2.《猕猴桃无病毒种苗生产技术规程》征求意见稿编制说明.docx

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1、舜猴桃无病毒种苗生产技术规程编制说明（征求意见稿）编写单位：西北农林科技大学2024年3月一、工作概况1.1 任务来源本标准是根据陕西省市场监督管理局关于下达2022年陕西省地方标准制修订计划项目的通知要求起草，项目编号SDBXMUl-2022。1.2 目的与意义殊猴桃原产于中国，是一种营养价值极高的水果，有“VC之王”之称，在全球水果生产中占有重要位置。目前全球有30多个国家栽培舜猴桃，主产国有中国、意大利、新西兰和智利。截至2019年年底，全球栽培面积已达36.3万公顷，产量达430万吨。其中我国的栽培规模最大，栽培面积29.1万公顷，产量300.6万吨，分别占世界物猴桃栽培面积和产量的8

2、0.2%和69.9%。陕西作为中国最大的狒猴桃产区，栽培面积及产量分别占全国的30%和40%o然而，近年来随着骄猴桃栽培面积的不断扩大，掰猴桃病毒病的扩散和蔓延也成为威胁掰猴桃安全生产的隐患之一。目前，共鉴定出24种可侵染物猴桃的病毒，包括12种新病毒和12种已知的、狮猴桃是其新寄主的病毒，而在我国栽培掰猴桃中鉴定出的病毒有17种。舜猴桃感染病毒后通常会表现出叶片花叶、斑驳、褪绿和畸形等症状,严重时会引起树干枯死、树皮开裂、果实大小不均匀等症状，极大影响产量和质量，造成严重经济损失。有研究指出，狒猴桃病毒病在陕西不同地区，不同掰猴桃种及品种上广泛发生，且对陕西舜猴桃产量及品质造成了严重影响。植

3、物病毒是专性细胞内寄生物，只寄生在寄主的活细胞内，可通过营养繁殖世代传播，还可通过昆虫媒介从受病毒感染的植物传播到健康的植物，长期以来一直是农业生产可持续发展的制约因素。狒猴桃常通过嫁接繁殖，因此导致了病毒在林猴桃植株上的积累和传播。虽然化学药品在控制病毒病方面有潜在的应用，但培育无病毒植物才是有效控制它们的一种农业策略。目前，世界各地广泛种植无病毒植物，以控制许多重要经济作物的病毒性疾病，如块茎作物、草本观赏植物。从其他国家进口新品种及国家或地区之间交换育种材料也都需要无病毒材料。此外，植物种质资源保存也强调使用无病毒植物。因此，建立狮猴桃病毒脱除技术体系，制定“狮猴桃脱毒种苗生产技术规程”

4、具有重要的生产及经济意义，为后续舜猴桃脱毒苗的生产提供理论基础和技术支持。1.3 主要工作过程项目任务下达后，立即成立了猫猴桃无病毒种苗生产技术规程地方标准起草小组,组织起草小组对测试标准的意义和总体技术要求进行学习，制定了本标准的工作方案、技术路线、主要研究方法，标准的具体格式，确定了标准的总体框架和制定原则，明确了标准制定的具体工作计划和进度。起草小组通过多年自身试验研究资料的整理，结合对其他同行业无病毒种苗生产的数据资料的研究等方法，在总结起草单位多年来掰猴桃无病毒种苗培育和实践的基础上，全面开展了该标准的制定工作。1.4 起草单位标准由西北农林科技大学主导，杨凌梦绿生态农业有限责任公司

5、协助起草。1.5 起草组成员及任务分工姓名性别职务/职称工作单位任务分工刘占德男研究员西北农林科技大学总负责，主持制订张阿玲女博士生西北农林科技大学试验研究数据整理史遐女硕士西北农林科技大学试验研究数据整理刘艳飞女副研究员西北农林科技大学标准编制和修改贺浩浩男农艺师眉县果业技术推广服务中心实施试验高志雄男高级农艺师杨凌梦绿生态农业有限责任公司试验示范二、标准编写原则和研究内容包括标准编制所遵循的原则，以及标准结构、要素、技术要求、关键指标的确定依据和主要内容；地方标准修订项目还应当列出和原标准主要差异情况。本标准遵循适用性、先进性、统一性和协调性的原则，始终将经济效益、生态效益和社会效益有机结

6、合，协调统一。本标准共有8章，严格按照GB/T1.1-2020的规定编写，本标准包括封面、引言、名称、适用范围、术语和定义、要求等要素。主要内容包括标准的适用范围、术语和定义、脱毒原理、病毒检测与脱除、无病毒母本园的建立、无病毒苗木的繁育、无病毒苗木出圃及包装标识等。三、实证研究本标准实施验证工作开展了大量的试验，尤其是对于狒猴桃病毒检测与脱除方法进行了系统的研究，确定了关键技术指标。3.1 化学疗法脱毒处理利巴韦林浓度筛选对感染ACVA、ACVB和ACCRaV三种病毒的大籽掰猴桃试管苗使用0、25、50、75、100mg1.的利巴韦林增殖培养基上培养42d,对使用不同浓度利巴韦林进行处理的试

7、管苗生长状况进行观测并拍照记录，结果如图3-1所示，在处理的第14d,使用25、50、75mg1.利巴韦林处理植株的生长情况一致与对照植株相似。在处理的28d,随着利巴韦林浓度的升高，植株生长变化明显，利巴韦林浓度为50mg1.时，植株长势最好,利巴韦林浓度为100mg/1.时，植株部分叶片开始发黄，植株增殖受到轻微抑制。处理结束时(42d),试管苗生长变化明显，尤其在75、100mg1.利巴韦林浓度处理下，植物病毒感染的症状均表现在叶片上，且后者比前者症状更明显，植株的增殖受到了明显的抑制作用。与对照相比，50mg1.利巴韦林浓度下植株的长势最好。因此，得出随着利巴韦林浓度的加大，植株的生长

8、先增强后减弱，在50mg1.的利巴韦林浓度下长势最好，所以后续脱毒试验以25、50、75mg1.利巴韦林的浓度进行处理。14dCKZTR25TR50R75ctRlOO然28d尸，,742d，只铲1cm图3-1利巴韦林化疗后14、28和42天的离体大籽狒猴桃植株的生长情况Fig.3-1GrowthofinvitroActinidiamacrospe11naplantsafterchemotherapytreatmentswithribavirinfor14,28,and42days对照:离体大籽狒猴桃植株在标准生长室内培养;R25、R50、R75和RlOO:离体大籽狮猴桃植株在生长室中培养在添加

9、利巴韦林的增殖培养基上，浓度分别为25、50、75100mg1.oCK：InvitroActinidiamacrospe11naplantswereculturedinastandardgrowthroom;R2,R50andR75invitroActinidiamacrospe11naplantswereculturedinagrowthroomonMSmediumsupplementedwithribavirinat25,50and75mg1.,respectively3.2 基于化学疗法的脱毒处理对带毒试管苗营养生长和增殖的影响3.2.1 化学疗法脱毒处理对试管苗营养生长和增殖的影响将带

10、毒大籽试管苗外施0、25、50、乃mg/1.利巴韦林在增殖培养基上培养6周后，测量不同浓度利巴韦林处理时大籽狒猴桃试管苗营养生长和增殖。营养生长统计结果如表3-1所示，在使用4个浓度利巴韦林对植株进行脱毒处理时，植株在节间数、叶长、叶宽指标上没有出现显著性差异，但是50mg1.的利巴韦林处理对植株的株高、鲜重以及叶片数产生了显著影响。高浓度利巴韦林（50mg1.）处理产生了20.4个叶片，显著高于对照组的14.4个叶片，且在株高上达到了23.26mm,显著高于对照组的15.74mm,高于2575mg1.处理下的植株表现但不显著；节间长达到了最长的4.38mm,显著高于对照组和使用75mg1.的

11、利巴韦林处理植株；节间数高于其他处理但不显著；鲜重、干重及干重均显著高于对照处理；仅有叶宽叶长出现了低于其他处理的现象。不同脱毒处理对“大籽”物猴桃试管苗增殖结果的影响统计结果如图3-2所示,使用50mg1.的利巴韦林处理对植株的增殖数产生了显著影响，高浓度利巴韦林(5Omg1.)处理可以增殖5.4个植株，显著高于对照组和使用R25、75mg1.的处理的3、3.8、3.6个植株。所以，在正常处理6周的条件下，随着利巴韦林浓度的上升，5Omg1.利巴韦林处理下大籽掰猴桃植株综合生长指标最好，与处理6周时植株的生长情况一致。3.2.2 化学疗法结合热处理对试管苗营养生长和增殖的影响将带毒大籽试管苗

12、外施0、25、50、75mg1.利巴韦林在增殖培养基上培养2周，然后再经过4周的热处理后均可以成活。对该处理下试管苗营养生长和增殖状况进行测量并记录。试管苗的营养生长统计结果如表3-1所示,经过热处理后，使用25.50mg1.利巴韦林处理后的试管苗植株高度达到了24.27、25.34mm,显著高于对照组植株的13.42mm,使用75mg1.利巴韦林处理下试管苗株高为17.02mm,高于对照组植株株高但不显著。节间数、叶宽、鲜重、干重在不同浓度利巴韦林处理下和对照组无显著差异,但从增殖系数来看(图3-2),50mg1.浓度利巴韦林处理后的植株增殖系数最大为4.6,显著高于对照组和使用75mg1.

13、处理的3.4和3.2。说明伴随着热处理脱毒，当利巴韦林浓度增加到了75mg1.时，大籽狒猴桃植株增殖受到了抑制。图32不同脱毒处理对“大籽”狒猴桃试管苗增殖系数的影响Fig.3-2EffectsofdifferentdetoxificationtreatmentcombinationsonproliferationcoefficientofActinidiamacrospe11natubeseedlings注：T代表热处理(38光下16h,32C黑暗8h)；R25、R50和R75代表利巴韦林浓度25、50和75mg1.;表示无再生，下同。Note：Trepresentsheattreatmen

14、t(16hat38light,8hat32dark);R25,R50andR75representribavirin,concentrationsof25,50and75mg1.,t-representsnoregeneration,thesameasbelow.表3-1不同浓度利巴韦林处理和不同浓度利巴韦林处理结合热处理对大籽试管苗营养生长的影响Table3-1Effectsofdifferentconcentrationsofribavirintreatmentanddifferentconcentrationsofribavirincombinedwithheattreatmentont

15、hevegetativegrowthofActinidianacx)spermatubeseedlings处理Treatment株高/毫米Plantheight/mm节间数Nodenumber节间长/毫米Nodelength/mm茎粗/亳米Stemdiameter/mm鲜重/克Freshweight/g干重/克Dryweigh(g叶长/亳米1.eaflength/mm叶宽/毫米1.eafwidth/mm叶片数NumberofbladesCK15.740.84b3.6+0.16a2.66+0.33b0.99+0.05b0.35+0.04c0.05+0.00b17.711.54a13.22+1.15a14.40+1.38bR2522.701.88a4.170.17a3.580.38ab1.080.03ab0.480.03ab0.050.00ab20.600.82a13.8OO.85a15.171.16bR5023.261.61a4.10.23a4.380.46a1.25+0.08a0.520.03