室内空气中新型冠状病毒采样和分析技术规范.docx

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1、ICSCCS点击此处添加中国标准文献分2DB31上海市地方标准DB31TXXXXX-XXXX室内空气中新型冠状病毒采样和分析技术规范TechnicalSpecificationsofSamplingandAnalysisforSARS-CoV-2inIndoorAir点击此处添加与国际标准一致性程度的标识（征求意见稿）XXXX-XX-XX实施XXXX-XX-XX发布上海市市场监督管理局目次目次1前言II1范围12规范性引用文件13术语和定义14现场采样25样本包装、运输和保存46实验室检测57消毒与人员防护6参考文献8-XjL.刖本文件按照GB/T1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文

2、件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由上海市卫生健康委员会提出并组织实施。本文件由上海市疾病预防控制标准化技术委员会归口。本文件起草单位：上海市疾病预防控制中心、上海市公共卫生临床中心、上海华大医学检验所有限公司、上海市卫生健康委员会监督所。本文件主要起草人：肖萍、张莉君、陈健、倪骏、王凯、郑毅鸣、高剑晖、楚梦天、张莉萍、石磊、朱仁义、田靓、李晓静本文件参与起草人：方秉华、凌云、袁碧翡、申奥、封兵、丁一辰、石丽莎室内空气中新型冠状病毒采样和分析技术规范1范围本文件规定了室内空气中新型冠状病毒的现场采样、样本保存运输、实验

3、室检测、消毒与人员防护的技术要求。本文件适用于新型冠状病毒阳性感染者涉及的医院、方舱医院、集中隔离场所、住宅及公共场所室内空气中新型冠状病毒的采样和分析。其他场所可参照执行。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T18204.6公共场所卫生检验方法第6部分：卫生监测技术规范GB/T38517颗粒生物气溶胶采样和分析通则WS233病原微生物实验室生物安全通用准则Doc9284-AN905危险品航空安全运输技术细则新型冠状病毒肺炎防

4、控方案（第九版）新型冠状病毒实验室生物安全指南（第二版）医疗机构新型冠状病毒核酸检测工作手册（试行第二版）3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1新型冠状病毒severeacuterespiratorysyndromecoronavirus2,SARS-CoV-2基因组为线性单股正链的RNA病毒，全长约30kb的属冠状病毒；有包膜、颗粒呈圆形或椭圆形、直径60nm140nm,对紫外线和热敏感；人群普遍易感，以呼吸道飞沫和接触传播为主要途径、感染后或接种新型冠状病毒疫苗后可获得一定免疫力。3.2生物气溶胶bioaerosol含有生物性成分的固体或液体微粒悬浮于气体介质中形成的稳定分散系。

5、注：生物性成分包括细菌、病毒、真菌、胞子、毒素等。生物气溶胶粒子粒径在0.01m100m之间。来源：GB/T385172020,3.73.3方舱医院Modulehospital突发传染性疾病、重大灾情疫情发生时，政府依据需要临时征用具有高大、宽敞空间的既有建筑，同时综合集成医疗与医技保隙功能的可快速部署的临时救治场所。一般用于集中收治轻症患者。3.4集中隔离场所CentraIizedisolationpIace对密切接触者、入境人员、高风险区外溢人员及其他根据防控工作需要应隔尽隔的人员进行集中隔离的场所。3.5Ct值(或阈值循环数)Cyclethreshold在实时荧光反转录-聚合酶链式反应(

6、RT-PCR)反应过程中，每个反应体系中的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。3.6实时荧光反转录一聚合酶链式反应real-timefIuorescentReverseTranscription-PoIymeraseChainReaction,实时荧光RT-PCR一种定量实验技术,通过在反转录DNA聚合酶链式反应的扩增反应中加入荧光化学物质或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，结合相应的软件实时在线监控反应过程，通过对扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测和分析，实现对起始模板定量及定性的方法。4现场采样4. 1原理本标准采用旋风式采样方法，利用空气中粒子进入旋风体时的离

7、心力使得粒子与气流分离，粒子被连接在分离器末端的采集管内的采集液所捕集，进而获得空气样本中的病毒。4.2采样基本要求4. 2.1便携式大流量生物气溶胶采样器：采样流量2300Lmin,切割点为0.5MmL0,时间可自设。4. 2.2采样瓶/采样桶：仪器配套。4.2.3采集管：宜为一次性螺口管。采用非灭活病毒采集液，采集液用量根据仪器型号配置，确保采集相应体积空气后，管内剩余采集液体积能满足实验室检测所需溶液量。4.2.4从事标本采集的技术人员应当经过生物安全和检测技术培训，熟练掌握采集方法和操作流程，考核合格后方可上岗。4.3采样前准备4.3.1开展现场调查，了解被测场所室内环境布局，人员分布

8、情况以及集中空调通风系统设置情况，并根据调查结果制定采样计划。4.3.2根据采样任务和采样计划确定采样器、配件、辅助器材及其相应的数量。4.3.3采样前应检查采样器运行状况，对仪器进行期间核查和使用前校准。确保采样流量校准误差W5%o4.3.4采样前应对采样器材表面、气路管道与相应耗材等进行消毒处理，具体参见7.1.4要求。4.3.5采样前明确采样相关人员工作内容，并根据工作内容，准备相应的个人防护用品，具体参见7.2要求。4.4采样布点4.4.1布点原则公共场所室内环境布点，应按照GB/T18204.6中对应场所的要求进行布点。医院、集中隔离场所、方舱医院、住宅室内环境现场布点，宜按照表1的

9、要求进行布点。对于疑似存在生物危害或意外泄露的现场，可直接选择疑似生物气溶胶危害源最靠近的位置安装采样器。表1医院、集中隔离场所、方舱医院、住宅室内空气中新型冠状病毒检测布点要求室内实际使用面积（m,）布点数（个）布点方式100,500不少于3对角线5:500,1000每增加IOOOnI增设1个采样点，增加面积不足IoOom2时按100面计算。根据室内特点均匀布点4.4.2布点位置a）室内生物气溶胶采样器的采样口距离地面高度宜为LOmL5m,距离墙壁或障碍物不小于1.Omob）当室内有患者停留时，采样点高度应靠近人员呼吸带。c）当室内使用集中空调通风系统时，采样点宜设在气流组织的下风方向。d）

10、当室内为负压状态等特定环境时，采样点宜设在排风口前端区域。e）采样点应避开通风口、通风道等区域，并避免影响周围人员活动。4.5采样工况4.5.1当场所处于正常使用状态，采样时应关闭门窗；如现场使用集中空调通风系统时，应确保该集中空调通风系统维持原有运行状态。4. 5.2当场所处于关闭状态时，采样时应关闭门窗和集中空调通风系统。4.6现场采样4.6.1根据仪器说明要求，在无菌条件下将采集液中倒入采集管，正确连接采样气路与采集管。4.6.2在现场指定位置进行采样。采样时，应避免采样器周围有人为因素的气流干扰。4.6.3每个采样点至少采集一个样品。按仪器说明书操作，每个样品采集空气量宜至少达到8?I

11、onI3。4.6.4采样完毕后，取回采集管时，拧盖密封，并检查其完整状态，避免二次污染。4.6.5样品采集管上应标有清晰的唯一性标识。4.6.6现场采样期间，应填写采样记录，记录应包括但不限于以下内容：a）每个样本的唯标识。b）采样日期与时间。c）采样人员姓名（至少两人）。d）采样内容和采样点位置等。e）设备名称、型号、编号校准情况、采样切割点信息等。f）现场采样流速、体积等。g）采样过程记录以及环境干扰情况（如有）。h）样本保管人员姓名（如有）。4. 6.7现场采样时，应按照GB/T38517和新型冠状病毒肺炎防控方案中的要求分别设置一个现场空白标本和一个运输空白标本。5样本包装、运输和保存

12、4.1 样本包装4.1.1 新型冠状病毒空气样本运输包装分类属于B类，对应的联合国编号为UN3373,包装需符合国际民航组织文件Doc9284-AN905的PI650分类包装要求；通过其他交通工具运输的可参照以上标准包装。4.2 样本运输5. 2.1样本采集后应当尽快往实验室，采集后室温（小于25C）放置不宜超过4h。如果需要长途运输,应采用干冰保藏，难以获取干冰时，可使用冰袋、冰排等低温运输。5. 2.2样本应由专用车辆和专人运送至接收单位，并由运送人员和接收人员进行双签收。5. 2.3样本应由专人管理，准确记录样本来源、种类、数量，编号登记，采取有效措施确保样本的安全，严防发生误用、恶意使

13、用、被盗、被抢、丢失、泄露等事件。5.2.4样本运输人员需经生物安全知识及意外处置等培训。样本运输前需对外包装表面做无害处理，应保持清洁，不得将运输箱等外包装置于医疗废物包装袋内。5.3样本保存5.3.1采集管保存时应保持容器口朝上。避免光照、潮湿、干燥、受热、沾尘等因素的影响。5.3.2样本应设立专库或专柜单独保存，样本转入病毒样本专用专人保管冰箱。能在24h内完成检测的样本可置于4（2C8C）保存；24h内无法检测的样本应置于-70或以下条件保存（如无-70保存条件，则于-20C冰箱暂存）。6实验室检测6.1 检测基本要求6.1.1 实验室在功能区布置划分、仪器设备配置、试剂耗材准备等应符

14、合新型冠状病毒肺炎防控方案的要求。6.1.2 检测人员应当具有实验室工作经历以及相关专业技术技能，接受过新冠病毒相关检验检测技能培训、生物安全培训并取得上岗证。6. 2检测方法空气中新冠病毒检测，采用实时荧光RT-PCR方法检测，样本预处理、核酸提取与核酸扩增应符合新型冠状病毒肺炎防控方案的要求。6.3质量控制6. 3.1核酸检测实验室质控详细内容参照国家卫生健康委办公厅关于加强疾控机构新冠病毒核酸检测实验室质量控制的通知（国卫办疾控函（2021）548号）。7. 3.2由于检测样本为空气，对商品化核酸检测试剂盒中的内标判读结果不做要求。8. 4结果判定和报告9. 4.1对商品化核酸检测试剂盒

15、进行阳性结果判读时，Ct值判断以厂家提供的说明书为准。10. 4.2同一份样本中新冠病毒2个靶标（ORFIab、N）对应的荧光通道Ct值小于或等于试剂盒说明书规定值，且存在明显S型扩增曲线时，判定为阳性。11. 4.3出现单个靶标阳性，需重新检测样本，复检结果一致可判为阳性。6. 4.4阳性检测结果报告“检出新型冠状病毒核酸”，阴性检测结果报告“未检出新型冠状病毒核酸”。6.5剩余样本处置剩余样本按卫生健康行政部门要求，根据疫情防控需要和实验室生物安全有关要求进行处置。对确需保存的，应当尽快指定具备保存条件的机构按照相对集中原则进行保存，或送至国家级菌（毒）种保藏中心保藏；对无需保存的，由相关机构按照生物安全有关要求及时处理。7消毒与人员防护7.1 消毒7.1.1 使用的消毒产品应符合国家卫生健康部门管理要求，并在有效期内使用。7.1.2 采样前，采样器及相关部件等应进行灭菌处理，操作人员应进行手卫生