一枝黄花的提取工艺研究.docx

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1、摘要：目的：以芦丁作为考察的指标性成分，确定一枝黄花的最佳提取工艺参数。方法：采用正交试验法，对乙醇浓度、乙醇用量、提取次数、提取时间等参数进行考察。结果：最佳提取工艺参数为70%乙醇10倍量、每次提取1.5h、提取3次。结论：应用该工艺参数提取一枝黄花的芦丁得率高，为一枝黄花提取工艺的确定提供了实验依据。关键词：一枝黄花；芦丁；乙醇回流提取；正交试验0引言一枝黄花是菊科一枝黄花属植物一枝黄花(Solidagodecurrens1.our.)的干燥全草，主产于长江以南各地。一枝黄花的化学成分包括黄酮、皂昔、苯甲酸节酯、当归酸桂皮酯、焕属化合物、苯丙酸等。在2015年版中华人民共和国药典一部中，

2、一枝黄花是以芦丁作为其指标性成分进行定量考察的。本文采用正交试验法，结合单因素考察，以有效成分芦丁作为指标，对一枝黄花的提取工艺进行了优化研究，为一枝黄花生产工艺的确定提供了依据。1 实验材料1 .1药材一枝黄花药材购自贵州遵义，经江西普正制药有限公司质量管理部检测为一枝黄花。2 .2仪器高效液相色谱仪：Watersl525型高效液相色谱仪；色谱柱：HyPerSilC18柱（4.6mmX250mm）；JK-100型超声波清洗器；SHB-IIIS型循环水式多用真空泵；RE-5203A型旋转蒸发仪；HHS-24型电热恒温水浴锅；SZ-93自动双重纯水蒸储器。1. 3试剂乙懵、甲醇为色谱纯，超纯水，

3、其余试剂为分析纯。2提取方法选择乙醇回流提取法和水煎煮法对一枝黄花药材进行提取，结合HP1.C法测定芦丁含量，对其提取工艺进行初步研究。2. 1乙醇回流提取法2. 1.160%乙醇回流提取称取一枝黄花药材10g,用60%乙醇（/）回流提取2次，每次加入60%乙醇10倍量，第一次提取3h,第二次提取2h,滤过，合并滤液，回收乙醇后加水定容至100nI1.,再取2m1.用70%乙醇定容至10m1.,即得供试品溶液。2. 1.270%乙醇回流提取称取一枝黄花药材10g,用70%乙醇（）回流提取2次，每次加入70%乙醇10倍量，第一次提取3h,第二次提取2h,滤过，合并滤液，回收乙醇后加水定容至100

4、nI1.,再取2m1.用70%乙醇定容至10m1.,即得供试品溶液。2. 1.380%乙醇回流提取称取一枝黄花药材10g,用80%乙醇（/）回流提取2次，每次加入80%乙醇10倍量，第一次提取3h,第二次提取2h,滤过，合并滤液，回收乙醇后加水定容至100nI1.,再取2m1.用70%乙醇定容至10m1.,即得供试品溶液。2. 2水煎煮法称取一枝黄花药材10g,用水煎煮2次，每次加水10倍量，第一次煎煮3h,第二次煎煮2h,滤过，合并滤液，浓缩后加水定容至100m1.,再取2m1.用70%乙醇定容至10m1.,即得供试品溶液。2. 3合格标准2. 3.1检测方法按照药典四部通则0512规定的高

5、效液相色谱法测定一枝黄花中的芦丁含量。色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙懵-甲醇-0.4%醋酸溶液（16:8:76）为流动相；检测波长为360nmo理论板数按芦丁峰计算应不低于2500o对照品溶液的制备：取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每InI1.含0.1Ing的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本品粉末（过三号筛）约2g,精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50m1.,称定重量，加热回流40min,放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10P1.,注入液相色谱仪，测定，

6、即得。3. 3.2合格标准本品按干燥品计算，含无水芦丁(C27H3M6)不得少于0.10%,即1mggo4. 4结果采用上述提取方法所得一枝黄花提取液中的芦丁含量如表1所示。表1提取液中芦丁含量检查项目.60%乙醇提取70%乙醇提取80%乙醉提取水(煎煮)提取第一次提取无水芦丁含量/(mgg)。0.0760.078%.0.0790.009%笫二次提取无水芦丁含量/(mgg)0.0280.030%.0.0300.003%无水芦丁总含量/(ngg)0.1040.1080.1090.012从表1可知：采用乙醇回流提取法和水煎煮法所提取的无水芦丁含量相差较多。水煎煮法的无水芦丁得率约为乙醇回流提取法的

7、1/10-l8o而采用60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇回流提取的无水芦丁含量差别不大。通过上述对不同提取方法的考察，本文选择了乙醇回流提取法对一枝黄花进行提取，并继续通过采用正交试验法对乙醇回流提取法的工艺参数进行考察。5. 1因素水平的确定正交试验以芦丁得率为指标，对乙醇浓度（因素A）、乙醇用量（因素B）、提取时间（因素C）、提取次数（因素D）四个参数进行考察，因素水平表如表2所示。表2因素水平表水平-SA乙醇浓度/*B乙醇用量/修C提取时间/hD提取次数/次Ip50-出Ic2“70-&1.5.2-3“90-10.2和按照1.g（3）正交设计表进行9组试验。由于没有空白因素列，因此每组试验

8、重复进行3次，共进行27次试验，根据每次试验的误差与整体试验的误差，检验该正交试验的可行性。6. 2正交试验方法3. 2.1试验一称取一枝黄花药材10g,用50%乙醇（）回流提取1次，加入50%乙醇6倍量，提取1h,滤过，合并滤液，回收乙醇后加水定容至100m1.,再取2m1.用70%乙醇定容至10m1.,即得供试品溶液。3.2.2试验二称取一枝黄花药材10g,用50%乙醇（Q回流提取2次，加入50%乙醇8倍量，每次提取1.5h,滤过，合并滤液，回收乙醇后加水定容至100m1.,再取2m1.用70%乙醇定容至IOm1.,即得供试品溶液。3.2.3试验三称取一枝黄花药材10g,用50%乙醇（/）

9、回流提取3次，加入50%乙醇10倍量，每次提取2h,滤过，合并滤液，回收乙醇后加水定容至100m1.,再取2m1.用70%乙醇定容至10m1.,即得供试品溶液。3.2.4试验四称取一枝黄花药材10g,用70%乙醇（）回流提取3次，加入70%乙醇6倍量，每次提取1.5h,滤过，合并滤液，回收乙醇后加水定容至100m1.,再取2m1.用70%乙醇定容至10m1.,即得供试品溶液。3.2.5试验五称取一枝黄花药材10g,用70%乙醇（/）回流提取1次，加入70%乙醇8倍量，提取2h,滤过，合并滤液，回收乙醇后加水定容至100m1.,再取2m1.用70%乙醇定容至10m1.,即得供试品溶液。3.2.6

10、试验六称取一枝黄花药材10g,用70%乙醇（Q回流提取2次，加入70%乙醇10倍量，每次提取Ih,滤过，合并滤液，回收乙醇后加水定容至100m1.,再取2m1.用70%乙醇定容至10m1.,即得供试品溶液。3.2.7试验七称取一枝黄花药材10g,用90%乙醇（/）回流提取2次，加入70%乙醇6倍量，每次提取2h,滤过，合并滤液，回收乙醇后加水定容至100m1.,再取2m1.用70%乙醇定容至10m1.,即得供试品溶液。3.2.8试验八称取一枝黄花药材10g,用90%乙醇（）回流提取3次，加入70%乙醇8倍量，每次提取1h,滤过，合并滤液，回收乙醇后加水定容至100m1.,再取2ITI1.用70

11、%乙醇定容至10m1.,即得供试品溶液。3.2.9试验九称取一枝黄花药材10g,用90%乙醇（/）回流提取1次，加入70%乙醇10倍量，提取1.5h,滤过，合并滤液，回收乙醇后加水定容至100m1.,再取2m1.用70%乙醇定容至10m1.,即得供试品溶液。3.3正交试验结果按照1.K3）正交试验表进行试验，每个因素水平试验3次，结果如表3所示，方差分析如表4所示。试脸号Av屏O试验结果乙醇浓度乙醇用量提取时间提取次数无水芦丁含量/(mgg)，1“1“Ip6.99.2，1“加却8.91。3。1，3”和9.64.加Ip和12.72。5-2-3.1，9.03.6-却和211.07。7。和Ip1.2

12、。8.87.，8.13，2.1加11.88.%和Ip9.54.表4正交试验方差分析方差来源离差平方和自由度均方和?比,RA.27.19.-2.13.595-154.49-F0.01B.1.38.2.0.690-7.84.F0.0O6.53.2。3.26537.10.Q0.OhD.39.1和2。19.565.222.33.PO.Q1*误差.1.59-18.0.088-aa75.82.26-3e3. 4正交试验结果分析(D提取一枝黄花时，A、B、C、D四个因素均具有极显著性差异，这些影响因素按序排列为DACB,即提取次数乙醇浓度提取时间乙醇用量。(2)直观分析正交试验结果可以看出，提取效率最高的工

13、艺参数组合为A2B1C2D3,即70%乙醇6倍量、每次提取1.5h、提取3次，芦丁平均提取效率为12.72mggo(3)经方差分析可知，最佳提取工艺参数为A2B3C2D3,即70%乙醇10倍量、每次提取1.5h、提取3次，具体相关提取效率需经过中试验证确认。4正交试验的工艺验证4. 1中试工艺验证综合正交试验结果分析和实际提取成本两方面进行考虑，对最佳提取工艺和提取效率最高的工艺进行中试提取验证，提取条件为：称取一枝黄花药材100g,用70%乙醇（V/V）10倍量回流提取3次，每次提取1.5h,滤过，合并滤液，回收乙醇后加水定容至1OOom1.,再取20m1.用70%乙醇定容至100m1.,即

14、得供试品溶液，取样进行芦丁含量检查。连续进行3次中试工艺验证，以检查其工艺的重现性。4. 2检验方法按照药典四部通则0512规定的高效液相色谱法测定一枝黄花中的芦丁含量。色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙懵-甲醇-0.4%醋酸溶液（16:8:76）为流动相；检测波长为360nmo理论板数按芦丁峰计算应不低于2500o对照品溶液的制备：取芦丁对照品适量，精密称定，加甲醇制成每InI1.含0.1Ing的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本品粉末（过三号筛）约2g,精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50m1.,称定重量，加热回流40min,放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各101.,注入液相色谱仪，测定，即得。1 .3合格标准本品按干燥品计算，含无水芦丁(C27H3M6)不得少于0.10%,即1mg/go4 .4验证结果正交试验验证结果如表5所示。表5正交试验验证结果验证结果显示：按最佳提取工艺参数，即70%乙醇10倍量回流提取3次，每次提取1.5h,经连续3次试验验证，无水芦T(C27H30O16)含量均符合标准要求。5 结语本文通过采用HP1.C法测定芦丁含量