtoffjECOFF基于菌株MlC值，将微生物群归类为是否含有获得性耐药和/或突变耐药表型的两个群体（野生型和非野生型）。ECV定义了菌株野生型菌群药物敏感性的上限值（最大MIC值）。3.9野生型wild-type;WTECV将分离菌株归类为对某种检测的抗菌药物无获得性耐药机制或无敏感性降低的生物型。3.10非野生型non-wiId-type

11、;KTECV将分离菌株归类为对某种检测的抗菌药物具有推测的/已知获得性耐药机制或敏感性降低的生物型。3.11效价potency抗菌药物中具有抗菌活性的部分，通过同类标准物质测定得出。单位表示为mg/g、gmg,IUg,或用百分比表示。3.12拖尾生长trailinggrowth在结果读取时间内，随着培养时间的延长，在一定浓度范围内菌量减少但仍有少量菌持续生长的现象。3.13质量控制QualityControljQC为保证检测的准确性和可重复性而采取的方法或技术。4抗真菌药物的配制4.1抗真菌药物标准品或参考品抗真菌药物使用标准品或参考品。使用有效期内的标准品，按说明书推荐的条件下储存。当把药物

12、从低温环境中取出时，需恢复到室温后再开瓶。4.2称量药物可使用式（1）、式（2）计算药物重量及稀释液体枳：除（1?式中：m药物的重量，单位为亳克（mg）;P药物的浓度，单位为微克每亳升（ugm1.）;T药物的效价，单位为微克每亳克（ugmg）;V药物的浓度，单位为亳升（m1.）。4. 3药物储存液（母液）5. 3.1药物称量药物称量按照配制储存液的浓度计算，配制储存液浓度至少按检测范围最高浓度的100倍配制储存液。但有些溶解度低的药物应配制较低浓度的储存液。称量应在分析天平上进行，天平应定期校准。6. 3.2溶剂溶解时，一些药物需使用非水溶剂溶解（见表1）,溶剂的信息可参考厂家说明书。溶剂（分

13、析纯）包括：二甲基亚飒（DMS0）、乙醇、聚乙二醇、陵甲基纤维素。表1抗真菌药物的储存液使用的溶剂、稀释液种类及药物浓度检测范围抗真菌药物溶剂a稀释液药物浓度检测范围ug/m1.两性霉素BDMS0,培养基0.0313-16卡泊芬净DMSO培养基0.015-8阿尼芬净DMSO培养基0.0158米卡芬净DMSO培养基0.015-8瑞扎芬净DMSO培养基0.OO8-4艾瑞芬净DMSO培养基0.015-8ManogepixDMSO培养基0.004-2氟康理DMSO培养基0.12564氟胞喀咤DMSO培养基0.125-64艾沙康喋DMSO培养基0.0313-16伊曲康嗖DMSO培养基0.031316酮康

14、哇DMSO培养基0.0313-16泊沙康嗖DMSO培养基0.031316雷夫康喋DMSO培养基0.0313-16伏立康嗖DMS培养基0.0313-16某些溶剂存在潜在毒性，使用前应咨询厂家。DMSo指二甲基亚砌。培养基指RPMl-1640肉汤培养基，如使用商品化RPMIT640肉汤干粉配制，步骤见表A.1。储存液通常是无菌的，如需进行除菌操作，应使用无菌滤膜过滤（过滤细菌常用孔径为0.2m）o应避免使用纸张、石棉和玻璃滤器等具有吸附抗真菌药物的材质。4.3.4存储储存液应在无菌塑料管中分装，密封保存于-70C或更低环境，保存温度不高于-20C。从冰箱中取出的当天使用，现用现取，未用完的应丢弃。

15、大多数药物储存液在-70C可保存6个月。4.4非水溶性抗真菌药物稀释液对于不溶于水的抗真菌药物，需先用合适的溶剂配制UoO倍终浓度的储存液，然后用RPMl-1640肉汤稀释为10倍终浓度的中间浓度（最终要与菌液1：9混合），配制步骤见表2。5培养基的配制5.1RPMI-1640肉汤培养基推荐使用RPMI-1640肉汤培养基（配制方法见表A.1）,若无商品化RPMl-1640干粉培养基，配方见表A.2。5.2含2%葡萄糖的RPMI-1640肉汤培养基微量肉汤稀释法推荐使用葡萄糖含量为2%的RPMI-1640肉汤培养基，配方见表A.3。表2非水溶性抗真菌药物稀释步哪配制步骤浓度(Ugm1.)来源体积(m1.)溶剂=IDMSO0(m1.)中间浓度=（gm1.）终浓度1:10(Ug