GB_T21037-2024饲料中二甲氧苄氨嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶和二甲氧甲基苄氨嘧啶的测定.docx

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1、ICS65.120CCSB46中华人民共和家标准GB/T210372024代替GB/T210372007饲料中二甲氧芾氨喑喔、三甲氧茶氨嘴喔和二甲氧甲基芾氨喑咤的测定Determinationofdiaveridine,trimethoprimandormetopriminfeeds2024-03-15发布2024-10-01实施国家市场监督管理总局发布国家标准化管理委员会本文件按照GBT1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件代替GB/T210372007饲料中三甲氧苫胺嚅噬的测定高效液相色谱法，与GB/T210372007相比，除结构调整和编辑性改

2、动外，主要技术变化如下：a）增加了二甲氧芾氨嗑咤和二甲氧甲基节氨嗑咤的测定方法（见第1章）；b）适用范围中增加了精料补充料和动物源性饲料原料（见第1章）；c）更改了检出限和定量限（见第1章，2007年版的第1章）；d）增加了液相色谱-申联质谱法（见第4章）；e）更改了原理（见5.1,2007年版的第3章）；）更改了试验步骤（见5.5,2007年版的第7章）；g）更改了精密度（见5.7,2007年版的第9章）。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）提出并归口。本文件起草单位：四川威尔检测技术股份有限公司、

3、山东省畜产品质量安全中心、通威农业发展有限公司。本文件主要起草人：张凤秤、王鑫、李俊玲、唐华英、孙延军、杜雪莉、杨发树、张璐。本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为：2007年首次发布为GB/T210372007;一一本次为第一次修订。饲料中二甲氧苇氨喀口定、三甲氧苇氨喀口定和二甲氧甲基玉氨喀咤的测定1范围本文件描述了饲料中二甲氧羊氨喀呢、三甲氧革效腐呢和二甲氧甲基羊氨喀咤的液相色谱-串联质谱和高效液相色谱测定方法。本文件适用于配合饲料，农缩饲料，精料补充料、添加剂预混合饲料和动物源性饲料原料中二甲氧茶氨啼唬、三甲氧苇氨喀嚏和二甲氧甲基羊经嗑I淀的测定。本文件液相色谱串联质谱法的检出限为2.

4、5ugkg,定量限为5.0gRg:高效液相色谱法的检出限为0.25mgkg定量限为0.50mgkgo2规范性引用文件下列文年中高内容通过于的规范神用做我改祭假件必和可水的条款代中，日胞的引用文件，仅该目用对的版本适与本义理，不注的部引用复的其最而级本（包据所窗的随改）适用于本文件。GB/T6682分析实验至用水规格和试验分法GB/T20195动物饲料武样的时备3术语和定要本文件没有需要界定的术语和定义。4液相色谱一串联质谱法（仲裁法）4.1 原理试样中的待测物在弱碱性条件下用乙酸乙酯提取、正己烷脱脂，混合型强阳离子交换小柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。4.2 试剂或材料除非另有规

5、定，仅使用分析纯试剂。4.2.1 水：GB/T6682,一级。4.2.2甲醇：色谱纯。4.2.3乙睛：色谱纯。4.2.4甲酸：色谱纯。4.2.5乙酸铉:色谱纯。4.2.6氨水。4.2.7乙酸乙酯。1.1.1 乙酸钠溶液(82g1.):称取8.2g乙酸钠，用水溶解，转移至100m1.容量瓶中，定容，混匀。4.2.9 5%乙酸溶液：移取5ml.冰乙酸于100m1.容量瓶中，用水稀释、定容，混匀。4.2.10 现乙酸-乙胎溶液：移取Im1.冰乙酸于100m1.容量瓶中，用乙脂(4.2.3)稀释、定容，混匀。4.2.11 乙月青-5%乙酸溶液：移取IOm1.乙界K4.2.3)于100m1.容量瓶中，用

6、5%乙酸溶液(4.2.9)稀释、定容，混匀。4.2.12 2.12正己烷乙脂饱和溶液：量取80m1.正己烷于100m1.分液漏斗中，加入IOm1.乙脂(4.2.3)后，剧烈振摇5min,静置分层后，弃去乙胞层。4.2.13 8%氨水-甲醇溶液：量取50m1.甲醇(4.2.2)于100m1.容量瓶中，再加入8m1.氨水(4.2.6),用甲蝌释、定容，混匀。4.2.14 0.2%甲酸溶液：量取500m1.,水于100Om1.,容量瓶中，加入2m1.甲酸(4.2.4),用水稀释、定容，昆匀。4.2.15 乙酸较-0.2%甲酸溶液:称取0.154g乙酸馁(4.2.5),用0.2%甲酸溶液(4.2.14

7、)溶解，转移至1000ml,容量瓶，定容，混匀。4.2.16 复溶液：移取150ml.乙月青(4.2.3)于100om1.容量瓶中，用乙酸筱-0.2%甲酸溶液(4.2.15)定容，昆匀。4.2.17 2.17标准储备溶液(Imgm1.):称取二甲氧茉氨嗓咤(CAS:5355-16-8,纯度不低于98%)、三甲氧羊氨嘘喔(CAS:738-70-5,纯度不低于98%)和二甲氧甲基苇氨嗑呢(CAS:6981-18-6,纯度不低于98%)标准品各Iomg(精确至0.01mg),分别置于IOm1.容量瓶中，用现乙酸-乙月青溶液(4.2.10)溶解、定容，混匀。T8C以下贮存，有效期6个月。4.2.18

8、混合标准中间溶液I(IOugm1.):分别准确移取二甲氧茉氨嗑噬、三甲氧羊氨嗑唆和二甲氧甲基羊氨嗑喔标准储备溶液(4.2.17)各Im1.于100m1.容量瓶中，用现乙酸-乙脂溶液(4.2.10)稀释、定容，混匀。T8C以下贮存，有效期3个月。4.2.19 2.19混合标准中间溶液Il(IHgm1.):准确移取Im1.混合标准中问溶液1(4.2.18)于IOm1.容量瓶中，用康乙酸乙月青溶液(4.2.10)稀释、定容，混匀。临用现配。4.2.20 2.20内标标准储备溶液(Imgm1.):称取d2三甲氧羊氨嚏噬(CAS:1189460-62-5,纯度不低于98%)标准品10mg(精确至0.0I

9、mg)于10ml.容量瓶中，用1%乙酸-乙盾溶液(4.2.10)溶解、定容,混匀。T8C以下贮存，有效期6个月。4.2.21 内标中间溶液(IoUgm1.):准确移取Im1.内标标准储备溶液(4.2.20)于100m1.容量瓶中，用1%乙酸-乙胞溶液(4.2.10)稀释、定容，混匀。-18C以下贮存，有效期3个月。4.2.22 内标工作溶液(lgm1.);准确移取Im1.内标中间溶液(4.2.21)于IOm1.,容量瓶中，用1%乙酸乙月青溶液(4.2.10)稀释、定容，混匀。临用现配。4.2.23 混合标准系列溶液：准确移取适量体积的混合标准中间溶液II(4.2.19)及1001.l1.内标工

10、作溶液(4.2.22)于IOm1.,容量瓶中，用复溶液(4.2.16)稀释、定容，混匀，配制成质量浓度分别为0.5ngm1.4.2.24 ng/ml2.0ng/m1.、10.0ngm1.50.0ng/m1.、100.0ngml.利内标质量浓度均为IOng/m1.的混合标准系列溶液。临用现配。4.2.24 混合型强阳离子交换小柱：60mg3m1.,或性能相当者。4.2.25 微孔滤膜：0.22urn,有机系。4.3仪器设备4.3.1 液相色谱-申联质谱仪：配电喷雾离子源(ESD。4.3.2 分析天平：精度为0.Img、0.0Imgo1.1.1 3.3涡旋混合器。1.1.2 3.4冷冻离心机：转速

11、不低于100oormin.1.1.5 超声波清洗器。1.1.6 固相萃取装置。1.1.7 氮吹仪。4.4 样品按照GB/T20195规定制备试样，至少Og.粉碎使具全部过0.425mm试验筛，混合均匀.装入密闭容器中，备用。4.5 试验步骤4.5.1 提取平行做2位武验称取试样约2g（精确至0.1mg）,置于50m1.离心管中，力入100H1.内标工作溶液（4.2.22）0m乙酸耐溶液（20和05m1.每水420）,涡旋混合2min,准确加入IOm1.乙酸乙酯（4.2.7）揭施是合2m品超应据取10面应态高据配部合1次），于4亳下oomin离心5min,移取上层有机相至另一Om6管中准确州人T

12、O-mfcZ取乙的畿2.7）重复提取1次，合并有机相，混匀。准确移取2ml有机和，50必氮气吹条适干，加天系上乙睛-5%乙酸溶液（4.2.11）溶解残渣，最旋混合30、年加大m1.正燃院足晴他流维液（4.202,测旋混合s.4C下10000rnn离心5min,养上P区正己烷洲级，全部下层各液,备用。注：若取液是化严重，弃人有正己液后，范乙时地而格液1复股4.5.2 W混合型强围离于交换原非依次用的甲种有乙册考端乙酸溶液：2.1活化，取备用液（4.5.1）全部过柱。秀别用3m1.乙脖-5%乙酸溶液（4.2.11）、3m1.甲醇（42.2）淋洗，抽干后加入5m1.8%氨水-甲醇容液（2.13）洗脱

13、，收集洗脱液，50C下氮气吹至近于，准确丽入Im1.复溶液（4.2.16）,涡旋混合30过微犯滤膜（4.2.25）,滤液待测。4.5.3 测定4.5.3.1 液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下：a）色谱柱：C柱，柱长50mm,内径2.1mm,粒径1.8Pm,或性能相当者；b）柱温：350C;c）流速：0.3mlmin;d）进样量：3Ul;e）流动相：A相为乙脐（4.2.3）,B相为乙酸锭-0.2%甲酸溶液（4.2.15）,梯度洗脱程序见表1。表1梯度洗脱程序时间minA相/%B相/%0.0015852.0015855.0030705.1010006.0010006.1015857.00158

14、54.5.3.2 缔质谱参考条件如下：a)电离方式：电喷雾电离，正离子模式(ESI*);b)检测方式：多反应监测(MRM);c)毛细管电压：4.OkV;d)离子源温度：350C;e)脱溶剂气温度：300;f)脱溶剂气流速：7Umino多反应监测(MRM)定性离子对、定量离子对及碰撞能量见表2。表2多反应监测(MRM)离子对、碰撞能弁考值待测物名称定性离子对m定量离子对m/z碰撞能量eV二甲氟茶氨喀咤261.2245.0261.2245.030261.2123.325三甲氧苇氨喀咤291.3230.2291.3230.225291.3261.030二甲氧甲基羊氨嗑噫275.4259.3275.4

15、259.330275.4123.325三甲氧节氨喑咤300.2234.0300.2234.O254.5.3.3 混合标准系列溶液和试样溶液测定在仪器的最佳条件下，分别取混合标准系列溶液(4.2.23)和试样溶液(4.5.2)上机测定。混合标准溶液中二甲氧不氨嗓咤、二甲氧节氨嚅咤、二甲氧甲基节氨喀咤和d,一甲氯节氨嗜咤的定量离子色谱图见附录A.4.5.34定性在相同试验条件下，试样溶液中待测物的保留时间应与标准系列溶液(浓度相当)中待测物的保留时问一致，其相对偏差在2.5%之内。根据表2选择的定性离子对，比较试样谱图中待测物监测离子对的相对离子丰度与浓度接近的标准系列溶液中对应的监测离子对的相对离子丰度，若偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子卡度50%20%50%10%20%